败酱复方对混合菌液所致大鼠慢性盆腔炎的治疗作用
【关键词】 败酱
摘要：目的：研究败酱复方对混合菌液所致大鼠慢性盆腔炎的作用，并初步探讨其作用机制。方法：采用混合菌液注入划伤的子宫内造成大鼠慢性盆腔炎，将60只雌性 Wistar大鼠随机分为6组：假手术组、模型组、阳性药组和败酱复方高、中、低剂量组，每组10只，造模后2d开始ig给药，连续21 d。检测血液流变学、免疫学指标及病形态。结果：模型组大鼠全血粘度、血浆粘度和红细胞压积显著升高，脾淋巴细胞转化指数、血清IL2降低，IL6升高；败酱复方(ig,1.5、30、60g・kg-1・d-1)可不同程度改善上述指标；组织形态学观察发现败酱复方给药组大鼠慢性盆腔炎病理改变明显减轻。结论：败酱复方对混合菌液所致大鼠慢性盆腔炎有显著的治疗作用，其作用机制可能与改善血液循环和调节免疫功能有关。
关键词：败酱复方；慢性盆腔炎；血液流变学；免疫学；病理形态学
慢性盆腔炎(chronic pelvic inflammatory disease, CPID)是妇科常见多发病，目前西医疗法以抗生素和皮质激素为主，对于改善症状有一定的疗效，但有许多不良反应，且很难消除病因［1］。中医常采用活血化瘀、清热利湿、温经散寒和理气止痛等方法，往往有较好的疗效。败酱复方是结合中医理论研制的复方中药制剂，多年临床实践表明，该药对诊断明确的慢性盆腔炎患者有较好的疗效，但作用机制尚不明确。本实验采用混合菌液致大鼠慢性盆腔炎模型，观察该复方对慢性盆腔炎的治疗作用，并对其作用机制进行了探讨。
1 实验材料
11 动物和仪器
雌性Wistar大鼠60只，8周龄，体重200±20g，由武汉大学医学院动物实验中心提供，动物许可证号SYXK(鄂)2004004。Stat Fax2100酶联免疫检测仪为美国Awareness公司产品，YDAIV(A)型全自动血液粘度仪为北京宏润达公司产品，超净工作台为苏州净化公司产品。
12 药品、试剂及菌种
败酱复方由败酱草、连翘、苦参、赤芍、黄柏、丹参、蒲公英和甘草等组成，上述药物由院武汉植物研究所江明喜研究员鉴定。用适量冷水浸泡30分钟，武火急煎10分钟，再用文火慢煎20分钟即可，由武汉大学药物非临床研究中心制备。妇科千金片，规格为032g/片，含生药34g/片，湖南株洲制药厂生产，批号200407077。高效植物凝集素(PHA)为暨南大学暨东生物工程研究所产品；IL2、IL6试剂盒由深圳晶美生物试剂有限公司提供；四甲基偶氮唑盐(MTT)购自Sigma公司；RPMI1640培养液和小牛血清购自GIBCO公司。菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌由武汉大学中南检验科临床分离并保种，以2∶1∶1的比例溶于无菌生理盐水配成浓度为3×109 ml-1的混合细菌悬液。
2 结果
21 模型的建立［2］
用03%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠(50mg・kg-1)，无菌条件下于大鼠下腹部正中切口0.8~1cm，暴露并固定子宫，用注射器机械损伤子宫内膜组织，注入0.2ml混合细菌悬液至子宫双侧内，缝合切口，恢复饮水，正常清洁饲养。假手术组操作基本同模型组，但子宫内未注射混合菌液。
22 分组及给药
将60只大鼠随机分为6组，每组10只，于造模后2d开始ig给药，连续21天。败酱复方低、中、高剂量组分别ig败酱复方15、30、60g・kg-1・d-1；阳性药组ig妇科千金片2.8g・kg-1・d-1；假手术组及模型组ig等体积生理盐水，各组给药容积均为15ml・kg-1。
23 观察指标及测定方法
231 血液流变学指标
末次给药12小时后，各组大鼠麻醉后颈总动脉抽血测定全血粘度、血浆粘度和红细胞压积。
232 免疫学指标
① IL2和IL6测定
取大鼠肝素抗凝血，离心分离血浆，按试剂盒说明书采用双抗体夹心法测定IL2和IL6浓度。
②脾淋巴细胞转化指数测定
于给药30 d后，无菌条件下取脾，按［3］方法，用RPMI1640培养液制作单细胞悬液，并用TrisNH4Cl破坏红细胞，镜检活细胞数>90%后，调整细胞悬液浓度为2×106・L-1，将细胞加入16孔培养板中，每样品2孔，每孔1ml，其中一孔加入细胞周期分裂素(PHA，5mg・L-1)，另一孔作对照。置37℃，5%CO2培养箱中培养68h后，将细胞移入40孔培养板中，每孔加入细胞悬液100μl，并加入5%MTT溶液10μl，继续培养4h，每孔加100μl酸性异丙醇充分混匀，终止反应，用酶联免疫检测仪作比色测定，脾淋巴细胞转化指数(脾淋巴细胞转化指数=加PHA淋巴细胞OD值／未加PHA淋巴细胞OD值)。
233 子宫病理形态学观察
取大鼠双侧子宫称重后，先肉眼观察其炎症反应及周围粘连情况，然后将子宫置10%福尔马林溶液中固定，切片，HE染色，于光学显微镜下镜检，摄片。病理观察指标及积分标准为：①宫腔粘连闭塞或扩张：“-”无病变；“+”<1/3病变；“++”1/3~2/3病变；“+++”2/3以上病变。②腔壁结构病变：“-”各层结构正常；“+”粘膜固有层腺体结构消失；“++”肌层与粘膜层分界不清；“+++”分层结构不清。③上皮细胞变性坏死：“-”单柱状上皮；“+”上皮细胞扁平或脱落<1/3；“++”上皮细胞扁平或脱落1/3~2/3病变；“+++”全层上皮细胞变性坏死。④慢性炎细胞浸润：“-”无慢性炎细胞浸润；“+”小数散在或灶性且仅在粘膜固有层内；“++”散在或灶性但深入肌层；“+++”多数散在或层状浸润并累及全层。⑤内膜充血水肿：“-”无内膜充血水肿；“+”固有膜轻微充血水肿；“++”明显充血水肿；“+++”全层充血水肿。
24 数据处理
资料以均值±标准差(3实验结果
31对血液流变学指标的影响
由表1可见，模型组与假手术组比较全血粘度、血浆粘度和红细胞压积均显著升高；败酱复方给药组全血粘度、血浆粘度和红细胞压积有显著改善。表1 败酱复方对血液流变学各指标的影响(略）注：与假手术组相比，* P<0.01；与模型组比较，# P<0.05, Δ P<0.01。
32 对免疫学指标的影响
由表2可见，败酱复方高、中、低剂量组脾淋巴细胞转化指数和血清IL2明显升高，IL6显著降低。表2 败酱复方对免疫学指标的影响(略）注：与假手术组相比，* P<0.01；与模型组比较# P<0.05, Δ P<0.01。
33 对大鼠慢性盆腔炎组织形态学的影响
假手术组：肉眼观察子宫颜色、硬度正常，浆膜面未见肿胀、充血。镜下宫壁各层结构清晰，内膜表面上皮偶见轻度增生，腺体未见明显病变，间质无炎症反应。模型组：肉眼观察大部分子宫颜色暗红，浆膜面明显肿胀、充血，子宫重量增加，部分动物盆腔粘连。镜下大鼠子宫粘连闭塞或扩张，子宫壁完全被破坏、坏死，已失去原有正常形态，结构紊乱，模糊不清，代之以多量成纤维细胞增生，以及炎性细胞浸润，以中性粒细胞、淋巴细胞、浆细胞浸润为主；粘膜上皮细胞部分变性坏死脱落，各层组织坏死，形成无结构形态；子宫腺体上皮坏死。败酱复方组：子宫肿胀、充血等有不同程度减轻，少数子宫腺体腔闭塞，固有膜、肌层有轻度的炎性细胞浸润，中、高剂量组成纤维细胞增生不明显，其形态结构较接近正常。阳性药组：子宫肿胀、充血也有减轻，宫壁各层结构尚清晰。镜下可见炎症细胞浸润及子宫内膜腺上皮一定程度增生，成纤维细胞增生不明显，个别动物子宫内膜炎症明显。表3 败酱复方对混合菌液引起的慢性盆腔炎大鼠子宫病理变化的影响(略)注：与假手术组相比，* P<0.01；与模型组比较# P<0.05, Δ P<0.01。
4 讨论
对于慢性盆腔炎动物模型的建立，国内学者［4］较早采用化学性烧伤致炎的方法造成大鼠子宫内膜粘连模型，但它在感染方式、传播途径和病变特点上与人盆腔炎有较大的差别。所以，我们根据［2］采用混合菌液加机械损伤的方法造成更贴近于人类盆腔炎的病理模型，观察了败酱复方的作用。结果显示，败酱复方给药组子宫病变较模型组明显减轻，表明败酱复方对混合菌液所致慢性盆腔炎有明显的治疗作用。
中医学认为慢性盆腔炎病机主要为瘀、热、湿三者蓄积胞宫，导致冲任气血运行不畅，为此我们选择了血液流变学指标进行药物疗效的观察。结果显示，模型组大鼠全血粘度、血浆粘度和红细胞压积显著升高，败酱复方可不同程度改善上述指标。这可能是由于本方中含有丹参、赤芍、蒲公英、连翘等活血化瘀成份，可改善慢性盆腔炎大鼠的血液循环，有利于炎症细胞的吸收及子宫内膜的修复。
文献还报道，败酱草能增强网状细胞和白细胞的吞噬能力，促进抗体形成及提高血清溶菌酶的水平，从而达到抗菌消炎的目的［5］。IL2是机体免疫调节中最重要的细胞因子之一，可通过促进B细胞分裂、增殖以及NK细胞的活性作用，提高机体的免疫功能［6］。IL6与其受体系统结合可促使分化成熟的B细胞分泌抗体，促进TC、TD细胞增殖分化等生物学效应，过量IL6的产生，会导致过于剧烈的免疫反应，对机体造成损害［7］。本研究结果显示，模型组大鼠腺淋巴细胞转化指数、血清IL2降低，IL6升高，败酱复方各剂量组均可明显提高脾淋巴细胞转化指数、升高IL2，降低IL6，表明慢性盆腔炎的发病与机体免疫功能低下或紊乱有关。增强体液免疫和细胞免疫功能，使紊乱的免疫功能恢复正常可能是败酱复方的作用机制之一。
文献
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