二十五味松石胶囊药效学研究

　本试验观察了二十五味松石胶囊对肝脏的保护作用。观察的内容：1．四氯化碳（ＣＣＬ４）急性中毒小鼠血清总蛋白（ＴＰ）、谷丙转氨酶（ＳＧＰＴ）、肝组织核糖核酸（ＲＮＡ）、脱氧核糖核酸（ＤＮＡ）和糖元含量；2、溴磺酞钠（ＢＳＰ）排泄试验；3、复合致病因子所致肝脂变大鼠血清ＳＧＰＴ、ＴＰ、白蛋白（ＡＬＢ）、白蛋白球蛋白比值（Ａ／Ｃ）、甘油三脂（ＴＧ）、总胆固醇（ＴＣ）、高密度脂蛋白（ＨＤＬ－Ｃ）、低密度脂蛋白（ＬＤＬ－Ｃ）肝组织总脂、蛋白质、ＲＮＡ、ＤＮＡ、糖元含量及病理变化；4、复合致病因子所致肝硬化大鼠血清ＳＧＰＴ、ＴＰ、ＡＬＢ、Ａ／Ｇ、ＴＧ、ＴＣ、ＨＤＬ－Ｃ、肝组织总脂、蛋白质、ＲＮＡ、ＤＮＡ、糖元、羟脯氨酸含量和病理变化。现将结果报告如下：
　　材料
　　一、药物：二十五味松石胶囊（25ＷＳＳＨ），由佛阁藏药有限公司提供，批号980808；藏茵陈胶囊（ＺＹＣＨＮ），青海大地药业有限公司提供，批号970616，用时将其内容物以ＮＳ配成混悬液；联苯双脂（ＢＦＤ），上海天平制药厂生产，批号978005Ｆ。
　　二、动物：ＫＭ小鼠，体重18－22ｇ；Ｗｉｓｔａｒ大鼠，体重120－150ｇ，雌雄皆用，兰州医学院动物室提供，合格证号：医动字14－005（小鼠）；14－006（大鼠）
　　方法与结果
　　一、对小鼠ＣＣＬ４中毒的影响
　　取小鼠60只，随机分为6组，设正常生理盐水（ＮＳ）组、模型ＮＳ组、两个25ＷＳＳＨ给药组、ＢＦＤ对照组和ＺＹＣＨＮ对照组。各用药组和模型ＮＳ组动物按10ｍｇ／ｋｇ分别ｉｐ0.2%ＣＣＬ4花生油溶液，正常ＮＳ组ｉｐ等是花生油。各用药组于中毒前24ｈ及中毒同时分别ｉｇ25ＷＳＳＨ0.8ｇ／ｋｇ（人用量40倍）、25ＷＳＳＨ0.2ｇ／ｋｇ体重（人用量10倍）、ＢＥＤ0.04ｇ／ｋｇ，ＺＹＣＨＢ0.6ｇ／ｋｇ体重，正常ＮＳ组和模型ＮＳ组ｉｇ等容量ＮＳ，随即禁食，但不禁水，16ｈ再给药一次，1ｈ后各组动物断头取血和肝组织，3000ｒｐｍ离心20ｍｉｎ，分离血清，测ＳＧＰＴ（动态法）、ＴＰ（双缩脲法）。ＮＳ充分冲洗肝脏，滤纸吸干并准确称取0.5ｇ，另蒸馏水2ｍｌ，制成组织匀浆，4000ｒｐｍ离心15ｍｉｎ，取上清液，测1ｇ肝重中ＲＮＡ、ＤＮＡ（定糖法）1和糖元含量。结果表明，25ＷＳＳＨ能使ＣＣＬ4中毒小鼠血清ＳＧＰＴ降低，但其作用不及ＢＦＤ。该药还能提高ＣＣＬ4中毒小鼠肝组织总蛋白、糖元和ＲＮＡ含量，但对ＤＮＡ含量无影响。揭示，25ＷＳＳＨ具有减轻ＣＣＬ4对小鼠肝脏急性损伤的作用。
　　二、对ＣＣＬ4急性中毒小鼠溴磺酞钠（ＢＳＰ）排泄的影响
　　取小鼠60只，随机分成6组，组别和剂量同前。各组每日ｉｇ一次，连续7日。末次给药后12ｈ，除正常ＮＳ组外，其它各组动物均ｉｐ0.1%ＣＣＬ4花生油溶液10ｍｌ／ｋｇ，16ｈ后全部由尾ｉｖＢＳＰ200ｍｇ／ｋｇ，20ｍｉｎ后断头取血，分离血清，取0.1ｍｌ血清加0.01ｍｏｌ／Ｌ盐酸5ｍｌ，岛津ＵＶ－120－02分光光度计（波长524ｍｍ）比色（蒸馏水凋零），然后另2ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ溶液一滴，摇匀后比色，以两次光密度读数之差ＢＳＰ的潴留量（ｎｇ／0.1ｍｌ血清）3。结果表明，25ＷＳＳＨ能促进ＣＣＬ4急性中毒小鼠肝ＢＳＰ排泄作用，其0.8ｇ／ｋｇ剂量的作用较ＢＦＤ强。
　　三、对大鼠实验性肝脂肪变性的影响
　　取大鼠48只，随机分为6组，分组和给药剂量同前，除正常ＮＳ组外，各组动物均单纯用玉米粉（前两周加猪油20%），混以0.5%胆固醇喂饲，30%乙醇为唯一饮料，试验第一天皮下注射ＣＣＬ40.5ｍｌ／100ｇ体重，以后每隔三天皮下注射40%ＣＣＬ4橄榄油溶液0.3ｍｌ／100ｇ体重，正常ＮＳ组皮下注射等容量橄榄油。试验第2天开始ｉｇ给药4周（正常ＮＳ组和模型ＮＳ组ｉｇ等容量ＮＳ），末次给药后24ｈ，快速断头取血和肝组织4，同上法分离血清和制成肝组织匀浆上清液，测血清ＳＧＰＴ、ＴＰ、ＡＬＢ、Ａ／Ｇ；用酶法测定甘油三脂（ＴＧ）、总胆固醇（ＴＣ）、高密度脂蛋白（ＨＤＬ－Ｃ）、低密度脂蛋白（ＬＤＬ－Ｃ）和肝组织中总脂、蛋白质、ＲＮＡ、ＤＮＡ及糖元含量。
　　实验说明，25ＷＳＳＨ能降低性肝脂肪变性大鼠血清ＳＧＰＴ，能提高血清ＴＰ、ＡＬＢ和Ａ／Ｇ，且0.8ｇ／ｋｇ剂量对ＡＬＢ的作用较ＢＦＤ强。25ＷＳＳＨ还能降低血清ＴＧ，且0.8ｇ／ｋｇ剂量的作用较明显，但对ＴＣ、ＨＤＬ－Ｃ、ＬＤＬ－Ｃ，无明显作用；能降低肝组织总脂，能提高肝组织糖元，ＲＮＡ和ＤＮＡ含量，0.8ｇ／ｋｇ剂量还能提高肝组织蛋白质含量，其作用，除肝组织ＤＮＡ含量外，均较ＢＦＤ明显。
　　四、对大鼠实验性肝硬化的影响
　　取大鼠60只，分组处理和给药方法同三。不同的是观察时间延长至8周，以形成肝硬化模型，并增加肝羟脯氨酸含量测定（5）。
　　实验结果表明，25ＷＳＳＨ能使实验性肝硬化大鼠血清ＳＧＰＴ降低；能提高血清ＴＰ、ＡＬＢ和Ａ／Ｇ，且这些作用均较ＢＦＤ强；能降低血清ＴＧ和ＨＤＬ－Ｃ，对ＴＣ和ＬＤＬ－Ｃ无明显作用。25ＷＳＳＨ0.8ｇ／ｋｇ能使肝组织总脂升高，并能提高肝组织蛋白质、ＲＮＡ和ＤＮＡ含量，对ＲＮＡ的作用比ＢＦＤ的作用强，还能降低肝组织羟脯氨酸含量，且两个剂量组之间有显著差别；其0.8ｇ／ｋｇ剂量的作用也比ＢＦＤ的作用强；能提高糖元含量，且其作用亦明显优于ＢＦＤ。　五、肝组织病理检查
　　试验二、三结束时，在各组所取的肝右叶初取约0.4ｃｍ厚肝组织，4%甲醇固定，石蜡切片，ＨＥ染色，光镜观察，并拍摄照片。观察发生肝脂肪变性、颗粒变性、嗜酸性变、肝细胞坏死、炎细胞浸润及纤维增生而形成结节等的例数并占本组动物数的百分式（例数／动物数％）。结果表明，在实验性肝脂肪变性试验中，模型ＮＳ组中脂肪变性、颗粒变性、嗜酸性变例数均多于用药各组，且程度也较重；各组未见肝细胞坏死，炎细胞浸润各组差别亦不大。在实验性肝硬化的试验中，模型ＮＳ组颗粒变性、脂肪变性、嗜酸性变和由于纤维增生及结节状再生所形成的例数均多于用药各组，其中23ＷＳＳＨ0.8ｇ／ｋｇ组和ＺＹＣＨＮ组动物肝中未见结节形成。
　　结论
　　25ＷＳＳＨ可降低ＣＣＬ4所致的急性中毒小鼠血清ＳＧＰＴ、提高ＴＰ、肝组织中ＲＮＤ和糖元含量，还能促进ＢＳＰ排泄，对复合致病因子引起的肝脂肪变性及肝硬化具有提高血清总蛋白，白蛋白和Ａ／Ｇ比值，血清ＳＧＰＴ、肝组织总脂质及羟脯氨酸，增加蛋白质、ＲＮＡ、ＤＮＡ和糖元含量的作用。此外还能降低血清甘油三脂，药用8周后，也有高密度脂蛋白胆固醇的作用。病理结果显示25ＷＳＳＨ能抑制肝脂肪变性和纤维增生。