正交实验法优选六味木香片的醇提工艺
作者：卢智玲，汪国华，毛友昌
【摘要】 目的优选乙醇回流法提取六味木香片中醇溶性成分的最佳工艺。方法采用正交实验法，以固含量和胡椒碱含量为考察指标，对乙醇浓度、回流次数、乙醇用量等影响因素进行研究。结果确定最佳工艺为加10倍量80％乙醇，回流提取3次，1h/次。结论应用该工艺提取效率高，稳定性好，适于化生产。
【关键词】 六味木香片； 正交设计； 胡椒碱； 醇提工艺
Abstract：ObjectiveTo optimize the conditions for the alcohol extraction of LiuWeiMuXiang tablet. MethodsWith the extract yield and piperyl piperidine content as index, orthogonal test was used to evaluate the influence factors, including the concentration of alcohol, the extracting time and the amount of alcohol. ResultsThe optimum process was 10 times of 80% alcohol ,extracting 3 times and 1 hour each time. ConclusionThe process is efficient ,stable and suitable for industrial production.
Key words：LiuWeiMuXiang tablet； Orthogonal test; Piperyl piperidine; Alcohol extraction
六味木香胶囊［1］源于蒙古族验方，由木香、豆蔻、荜茇、栀子、石榴皮、闹羊花等6味组成，具有开郁行气、止痛的功效，但该剂型的缺点是未经提取，粉末直接入药，导致服用量偏大，6粒/次，患者顺应性差。本研究根据处方中六味中药的有效成分及活性部位，采用多种提取方法相结合，对六味木香胶囊进行剂型改革，制成六味木香片，将服用量减至2片/次［2］。由于木香、豆蔻、荜茇所含挥发油均为有效成分，必须先对其提取完全后，提油后药渣再与闹羊花合并，考虑其均含有醇溶性有效成分，用乙醇回流法进行提取，以固含量和荜茇中活性成分胡椒碱为指标成分，运用正交实验设计进行醇提工艺的优选研究。
1 材料与仪器
1.1 材料
木香、豆蔻、荜茇及闹羊花均购于江西省中医药剂科，经江西中医学院中药鉴定教研室鉴定；胡椒碱含量测定用对照品（药品生物制品检定所，批号0775-9702）；乙醇（上海振兴化工一厂，分析纯）；甲醇（德国MERCK公司，色谱纯）；水为重蒸水。
1.2 仪器
P200Ⅱ高效液相色谱仪，UV200Ⅱ紫外检测器（大连依利特分析仪器有限公司）；METTLER AE240型十万分之一天平（瑞士）；KQ3200超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；旋转蒸发浓缩仪（上海申生科技有限公司）。
2 方法与结果
2.1 正交实验设计根据预实验，回流提取的效率与乙醇浓度、回流次数以及乙醇用量有关，固定回流时间为1 h，以固含量和有效成分胡椒碱的含量为指标，采用L9(34) 正交实验表对以上3个因素进行考察。因素水平列于表1。表1 乙醇回流提取因素水平（略）
2.2 胡椒碱的含量测定
2.2.1 色谱条件
色谱柱：HyperODSC18(4.6 mm×200 mm)；流动相：甲醇?水（77∶23）；检测波长：343 nm；柱温：室温；流速：1.0 ml/min；进样量：10 μl；理论塔板数按胡椒碱计不低于2 000。
2.2.2 对照品溶液的制备精密称取胡椒碱对照品5.32 mg置于50 ml棕色量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。
2.2.3 供试品溶液的制备取木香、豆蔻、荜茇三味提油后烘干的药渣17 g，加闹羊花5 g，按正交表条件进行回流提取，将回流液滤过，回收乙醇，浓缩，真空干燥得干浸膏。取相当于0.25 g荜茇药材的干膏［3］，精密称定，置100 ml棕色量瓶中,加无水乙醇约80 ml，超声处理至少30 min，放置至室温后，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过。
2.2.4 标准曲线的制定
分别精密吸取胡椒碱对照品溶液1，2，5，7.5，10，12.5μl，注入高效液相色谱仪，记录峰面积。以胡椒碱的量为横坐标，峰面积为纵坐标，求得回归方程为：Y=1 594.8X－8.2，r=0.999 9。表明胡椒碱在0.106 4～1.330 μg范围内线性关系良好。
2.2.5 精密度实验
取胡椒碱对照品溶液，在上述色谱条件下连续测定6次，以峰面积RSD为0.77%。
2.2.6 稳定性实验
取同一供试样品，分别在每隔2 h进样，测定峰面积，结果10 h内基本稳定。
2.3 正交实验结果取木香、豆蔻、荜茇3味提油后烘干的药渣17 g，加上闹羊花5 g，按正交表条件进行回流提取，将回流液滤过，回收乙醇，浓缩，真空干燥得干浸膏，称重，计算固含量。同时，采用HPLC法测定9份干膏中胡椒碱含量，色谱条件同前所述，结果见表2。固含量方差分析结果见表3，胡椒碱含量方差分析结果见表4。表2 L9(34) 回流提取正交实验（略）表3 固含量方差分析结果（略）
表4 干膏胡椒碱含量方差分析结果（略）
3 讨论
从固含量看，影响因素主次顺序为B﹥C﹥A，由于B因素（回流次数）对结果有显著影响，其水平优势为B3＞B2＞B1。
从峰面积百分比看，影响因素主次顺序为A﹥B﹥C，其中A、B因素对结果有极显著影响，C因素对结果有显著影响，其水平优势为A3＞A2＞A1,B3＞B1＞B2，C3＞C1＞C2，最佳组合为A3B3C3，综合两方面考虑，最后确定回流提取最佳工艺为A3B3C3，即用10倍量80％乙醇，回流提取3次，1h/次。
按照最佳回流工艺条件A3B3C3重复提取，工艺稳定，结果可靠。
【】
［1］WS3-169（z-159）-2001（z）,国家药品监督管理局国家药品标准［S］.
［2］卢智玲，汪国华，刘华栋，等.RP-HPLC测定六味木香片中栀子苷的含量［J］.中成药,2005,27(2):218.
［3］国家药典委员会.药典，Ⅰ部［S］.北京:化学出版社,2005:163.
