贵州地产吴茱萸药材薄层色谱的初步研究

【摘要】  建立贵州地产吴茱萸药材特征图谱薄层色谱的鉴别方法。采用薄层色谱分析方法，提取溶剂为乙酸乙酯，展开剂为环已烷-乙酸乙酯-甲醇-三乙胺（19：5：1：1），对吴茱萸药材进行薄层色谱特征图谱的定性鉴别。结果显示，经乙酸乙酯提取的薄层色谱重现性好。提示实验建立的吴茱萸药材特征图谱分析法，可用于吴茱萸药材质量的初步评价。

【关键词】  药材； 吴茱萸； 薄层色谱

吴茱萸为常用中药材具有散寒止痛，降逆止呕，助阳止泻之功效。主治厥阴头痛，寒疝腹痛，寒湿脚气，经行腹痛，脘腹胀痛，呕吐吞酸，五更泄泻；外治口疮，高血压。药典收载的吴茱萸为芸香科植物吴茱萸Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth.、 石虎Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth.var.officinalis(Dode)Huang或疏毛吴茱萸Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth.var.bodinieri(Dode)Huang的干燥近成熟果实［1］。经检索，以HPLC法进行吴茱萸定性或定量分析的比较多，以TLC法进行研究吴朱萸比较少，而以TLC法研究吴地产茱萸特药材的更少。我区是吴茱萸道地药材产地［2］，因此就我区地产吴茱萸与其它地区产吴茱萸在薄层特征图谱方面进行研究，为今后确定地产吴茱萸及选定对照药材提供一定的依据。同时现行标准仅以乙醇提取物作为供试液，重现性差，本文对薄层色谱条件进行了优化，建立了可靠的薄层定性方法，完善了质量标准。

    1  样品来源

    铜仁坝黄产吴茱萸（为芸香科吴茱萸Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth.var.officinalis(Dode)Huang 石虎）；铜仁松桃大兴产吴茱萸（为芸香科吴茱萸Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth.var.bodinieri(Dode)Huangnh 疏毛）；铜仁印江产吴茱萸（为芸香科吴茱萸Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth.var.bodinieri(Dode)Huangnh 疏毛）；重庆秀山产吴茱萸（为芸香科吴茱萸Evodiarutaecarpa(Juss.)Benth.var.bodinieri(Dode)Huangnh 疏毛）； 江西产吴茱萸(中花吴茱萸)；江西昌祥药业有限公司供吴茱萸。

    2  仪器与材料

    ZF-1型紫外分析仪（上海宝山顾村电光仪器厂）；硅胶G板和硅胶GF254板（规格100×200mm，厚度0.2～0.25mm），青岛海洋化工厂分厂生产；乙醇、环已烷、乙酸乙酯、甲醇、丙酮、三乙胺均为分析纯。

    吴茱萸对照药材，批号909-9204；吴茱萸次碱，批号0801-9702；吴茱萸内酯，批号800-200102。均购自中国药品生物制品检定所。

    3  实验方法及结果

    3.1  实验方法

    供试品溶液的制备：取样品粉末0.4g 加乙酸乙酯10ml，浸渍30min，超声30min,滤过。

    对照药材溶液的制备：同供试品液。

    对照品溶液的制备：分别称取吴茱萸次碱、吴茱萸内酯20mg加乙酸乙酯20ml溶解即得。

    分别吸取供试品液、对照药材溶液及对照品液各2ul点于同一高效薄层板上，照薄层色谱法实验［1］以环已烷-乙酸乙酯-甲醇-三乙胺（19：5：1：1）为展开剂，上行展开展距7cm，取出晾干，再10%硫酸乙醇溶液显色，置紫外灯（365nm）下检视。

    3.2  结果 

    直接在紫外灯365nm下观察：  

    各供试品液的斑点颜色及位置与对照药材溶液一致，并且秀山产吴茱萸薄层色谱荧光斑点强于对照药材；江西产吴茱萸薄层色谱荧光斑点最弱（照片1）。

    喷以10%硫酸乙醇溶液后，紫外灯365nm下观察：

    在每个供试品的色谱带中出现距前沿倒数第5个斑点后面只有秀山、松桃、坝黄产吴茱萸多出一个荧光斑点，其中秀山、松桃的荧光斑点较亮，坝黄次之的特征图谱（照片2）。

    1．坝黄;　2.印江;　3.松桃;　4.秀山;　5.江西;　6.昌祥; 7.对照药材

    照片1

    1. 坝黄；2.印江；3.松桃；4.秀山；5.江西；6.昌祥；7.对照药材

    照片2

    4  讨论

    4.1  提取条件的选择

    提取方式：①取样0.5g，加乙醇200ml，浸渍过夜，索氏提取3小时，浓缩至100ml，过滤；②取样0.4g，加乙醇10ml，浸渍30min，超声30min，过滤。出现的斑点颜色与位置基本一致，为使用方便，选用②提取方法，简便、快速、。

    提取溶剂：选择乙醇、氯仿、乙酸乙酯溶剂进行提取比较，按实验方法操作，结果以乙酸乙酯提取斑点分离较好，重现性好，斑点集中，不拖尾（见照片3～5）。

    1坝黄; 2.印江; 3.松桃; 4.秀山; 5.江西; 6.昌祥;  7.对照药材

    照片3

    1.石阡; 2.坝黄; 3.印江; 4.松桃; 5.秀山; 6.江西; 7.昌祥; 8.新晃; 9.对照药材

    照片4

    1坝黄; 2.印江; 3.松桃; 4.秀山; 5.江西; 6.昌祥;  7.对照药材

    照片5

         山东省莱州市妇幼保健院

    4.2  色谱条件的选择

    选用系统：①氯仿-石油醚-甲醇-环已烷（5：3：0.4：0.4）；②氯仿-甲醇（4.1：0.3）［11］；③石油醚-氯仿-丙酮-甲醇-二乙胺（6：2：1.4：0.2：0.2）显色剂为改良碘化铋钾试液；④环已烷-乙酸乙酯-甲醇-三乙胺（19：5：1：1）。均以10%硫酸乙醇液显色，紫外365nm下观察结果：①所有检品均未出现任何斑点；②坝黄、印江、秀山的检品只出现3个斑点，其中一个斑点与吴茱萸次碱相对应的位置一致；③所有检品显现的斑点很少；④各产地吴茱萸出现7个斑点并与对照药材一致，吴茱萸次碱斑点也一致。

    4.3  对照品溶液的选择

    实验发现，在同一硅胶板上，点了吴茱萸内酯与次碱溶液，每次次碱都出现在离展开前沿的第一个斑点，而内酯用上述各种展开剂展开，都未出现斑点，故在后面的实验中不再用内酯与次碱，只用对照药材作比较。

    4.5  稳定性与重现性

    以不同批次薄层板重复点标10次薄层色谱，结果基本一致。

   【】
  1 中华人民共和国药典.一部.2005，118.

2 邱德文，傅文卫.贵州道地药材吴茱萸的研究.贵阳中医学院学报， 1995，17（3）：11～13.

3 平面色谱方法及应用.北京：化学出版社，2000，270.