淫羊藿总黄酮的提取方法研究
【摘要】 目的：考察选择提取淫羊藿总黄酮的最佳方法，研究超声法、超临界萃取法、半仿生提取法、索氏提取法、回流法、水煎煮法六种提取方法提取淫羊藿中总黄酮的提取效率。方法：采用754分光光度计测定样品中总黄酮的含量。结果：用索氏提取法得的总黄酮含量最高。结论：超声提取法是合适的提取方法。
【关键词】 淫羊藿 总黄酮 提取
A study on the Extractive Technology of Total Flavone from Herba Epimedii
【Abstract】Objective:To study four technological process,ultrasonic wave extraction,soxhlet’S extractor,circumfluence ,and water extraction,a better technological condition to extracting gogal flavone from Herba Epimedii was obtained.Methods:By using the 754 type’s UV spectrophotometer ,analyzing the content of total flavone of each sample.Results:Using soxhlet’s extractor ,the content of total flavone is the highest among four technological process.Concusion:A better technological condition to extracting total flavone from Herba Epimedii is ultrasonic wave extraction.
【Key words】Herba Epimedii total flavone extract
淫羊藿（Epimedium brvicornum Maxim）属小檗科植物，性温，味甘辛，归肝、肾经，临床上常用于阳痿遗精，筋骨酸软，风湿痹痛，麻木拘挛及更年期高血压[1]。化学成分研究显示，淫羊藿的主要有效成分是淫羊藿总黄酮（淫羊藿苷、淫羊藿次苷）和淫羊藿多糖，其总黄酮具有增加脑血流量和冠脉流量、抗肿瘤、抗氧化和增强机体免疫力等功能[2]。为了选择确切的方法，我们用70%乙醇进行了超声法、超临界萃取法、索氏提取法、回流法、半仿生提取法的比较研究，同时进行了水煎煮法的对比实验，从中找出准确、简便、快速的提取方法。
1 实验材料
1.1 仪器 754紫外光栅分光光度计（上海第三分析仪器厂），TG328A（s）型分析天平（上海精科天平厂），PHS-3C型精密酸度计（上海电光器件厂），HA121-50-01超临界萃取装置（江苏南通华安超临界萃取有限公司）。
1.2 药品 淫羊藿（购于黄河药材市场）经甘肃中医学院生药教研室鉴定为植物淫羊藿；淫羊藿苷标准品（购于药品生物制品检定所）。
2 实验方法与结果
2.1 标准曲线制备 精密称取干燥至恒重的淫羊藿苷标准品4.6mg置25ml容量瓶中，以70%乙醇定容至刻度。再分别吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml置于25ml容量瓶中，分别以70%乙醇定容至刻度。以70%乙醇为空白，在270nm处测吸收度，以吸收值（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标，绘制标准曲线。将所得数据进行统计处理，得回归方程：A=0.049270C＋0.039796，r=0.9991，线性范围为3.7～18.4μg/ml。
2.2 提取方法
2.2.1 超声提取 取淫羊藿粗粉1g加70%乙醇20ml，超声提取1h，提取液过滤，置于25ml容量瓶中，并用70%乙醇定容至25ml容量瓶中，再吸取2ml到10ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，再吸取1ml至25ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，摇匀，供含量测定。
2.2.2 索氏提取 取淫羊藿粗粉1g，置于索氏提取器中，加70%乙醇100ml，抽提6h，加收乙醇至干，残渣用70%乙醇溶解，滤过后以70%乙醇定容至25ml容量瓶中，再吸取2ml到10ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，再吸取1ml到25ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，摇匀，供含量测定。
2.2.3 回流法 取淫羊藿粗粉1g，用20ml 70%乙醇回流提取2次，每次1h，合并药液，回收乙醇至干，用70%乙醇溶解，滤过后以70%乙醇定容至25ml容量瓶中，吸取2ml到10ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，从中吸取1ml到25ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，摇匀，供含量测定。
2.2.4 水煎煮法 取淫羊藿粗粉4g，加水80ml浸泡1.5h，煎煮2次，每次1h，滤过合并药液，水浴蒸干，残渣用70%乙醇溶解，滤过后定容到100ml容量瓶中，再吸取2ml到10ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，再吸取1ml到25ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，摇匀，供含量测定。
以上实验各重复3次，出总黄酮含量平均值。
2.2.5 半仿生提取 取淫羊藿粗粉按L9（34）正交表，以淫羊藿苷含量为指标进行正交实验。滤过合并药液，水浴蒸干，残渣用70%乙醇溶解，滤过后定容到25ml容量瓶中，再吸取5ml到25ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，再吸取2ml到10ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，再吸取1ml到25ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度摇匀，供含量测定。
2.2.6 超临界萃取 取淫羊藿细粉过三号筛并精密称量200g，按表4做实验，萃取物水浴蒸干，残渣用70%乙醇溶解，滤过后定容到100ml容量瓶中，再吸取0.5ml到25ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，再吸取2ml到10ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，再吸取1ml到25ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度摇匀，供含量测定。
2.3各样品的含量测定
分别取上述提取液，以70%乙醇为空白，270nm为测定波长，测定各待测液压的吸收值。将测得的吸收值A代入回归方程，计算样品液的浓度，并换算成样品百分含量见表1。表1 不同提取方法的总黄酮含量注：半仿生提取与超临界提取的平均含量均取最高值。
2.4 半仿生提取法正交实验设计
根据SBE法理论[3～6]，在药材粒度、煎提温度、煎煮加水量、浓缩等条件相同的前提下，确定考察的主要因素及水平。选用L9（34）表安排实验方案，见表2、表3、表4。表2 因素——水平表注：三次煎煮时间比2:1: 1，加水量比20:12:12。 表3 正交实验L9（34）的结果分析表表4 方差分析表 注：提取时间1.5h，分离错误！未找到引用源。压力8Mp，分离错误！未找到引用源。压力4Mp，夹带剂为95%乙醇。
3 讨论
3.1 以淫羊藿苷含量为指标，由表3和表4可知，由于B因素R值极小，可作为误差项，A、C、D因素有极显著性差异，对淫羊藿苷含量影响因素主次因素为A＞C＞D＞B。直观分析结果表明最佳提取工艺组成为A1C2D1B2。验证实验进一步表明该项工艺稳定可行。因此筛选得到的最佳提取工艺为：第一煎水PH值（2.00），第二煎水PH值（7.00），第三煎水PH值（8.50），煎煮时间3h。
3.2 由表5可知，超临界萃取法的提取效率低，其原因可能与以下因素有关：实验周期短，实验经费有限等，故该项实验有待进一步优选实验条件。
3.3 从以上实验结果直观分析，在六种提取方法中。总黄酮含量由高到低依次为：索氏提取法＞乙醇回流提取法＞超声提取法＞半仿生提取法＞水煎煮法＞超临界萃取法；提取时间由高到低依次为：索氏提取法＞半仿生提取法＞水煎煮法＞乙醇回流提取法＞超临界萃取法＞超声提取法。
综上所述，超声提取法提取时间最短，总黄酮含量较高，提取效率高、简便、快速，为最佳提取方法。
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[1] 宋立人．中药学大辞典（上、下册）[M]．北京：人民卫生出版社，2001，334．
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