TGFβ1及其Ⅱ型受体在涎腺黏液表皮样癌中的表达

【摘要】  　　［目的］研究TGFβ1、TGFβRⅡ在涎腺黏液表皮样癌中的表达和意义。［方法］应用免疫组织化学SP法检测10例正常涎腺组织、45例黏液表皮样癌中TGFβ1和TGFβRⅡ的表达。［结果］正常涎腺组织、黏液表皮样癌中均表达TGFβ1阳性，但正常组的染色强度明显低于肿瘤组（P<0.05）；TGFβRⅡ在正常涎腺组的阳性表达率为100％，在肿瘤组的阳性表达率为42.22％，两者具有显著性差异(P<0.05)，且高分化组TGFβRⅡ的阳性表达显著高于中、低分化组。 ［结论］TGFβ1的高表达和TGFβRⅡ的缺失在黏液表皮样癌的发生过程中可能起重要作用。

【关键词】  黏液表皮样癌　免疫组织化学　转化生长因子β1　转化生长因子β受体Ⅱ

　　 Expression of TGFβ1 and Its ReceptorⅡ in Salivary Gland Mucoepidermoid Carcinoma

      Abstract: ［Purpose］ To investigate the expression and significance of TGFβ1 and its receptor Ⅱ(TGFβRⅡ)in salivary gland mucoepidermoid carcinoma(MEC). ［Method］The expression of TGFβ1 and TGFβRⅡ protein in 10 cases with normal salivary gland tissue and 45 cases with MEC was detected by the streptavidin-peroxidase (SP) immunohistochemical method. ［Results］Positive expression of TGFβ1 was detected in both normal salivary gland and MEC, but positive stain intensity of normal salivary gland was significantly weaker than that of MEC (P<0.05). The positive rate of TGFβRⅡ expression in normal salivary group was 100% which was significantly heavier than that in MEC (42.22%, P<0.05). In MEC, compared with moderately and poorly differentiated groups, well differentiated group showed increased positive rate of TGFβRⅡ. ［Conclusion］ The high expression of TGFβ1 and the defect of TGFβRⅡ may play an important role in carcinogenesis and progression of MEC.

    Key words: mucoepidermoid carcinoma; immunohistochemistry; TGFβ1, TGFβRⅡ

    黏液表皮样癌是常见的涎腺恶性肿瘤，约占30%[1]，其组织结构复杂，分化程度不一，在临床病理诊断及预后判断上存在一定难度。转化生长因子β1（transforming growth factor?鄄beta1, TGFβ1）是一组功能复杂的多肽生长因子，大量研究表明，TGFβ1直接或间接参与机体的各种生理、病理过程，对细胞的增殖和分化、细胞外基质的形成、血管生成、免疫抑制、肿瘤形成等均起着重要作用。TGFβ1必须与细胞表面的特异性受体结合才能发挥效应，转化生长因子β受体Ⅱ（transforming growth factor?鄄beta receptor Ⅱ, TGFβRⅡ）是一种位于细胞膜表面的跨膜糖蛋白，具有自身磷酸化功能，在TGFβ1的信号转导通路中发挥重要作用。我们旨在通过检测这两种蛋白在黏液表皮样癌中的表达，探讨其在黏液表皮样癌发生、发展过程中的作用和意义。

    1 材料与方法

    1．1 标本来源

    45例黏液表皮样癌、10例癌旁正常涎腺组织标本均来源于安徽医科大学第一附属及安徽省省立医院病理科1998～2003年间存档蜡块。患者年龄为13~68岁，男性28例，女性17例，发生部位包括腮腺、腭部、颌下腺、舌下腺、磨牙后区、舌部、颊部等。高、中、低分化黏液表皮样癌分别为21、18、6例。其中发生淋巴结转移6例，无淋巴结转移39例。肿瘤直径≥5cm 10例，＜5cm 35例。

    所有蜡块经4μm连续切片后分别作HE及免疫组化（SP法）染色，结果均经两位有经验的病理科医师双盲法阅片并取得一致意见。黏液表皮样癌的诊断及病理分级依据《口腔组织病》第5版[1]确定。

    1．2 主要试剂

    兔抗人TGFβ1多克隆抗体、兔抗人TGFβRⅡ多克隆抗体（使用浓度均为1∶50，购自Santa Cruz公司），即用型免疫组织化学超敏SP试剂盒（广谱），DAB染色剂等购自福州迈新生物技术开发公司。

    1．3 实验方法

    按迈新公司提供的染色程序进行SP免疫组织化学染色。用乳腺癌组织的TGFβ1和TGFβRⅡ阳性片作为阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。1．4 结果判定

    光镜下观察，TGFβ1、TGFβRⅡ阳性表达均定位于细胞质和细胞膜，以出现清晰的浅黄色—棕褐色颗粒判定为阳性，细胞核不表达。反应结果根据胞质、胞膜的着色程度分为：胞质、胞膜无着色（－），淡黄色为（＋），棕黄色为（＋＋），棕褐色为（＋＋＋）。（＋＋）以上为TGFβ1、TGFβRⅡ高表达。

    1．5 统计学处理

    各组数据结果以Fisher’s精确概率法或χ2检验进行显著性差异分析，以P＜0.05为显著性界限。

    2 结 果

    2．1 TGFβ1在黏液表皮样癌中的表达

    10例正常涎腺组织和45例黏液表皮样癌组织中，TGFβ1阳性表达率均为100％，正常组中主要定位于各级导管上皮细胞、血管内皮细胞及涎腺间质，表现为胞质和胞膜呈淡黄色或棕黄色，阳性颗粒粗细不等，腺泡上皮细胞未见表达（图1）；肿瘤组定位于肿瘤细胞，胞质、胞膜的阳性着色均匀、分布广泛，黏液细胞、表皮样细胞和中间细胞的染色强度无明显差异（图2）。实验可见黏液表皮样癌组TGFβ1的阳性染色强度较正常组明显增强，其高表达率为84.44％，与正常组（30.00％）相比具有显著性差异（P＜0.05），但其高表达与肿瘤的组织学分级无关（见表1）。

    2．2 TGFβRⅡ在黏液表皮样癌中的表达

    TGFβRⅡ在正常涎腺和黏液表皮样癌的阳性表达部位与TGFβ1基本相似（图3、4），正常组的阳性表达率为100％（10/10），肿瘤组的阳性表达率为42.22％（19/45），两者具有显著性差异（P＜0.001）。随着肿瘤分化程度的降低，TGFβRⅡ的阳性表达率呈逐渐降低的趋势，高分化组与中、低分化组分别为61.90％（13/21）、25.00％（6/24），经统计学处理，显示两者间的差异有显著性（χ2＝6.25，P＜0.05）。TGFβRⅡ的高表达率在正常组和肿瘤组间差异无显著性，且肿瘤组中不同分化程度的黏液表皮样癌间也未见明显差异（见表2）。

    3 讨 论

    TGFβ是Assoian等[2]在1983年首次发现的，分子量为25kD，成纤维细胞、淋巴细胞、中性粒细胞、上皮细胞、肿瘤细胞等几乎所有体内细胞都能合成TGFβ，且所有正常细胞都有这个家族的膜结合受体。TGFβ在生物体内大部分以前体形式存在，以无活性或潜活形式分泌，必须由其相应的受体介导后才能发挥生物学效应，TGFβ与TGFβRⅡ形成复合物，被TGFβRⅠ识别并结合，使TGFβRⅡ中的激酶活化，TGFβRⅠ磷酸化，细胞内信号传导通路激活，阻止细胞由G1期进入S期，从而抑制细胞增殖。在人与哺乳动物中，TGFβ包括三种亚型：即TGFβ1～β3，以TGFβ1最具代表性。由于其分布的广泛性和作用的复杂性，国内外学者在这一领域的研究一直非常活跃，大量研究表明，TGFβ1对多种上皮性肿瘤的体外增殖起负性调节作用，但目前有关TGFβ1在人类肿瘤中表达的报道并不一致[3~5]。本研究结果显示，TGFβ1在肿瘤组的阳性表达率同正常组（100％），TGFβRⅡ在肿瘤组的阳性表达率为42.22％，显著低于正常组（100％），且高分化组的阳性表达明显高于中、低分化组，提示可能是由于TGFβRⅡ的缺失、突变或不表达，使得TGFβ1不能被激活发挥其生长抑制功能，导致肿瘤上皮细胞的无限制增殖形成肿瘤，而TGFβRⅡ的阳性表达与肿瘤的分化程度相关，则说明TGFβRⅡ的表达缺失不仅与黏液表皮样癌的发生有关，还与其关系密切。

    实验中我们还发现TGFβ1在肿瘤组的高表达率明显高于正常组，说明TGFβ1在黏液表皮样癌中的表达量有所增加，我们认为这是当肿瘤细胞逃逸了TGFβ1的生长抑制作用后，细胞的过度增殖、浸润、破坏周围正常组织，激发机体免疫反应，淋巴细胞在局部聚集并产生大量TGFβ1，且形成的肿瘤细胞也能自分泌大量无活性的TGFβ1，所以在黏液表皮样癌中能检测到TGFβ1的高表达，这一结果与Dillard等[6]的报道一致。TGFβ1的高表达与肿瘤的组织学分级无关，提示TGFβ1的表达强度与肿瘤的恶性程度关系不大，但因为TGFβ1具有促细胞外间质细胞的增殖作用，它的高水平表达可促进结缔组织粘连、血管生成及增强癌细胞的浸润和转移，所以有待进一步研究其与黏液表皮样癌的淋巴结转移、临床分期及生存期的关系。本研究中，正常组与肿瘤组间TGFβRⅡ的高表达无显著性差异，且不同分化程度的肿瘤间也未见明显差异，说明黏液表皮样癌的发生发展主要与TGFβRⅡ的缺失有关，而与其表达强度无关。

    从以上研究结果发现，TGFβ1的高表达和TGFβRⅡ的缺失在黏液表皮样癌的发生发展过程中起重要作用，因此通过增加TGFβRⅡ的表达恢复癌细胞对TGFβ1负性生长的敏感性，解除TGFβ1引起的免疫抑制，抑制高表达TGFβ1促进癌转移的作用，将为肿瘤的开辟新的途径，Turco等[7]的实验也提示增加TGFβRⅡ的表达可降低人神经胶质瘤的恶型性并诱导其分化。所以进一步探讨TGFβ1及其受体在黏液表皮样癌中的调控机制，可为有效防治黏液表皮样癌提供新思路。

【】
  [1]于世凤. 口腔组织病[M]. 第5版.北京：人民卫生出版社，2003.287-290.

[2] Assoian RK. Transforming growth factor?鄄β in human platelets[J]. J Biol Chem, 1983,258:7155.

[3] Park C, Kim WS, Choi Y, et al. Effects of transforming growth factor?鄄beta(TGF?鄄β) receptor on lung carcinogenesis[J]. Lung Cancer,2002,38(2):143-147.

[4]Saji H,Nakamura H,Awut I,et al.Significance of expression of TGF?鄄beta in pulmonar metastasis in non?鄄small cell lung cancer tissues[J].Ann Thorac Cardiovasc Surg,2003, 9(5):295-300.

[5] Paik SY, Park YN, Kim H, et al. Expression of transforming growth factor?鄄beta 1 and transforming growth factor?鄄beta receptors in hepatocellular carcinoma and dysplastic nodules[J]. Mod Pathol, 2003,16(1):86-96.

[6] Dillard DG, Muller S, Cohen C, et al. High tumor grade in salivary gland mucoepidermoid carcinomas and loss of expression of transforming growth factor beta receptor type Ⅱ[J]. Arch Otolaryngol Head Neck Surg, 2001, 127(6):683-686.

[7]Turco A,Scarpa S,Coppa A, et al. Increased TGF?鄄beta type Ⅱreceptor expression suppresses the malignant phenotype and induces differentiation of human neuroblastoma cells[J]. Exp Cell Res, 2000,255(1):77-85.