高效液相色谱法测定复方儿茶胶囊中儿茶素含量

              作者：金在久， 郑云花， 郑光浩

【关键词】  高效

　　摘要：目的建立复方儿茶胶囊中儿茶素的含量测定方法。方法高效液相色谱法测定,YMC-PacKODS-A柱（5 μm,4.6 mm×250 mm）；0.04 mol・L-1枸橼酸N，N二甲基甲酰胺四氢呋喃（45∶8∶2）为流动相，流速为0.6 ml・min-1，检测波长为280 nm，柱温为35℃。结果儿茶素进样量在0.750~2.625 μg内与峰面积呈良好线性关系，相关系数为0.999 8，3批样品的平均回收率分别为98.64%，99.13%和100.17%。结论该方法操作简便、可靠、准确、可作为该制剂的质量控制。

　　关键词：复方儿茶胶囊；儿茶素； 高效液相色谱法

　　Determination of Catechin in Compositae Catechu Capsules by HPLC

　　Abstract:ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of catechin in Compositae Catechu Capsules. MethodsThe YMC-Pack ODS-A column（5 μm,4.6 mm×250 mm）was used. The mobile phase was 0.04mol・L-1 citric acidN,Ndimethylformamidetetrahydrofuran（45∶8∶2）.The flow rate was 0.6 ml・min-1, the detection wavelength at 280 nm and the column temperature at 35℃.ResultsThe method proved to be in good linearity of catechin at the range of 0.750~2.625 μg，r=0.999 8. The average recovery of the three kinds of samples were 98.64%,99.13% and 100.17%.ConclusionThe method appeared to be simple,reliable,accurate and can be used for the quality control of the preparation.

　　Key words:Compositae Catechu Capsules；Catechin；HPLC

　　复方儿茶胶囊是由中药儿茶粉、维生素B2、烟酸等组成，主要用于胃、十二指肠溃疡、胃炎、消化道出血、口腔溃疡及酒后胃痛等症。该产品现行的质量控制方法是以维生素B2含量测定做为质量控制的依据。作者经HPLC预试，确认儿茶素含量较高，且儿茶素类化合物具有明显的清除体内自由基、抗癌、抗炎、抗突变、抗衰老及改善肝功能等生物活性［1］。笔者认为该产品中儿茶素成分更准确地反映制剂的实际疗效。因此，本实验以儿茶素为对照品，在2000年版《药典》方法基础上流动相不变，仅改变保留时间即可达到基线分离。结果可靠，方法简便，重现性好，可作为该制剂的质量控制。

　　1 仪器和试药

　　SCL-10AVP型高效液相色谱仪（日本岛津公司），包括LC-10AT输液泵，CLASS-10LC工作站；SPD-10A紫外检测器；CTO-10AS柱温箱，分析柱为YMC Paek ODS-A(250 mm×4.6 mm,5 μm；YMC Co,Lid,Japan)；超声波发生器。对照品：儿茶素为自制，纯度＞98%；甲醇为色谱纯；水为二次蒸馏水；枸橼酸-N，N二甲基甲酰胺为分析纯（北京化学试剂公司产品）；四氢呋喃为色谱纯（天津四友）；复方儿茶胶囊（吉林天河药业有限公司产品，批号：20030328、20030705、20031116）。

　　2 方法与结果

　　2.1  色谱条件色谱柱：YMC-Pack ODS-A柱（250 mm×4.6 mm，5 μm；YMC Co,Lid, Japan）；流动相：0.04 mol・L-1枸橼酸N，N二甲基甲酰胺四氢呋喃（45∶8∶2）；检测波长：280 nm；流速：0.6 ml・min-1，柱温：35℃。理论板数按儿茶素峰不低于3 000。

　　2.2 实验溶液制备

　　2.2.1 对照品溶液的制备精密称取儿茶素对照品适量，加甲醇水（1∶1）制成每毫升含儿茶素0.15 mg的对照品溶液，即得。

　　2.2.2 供试品溶液的制备将3批样品分别取内容物粉末0.25 g，精密称定，置50 ml量瓶中，加甲醇水（1∶1）40 ml，超声处理20 min，加甲醇水（1∶1）至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得。

　　2.2.3 空白样品溶液的制备按处方配比投入缺儿茶的其它药物和辅料，按“3.2”项下方法制成空白样品溶液。

　　2.3 方法学考察

　　2.3.1 线性关系考察精密吸取上述儿茶素对照品溶液5，7.5，10，12.5，15，17.5，20 μl，分别注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定。以对照品进样量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线并回归处理，结果表明，儿茶素在0.75~2.63 μg范围内线性关系良好。回归方程为Y=3.784×105-2.050 7×104X，r=0.999 8。

　　2.3.2 稳定性和精密度实验精密吸取同一批（批次20031116）样品溶液，在24 h内每隔4 h测定一次，重复进样5次，每次进样10 μl，样品中儿茶素峰面积积分值的RSD为1.4%。同时测得精密度实验结果RSD为0.73%（n=5）。

　　2.3.3 重现性实验取同一批（批次20031116）样品5份，精密称定，分别按“3.2”项下方法制备成5份样品液，测定，儿茶素的平均百分含量，RSD为1.2%。

　　2.3.4 回收率实验取儿茶素对照品溶液（0.15 g/L）适量，分别加入到一定量已知含量的3批样品中，按“3.2”项进行处理。结果表明，儿茶素的平均回收率分别为98.64%（RSD为1.22%）；99.13%（RSD为1.57%）；100.17%（RSD为1.65%）。

　　2.3.5样品测定按“3.2”项下操作制备3批样品溶液，取样品溶液10 μl，以色谱条件项下进行测定。结果见表1，图1。表1 样品中儿茶素的含量测定结果（略）                                                       
　　3讨论

　　3.1  提取方法的选择儿茶素为黄酮类化合物，它的母核上连有5个酚羟基，增加了它在水和强极性溶剂中的溶解度，而且儿茶药材本身为水煎液的浓缩浸膏，因而采用强极性溶剂提取。曾采用甲醇、水，甲醇水（1∶1）作为提取溶剂。结果表明，采用甲醇水（1∶1）作为超声提取效果最佳，并可将样品充分溶解。

　　3.2  流动相及保留时间的选择曾选用过甲醇水，乙腈水及配比相应的醋酸和磷酸水液作流动相，均未得到满意效果，后选用药典方法比例［2］，又几经调整保留时间，方得到较好分离。

　　该方法简单，快捷，重复性好。为复方儿茶制剂的质量控制提供了可靠的依据。

　　：

　　［1］刘超,陈若芸.儿茶素及其类似物的化学和生物活性研究进展［J］.中国中药杂志，2004，29（10）：1017.

　　［2］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学出版社，2000:8.