中药新药复方天麻头风胶囊中白芷的含量测定研究
作者：李海燕，岑志芳，林玉明
【关键词】 复方天麻头风胶囊；,,高效液相色谱；,,欧前胡素
摘要：目的建立高效液相色谱(HPLC)法测定中药新药复方天麻头风胶囊中白芷所含有效成分欧前胡素的含量。方法采用SinoChrom ODSAP （5 μm，4.6 mm×150 mm）色谱柱，流动相为甲醇水（65∶35） ，检测波长为248 nm。结果在0.3～2.63 μg范围内有良好的线性关系，r＝0.999 8，平均回收率为99.20%，RSD为1.19%。结论该法灵敏度高、专属性强、重现性好，并通过对数批样品含量进行考察，可作为制剂质量控制指标之一。
关键词：复方天麻头风胶囊； 高效液相色谱； 欧前胡素
复方天麻头风胶囊是由天麻、白芷、川芎、葛根等组成的中药新药复方制剂。具有祛风，强筋骨的功效，用于顽固性头痛，手足麻木，慢性腰腿酸痛等。方中主药是白芷，具散风除湿，通窍止痛的功能。白芷含挥发油及多种香豆精衍生物：白当归素、白当归醚、氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素、珊瑚菜素、花椒毒素、7-去甲基软木花椒素等。而欧前胡素、异欧前胡素是白芷的特征成分，其含量测定方法较多，报道有薄层扫描法［1］及高效液相色谱法［2］， 本实验采用了高效液相色谱法，建立了一种灵敏、专属性强、重现性好的方法，测定制剂中欧前胡素的含量。
1 仪器与试药
Waters高效液相色谱仪：1525Binary Pump，Rheodyne7725iw/1500Mount， 2487Dual Wavelength UV Detecto，Breeze data management software；色谱柱：SinoChrom ODSAP （5μm，4.6 mm×150mm），大连依利特分析仪器有限公司；欧前胡素对照品：由药品生物制品检定所提供，批号110826200307（供含量测定用）；甲醇为色谱纯（德国Merck corporation）；水为重蒸馏水；其他试剂均为分析纯；复方天麻头风胶囊（广东怡康制药有限公司中试产品，批号040401， 040402， 040403， 040501， 040502， 050301， 050302， 050303 ，050401， 050402）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：SinoChrom ODSAP柱（5μm，4.6 mm×150 mm），流动相为甲醇水（65∶35），流速为1.0 ml/min，检测波长为248 nm。在此条件下，所得色谱图见图1。结果表明欧前胡素色谱峰分离良好，且本品中其他药材对欧前胡素的测定无干扰。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取欧前胡素对照品，用甲醇配制成每毫升约含0.15 mg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备取本品细粉约0.5 g，精密称定，置三角瓶中，加乙醚30 ml，加热回流1 h滤过，洗涤滤渣与滤纸；滤渣与滤纸置三角瓶中，如上法进行2次提取，合并提取液，低温挥干，残渣加甲醇使溶解，定量转移到5 ml量瓶中，即得。
2.4 线性关系的考察精密吸取欧前胡素对照品溶液0.150 mg /ml，分别进样2，5，10，12.5，15，17.5 μl，按上述色谱条件注入液相色谱仪，测定。以峰面积浓度进行线性回归。结果见表1。表1 线性关系实验结果（略）
以峰面积积分值为纵坐标，欧前胡素的量为横坐标绘制标准曲线，其回归方程为：y ＝ （5.37e +0.7）x +2.45e+0.04，r＝0.999 8。
2.5 精密度实验精密吸取对照品溶液10μl，重复进样5次，测定其峰面积。结果见表2。表2 精密度实验结果（略）
2.6 稳定性实验取同一供试品溶液，于0，1，3，5，7 h进样。结果见表3。表3 稳定性实验结果（略）
2.7 重现性实验
精密称取同一批供试品，按供试品溶液的制备方法制备5份供试品溶液，进样10 μl。结果见表4。表4 重现性实验结果（略）
2.8 回收率实验采用加样回收法，精密称取已知含量样品（1.02 mg /g）0.25 g，定量加入浓度 0.251 mg /ml的欧前胡素对照品1 ml，按供试品溶液的制备方法配制供试品溶液，进样10 μl，测定峰面积，计算回收率。结果见表5。表5 回收率实验结果（略）
2.9 样品测定取10批样品，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液和样品溶液各10 μl，分别进样，测定峰面积，计算欧前胡素的含量。结果见表6。表6 10批样品含量测定结果（略）
3 讨论
3.1 提取溶剂的选择
根据［2~4］选择乙醚为提取溶剂，供试品溶液用甲醇为定容溶剂。
3.2 供试品提取方法的选择
实验比较了1次回流、2次回流和索氏提取3种提取方法，结果索氏提取所制备的供试品溶液含量较高，但因2次回流后提取欧前胡素的量与索氏提取的量无明显差异，为使操作简便，故正文选择2次加热回流作为提取方法。
3.3 检测波长的选择
参照文献［5，6］选用248 nm为检测波长。
3.4 流动相的选择
根据文献［5，7~9］，用甲醇水=55∶45，甲醇水=65∶35做流动相进行实验，结果甲醇水=65∶35为流动相时，样品峰与干扰峰完全分开，峰形对称，且阴性无干扰。故选择甲醇水=65∶35为流动相。
3.5 样品含量低限的确定
经实验考察不同产地的白芷药材，我们暂定白芷药材的欧前胡素(C16H14O5)含量不得少于0.30 mg/g。我们在工艺研究实验中测定，欧前胡素在制剂中平均转移率约为50%，在处方中制成1 000片的白芷投料量为2 471 g，按白芷含量低限，成品中的含量限度应为：（2 471×0.30×50%）/1 000＝0.37 mg /片。根据各批样品测得结果，每片成品所含欧前胡素量在0.55~1.00 mg /片之间，所以暂定头风痛片中含欧前胡素的量不得少于0.35 mg /片。我们将在生产中继续积累相关数据，制定更为合理的含量限度。
文献：
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