HPLC法测定扑感片中马来酸氯苯那敏的含量及含量均匀度

【摘要】  目的 建立用HPLC法测定扑感片中马来酸氯苯那敏含量及含量均匀度的方法。方法 采用DIKMA Diamonsil C18柱，以乙腈?水?三乙胺（体积比150∶850∶15）（用磷酸调节pH值至2.8±0.1）为流动相，检测波长为265 nm。结果 马来酸氯苯那敏在2.8～14.0 μg·mL-1范围内呈良好线性关系（r=0.9999，n＝8），平均加样回收率为100.39％，RSD＝1.45％。结论 本法简便、准确，为扑感片的质量控制提高了标准。

【关键词】  扑感片；马来酸氯苯那敏；含量均匀度

　　扑感片是由地胆草、苍耳草、山葡萄、紫苏油、对乙酰氨基酚及马来酸氯苯那敏制成的抗感冒复方制剂。其质量标准収载于卫生部药品标准中药成方制剂第20册，该标准采用滴定法测定对乙酰氨基酚含量及薄层扫描法测定马来酸氯苯那敏含量，两种方法的供试品溶液的前处理繁琐且易产生误差。为了更好地保证药品质量且控制片剂间的含量变异程度，本文采用HPLC法对该制剂中的马来酸氯苯那敏的含量及含量均匀度进行测定。结果表明本文方法简便、准确。

　　1  仪器与试药
    
　　安捷伦1100全自动高效液相色谱仪；UV?2201岛津可见紫外分光光度计；超声波清洗器（KUDOS）。马来酸氯苯那敏对照品（药品生物制品检定所，质量分数：99.3%，批号：100047-200305）；对乙酰氨基酚对照品（中国药品生物制品检定所，含量测定用，批号：100018-200408）；扑感片及缺马来酸氯苯那敏、对乙酰氨基酚的阴性对照样品（广东万年青制药有限公司）；乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯。

　　2  色谱条件与系统适用性试验
    
　　色谱柱：DIKMA  Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）；流动相：乙腈?水?三乙胺（体积比150∶850∶15），用磷酸调节pH值至2.8±0.1；检测波长：265 nm；柱温：35  ℃；流速：1.0 mL·min-1，进样量：20 μL。理论塔板数按马来酸氯苯那敏峰为11 640，分离度为28.04，见图1。

　　A.对照品  B供试样品  Ｃ.阴性样品　1.对乙酰氨基酚  2.马来酸氯苯那敏

　　图1  高效液相色谱（略）

　　Fig.1  HPLC chromatogram

　　3  方法与结果

　　3.1  对照品溶液的制备
    
　　精密称取105 ℃干燥3 h的马来酸氯苯那敏对照品约17.5 mg，置50 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（1）；精密称取对乙酰氨基酚对照品400 mg，置100 mL量瓶中，精密加入上述对照品溶液（1）20 mL，加流动相适量使溶解，并用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液10.0 mL置100 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

　　3.2  供试品溶液的制备
    
　　取本品10片，除去糖衣，精密称定，研细，取适量(约相当于本品1片)，精密称定，置100 mL量瓶中，加流动相约80 mL，超声处理（功率300 W，频率33 kHz）30 min，放冷，加流动相至刻度，摇匀，滤过，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得。

　　3.3  阴性对照溶液的制备
    
　　按处方比例及制备方法，制备缺马来酸氯苯那敏和对乙酰氨基酚的阴性样品溶液。按上述色谱条件进行检测。结果在对照品出峰位置未见其它杂质干扰峰（见图1），说明处方中其它成分对对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的测定无干扰。

　　3.4  线性范围的考察
     
　　精密吸取上述对照品贮备液2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，9.0，10.0 mL，分别置50 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，依次进样，按上述色谱条件测定峰面积。对照品浓度作为横坐标，峰面积作为纵坐标，得线性回归方程：Y=-2.124 8＋21.712 9X，r=0.9999。表明马来酸氯苯那敏在2.8～14.0 μg· mL-1范围内具有良好线性关系。

　　3.5  精密度试验
    
　　取同一份供试品溶液（批号为050801），重复进样6次，测定峰面积值，得RSD%为0.53%，表明精密度良好。

　　3.6  稳定性试验
    
　　取同一份供试品溶液（批号为050801），分别于配制后0，1，2，3，4，6，8，12，16，24 h进样，测定峰面积，得RSD%为0.34%（n=10），表明供试品溶液在24  h内稳定。

　　3.7  重复性试验
    
　　取同一批号供试品（批号为050801），分别平行称取6份，照样品含量测定项下测定，测得马来酸氯苯那敏标示量为115.50％，RSD为1.15％，表明重复性良好。

　　3.8  回收率试验
    
　　采用加样回收法，精密称取同一批已知含量的样品（批号为050801）15份，每份约相当于0.13 g，每5份1组，分别于各组分中精密加入马来酸氯苯那敏对照品贮备液4.0，5.0，6.0 mL，即80%，100%，120%的马来酸氯苯那敏对照品溶液（0.0695 mg·mL-1），按上述色谱条件测定，回收率，结果平均回收率为100.39%，RSD为1.45%。可见本法具有良好的回收率，见表1。

　　表1  马来酸氯苯那敏加样回收率试验（略）

　　Tab.1  Recovery test of chlophenamine maleate

　　3.9  样品测定
    
　　按上述测定方法对5批样品进行测定，计算含量，5批样品测定结果见表2。

　　3.10  样品含量均匀度测定
    
　　取本品1片，除去糖衣，研细，置100 mL量瓶中，其余步骤同供试品溶液制备项，以上述色谱条件按药典2005年版二部附录X E含量均匀度检查法测定，结果见表3。
 
　　表2  样品中马来酸氯苯那敏含量及含量均匀度测定结果（略）
 
　　Tab.2  Content and uniformity of samples

　　4  讨论

　　4.1  检测波长的选择
    
　　经过对马来酸氯苯那敏、对乙酰氨基酚对照品溶液的紫外吸收光谱测定及有关［1］，考虑到扑感片处方中对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏（0.7 mg ·片－1）的含量相差悬殊，为提高马来酸氯苯那敏定量的准确性，故把检测波长定为265 nm。在此波长下，马来酸氯苯那敏有较大的响应值，重现性好。

　　4.2  流动相pH值的选择
    
　　pH值对马来酸氯苯那敏的出峰时间及峰形影响较大。当pH值为3.0～3.5时，扑感片中的马来酸氯苯那敏和对乙酰氨基酚两个主成分色谱峰与阴性样品峰不能很好分离，且马来酸氯苯那敏的峰变宽，保留时间变长。当pH值为2.8±0.1，色谱峰得到较好的分离，峰形比较理想，马来酸氯苯那敏与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5［2］附录VD。流动相中使用三乙胺可有效改善前沿峰现象，经反复摸索，最终以乙?腈水?三乙胺（体积比150∶850∶15）（用磷酸调节pH值至2.8±0.1）为本法的流动相。

　　4.3  实验中分别对提取溶剂、提取时间进行考察：以无水乙醇、甲醇、流动相、水为提取溶剂，均超声30 min，经比较，以流动相作为提取溶剂为佳；再以流动相为提取溶剂，对同一批号样品的超声时间进行考察，选择超声15、30、45、60 min后处理的样品溶液分别进行分析，结果各样品含量基本接近，故选择超声时间30 min处理样品。

　　4.4  实验考察了5批扑感片中马来酸氯苯那敏的含量及含量均匀度，结果1批样品的A+1.80S大于15.0，A+S亦大于15.0。根据中国药典含量均匀度检查法规定［2］附录XE，可直接判该批样品不符合规定。分析其原因可能是扑感片为中西药复方制剂，其中药浸膏与化学药的质量比约为5∶1，而化学药马来酸氯苯那敏（0.7 mg ·片－1）和对乙酰氨基酚的质量比约为1∶57倍，再加上中药浸膏粘度较大，使马来酸氯苯那敏不易混匀。因此，建议厂家在生产此类中西药复方制剂时，适当添加些流动性较好的辅料并加强生产管理，以保证本品含量均匀度检查合格。

【参考文献】
  　　［1］ 张红贞，曹文冰，冉大强，等.HPLC法测定复方氨酚那敏颗粒中两种组分的含量［J］.齐鲁药事，2005，24（3）：145.

　　［2］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2005年版二部［S］.北京：化学出版社，2005.