仙珍骨宝胶囊中淫羊藿苷薄层色谱鉴别方法的筛选
【关键词】 仙珍骨宝胶囊；,,淫羊藿苷；,,薄层色谱法
摘要：目的建立仙珍骨宝胶囊中淫羊藿苷的薄层色谱（TLC）鉴别方法。方法对几种TLC法进行筛选实验。结果优选出最佳方法：用0.1 mol/L Na2HPO4溶液配制成的0.3% CMCNa溶液制成的硅胶G薄层板，以醋酸丁酯∶甲酸∶水（1.3∶1∶1）的上层溶液为展开剂。结论应用该法色谱斑点较多，无拖尾，背景干扰较少，分离效果较好，重现性好。
关键词：仙珍骨宝胶囊； 淫羊藿苷； 薄层色谱法
Screening on TLC Identification Methods for Icarrin in Xianzhengubao Capsules
Abstract：ObjectiveTo establish the identification methods for icarrin in Xianzhengubao Capsules.Methods Several methods by TLC were described.ResultsThe optimum method was obtained: applying silica gel G plate prepared by conc. 0.3% CMCNa contained conc.0.1mol/L Na2HPO4 ,using supernatant layer of the mixture of butyl acetatemethanolH 2O（1.3∶1∶1）as the mobile phase.ConclusionTLC identification is highly specific with good reproduciblility, the spots developed are clear and the blank test show no intefrence.
Key words：Xianzhengubao Capsules； Icarrin； TLC
仙珍骨宝胶囊是由淫羊藿、蛇床子等药材制成的中药复方制剂,主要用于老年骨质疏松症，其君药淫羊藿的主要有效成分为淫羊藿苷。本文采用四种不同的提取分离方法制备供试品溶液，并试用不同的薄层板及展开剂对淫羊藿苷薄层鉴别方法进行筛选。
1 仪器、样品及试剂
硅胶G、硅胶H（青岛海洋化工厂）；高效硅胶G板（市售）；聚酰胺薄膜（广东医学院提供）；淫羊藿苷（批号：737-9203，药品生物制品检定所提供）；仙珍骨宝胶囊样品、阴性对照样品及淫羊藿对照药材均由珠海万顺制药有限公司提供；有机溶剂均为分析纯。
2 薄层板的制备与处理
硅胶G板：①取硅胶G与0.5%CMCNa溶液混合，研磨均匀后辅板；②取硅胶G与用0.1 mol/L Na2PO4溶液配制成的0.3%CMCNa溶液混合，研磨均匀后辅板。
硅胶H板：取硅胶H与0.5% CMCNa溶液混合，研磨均匀后辅板。将上述制备好的薄层板室温晾干，临用前连同高效硅胶G板于110℃活化1 h。
3 样品溶液的制备
3.1 供试品溶液的制备
3.1.1 供试品溶液1取供试品内容物3 g，置索氏提取器中，加入氯仿80 ml提取3 h。提取液弃去，药渣挥干氯仿后，加70%乙醇80 ml提取1 h。提取液置水浴上蒸干，残渣加乙醇5 ml使溶解，即得。
3.1.2 供试品溶液2取供试品内容物3 g，置索氏提取器中，加氯仿80 ml，提取3 h。提取液弃去 ，药渣挥干氯仿，加醋酸乙酯80 ml提取1 h。提取液置水浴蒸干，残渣加乙醇5 ml使溶解，即得。
3.1.3 供试品溶液3取供试品内容物3 g，加70%乙醇80 ml回流1 h。滤过，滤液用石油醚（60～90℃）提取3次（50，30，10 ml），石油醚液弃去，乙醇液置水浴上蒸干，残渣加乙醇2 ml使溶解，即得。
3.1.4 供试品溶液4取供试品内容物3 g，置索氏提取器中，加氯仿80 ml提取3 h。提取液弃去，药渣挥干氯仿，加70%乙醇80 ml提取4 h，提取液置水浴上蒸干，残渣加水30 ml使溶解，加于聚酰胺柱（14～30目，2 g，内径10～15 mm）上，先用水250 ml洗脱，再用30%乙醇100 ml洗脱，收集乙醇洗脱液部分，置水浴上蒸干，残渣加乙醇2 ml使溶解，即得。
3.2 淫羊藿苷对照品溶液的制备
取淫羊藿苷对照品，加乙醇使溶解，制成每毫升含0.35 mg溶液，即得。
3.3 对照药材溶液的制备取淫羊藿对照药材4 g，按工艺制成浸膏，再按上述供试品溶液1制备方法同法制成对照药材溶液。
3.4 阴性对照溶液的制备
取缺淫羊藿的阴性样品按上述供试品溶液1制备方法同法制成阴性对照溶液。
4 实验方法及结果
方法1：取供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液和阴性对照溶液各5 μl，分别条带状（1 mm×8 mm)点于硅胶G薄层板（方法①）上，以醋酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水（5∶3∶1∶1）为展开剂，层析缸用展开剂预先平衡15 min，上行展开，展距为8 cm，温度在25℃以上，控制湿度在18%~47%范围内，取出，晾干，喷以5%氯化铝溶液，105℃加热数分钟后，置UV 365 nm下检视，结果色谱斑点少，背景干扰较大，分离效果较差。
方法2：取样同上，分别条带状（1 mm×8 mm)点于硅胶G薄层板（方法①）上，以氯信∶甲醇（9∶1）8 ml加2 ml甲酸为展开剂，层析缸用展开剂预先平衡15 min，上行展开，展距为8 cm，温度在25℃以上，控制湿度在18%~47%范围内，取出，晾干，喷以5%氯化铝溶液，105℃加热数分钟后，置UV 365 nm下检视，结果色谱斑点少，背景干扰较大，分离效果较差。
方法3：取样同上，分别条带状（1 mm×8 mm)点于硅胶G薄层板（方法①）上，以氯仿∶甲醇（8∶2）为展开剂，层析缸用展开剂预先平衡15 min，上行展开，展距为8 cm，温度在25℃以上，控制湿度在18%~47%范围内，取出，晾干，喷以5%氯化铝溶液，105℃加热数分钟后，置UV 365 nm下检视，结果色谱斑点少，背景有干扰，分离效果一般。
方法4：取样同上，分别条带状（1 mm×8 mm)点于硅胶G薄层板（方法①）上，以醋酸丁酯∶甲酸∶水（1.3∶1∶1）上层液为展开剂，层析缸用展开剂预先平衡15 min，上行展开，展距为8 cm，温度在25℃以上，控制湿度在18%~47%范围内，取出，晾干，喷以5%氯化铝溶液，105℃加热数分钟后，置UV 365 nm下检视，结果斑点较多，无拖尾，背景干扰较少，分离效果较好。
方法5：取样同上，分别条带状（1 mm×8 mm)点于硅胶G薄层板（方法①）上，以醋酸丁酯∶丁酮∶甲酸∶水（10∶6∶6∶1）为展开剂，层析缸用展开剂预先平衡15 min，上行展开，展距为8 cm，温度在25℃以上，控制湿度在18%~47%范围内，取出，晾干，喷以5%氯化铝溶液，105℃加热数分钟后，置UV 365 nm下检视，结果斑点少，背景干扰较大，分离效果一般较好。
方法6：取样同上，分别条带状（1 mm×8 mm)点于硅胶H板上，以醋酸丁酯∶丁酮∶甲酸∶水（10∶1∶1∶1）为展开剂，层析缸用展开剂预先平衡15 min，上行展开，展距为8 cm，温度在25℃以上，控制湿度在18%~47%范围内，取出，晾干，喷以5%氯化铝溶液，105℃加热数分钟后，置UV 365 nm下检视，结果斑点少，无拖尾，背景有干扰，分离效果较一般。
方法7：取样同上，分别条带状（1 mm×8 mm)点于硅胶H板上，以甲醇∶丁酮∶氯仿∶水（4∶6∶6∶1）为展开剂，层析缸用展开剂预先平衡15 min，上行展开，展距为8 cm，温度在25℃以上，控制湿度在18%~47%范围内，取出，晾干，喷以5%氯化铝溶液，105℃加热数分钟后，置UV 365 nm下检视，结果斑点少，无拖尾，背景干扰较大，分离效果较差。
方法8：取样同上，体积各1 μl，分别条带状（1 mm×8 mm)点于聚酰胺薄膜上，以甲醇为展开剂，层析缸用展开剂预先平衡15 min，上行展开，展距为8 cm，温度在25℃以上，控制湿度在18%~47%范围内，取出，晾干，喷以5%氯化铝溶液热风吹干，置UV 365 nm下检视，结果斑点较少，背景有干扰，分离效果较差。
方法9：取样同上，体积各1 μl，分别条带状（1 mm×8 mm)点于聚酰胺薄膜上，以70%甲醇为展开剂，层析缸用展开剂预先平衡15 min，上行展开，展距为8 cm，温度在25℃以上，控制湿度在18%~47%范围内，取出，晾干，喷以5%氯化铝溶液热风吹干，置UV 365 nm下检视，结果斑点较少，背景干扰较大，分离效果较差。
方法10：取样同上，体积各1 μl，分别条带状（1 mm×8 mm)点于聚酰胺薄膜上，以氯仿∶丙酮∶甲醇（2∶4∶4）为展开剂，层析缸用展开剂预先平衡15 min，上行展开，展距为8 cm，温度在25℃以上，控制湿度在18%~47%范围内，取出，晾干，喷以5%氯化铝溶液热风吹干，置UV365 nm下检视，结果斑点较少，背景干扰较大，分离效果较差。
结果见表1。表1 不同供试品溶液制备方法（略）
表1的实验结果表明取供试品溶液4，点于用0.1 mol/L Na2PO4溶液配制成的0.3% CMCNa溶液制成的硅胶G薄层板上，以醋酸丁酯∶甲酸∶水（1.3∶1∶1）的上层溶液为展开剂，按文中所述的展开方式、显色方法鉴别仙珍骨宝胶囊中淫羊藿苷，效果较好。
5 讨论
淫羊藿苷为黄酮苷类化合物，可溶于水、甲醇、乙醇、醋酸乙酯，不溶于醚、苯、氯仿［1］。文中用氯仿除去香豆素类成分，其醇提液上聚酰胺柱，用水洗脱以除去糖等水溶性杂质，再用30%的乙醇洗脱，收集该部分洗脱液制成供试品溶液，试用优选出的最佳色谱条件，可较好地鉴别制剂中的淫羊藿苷。
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［1］杨 云，冯卫生.中药化学成分提取分离手册［M］.北京：医药出版社，1998：329.
