红景天超微粉对小鼠急性肝损伤的保护作用

【摘要】  探讨红景天超微粉及乙醇提取物对小鼠急性肝损伤的保护作用，比较两者对肝损伤保护作用的差异.［方法］用D?氨基半乳糖制作小鼠急性肝损伤动物模型，分别灌胃给予不同组小鼠相应剂型及剂量的红景天超微粉和乙醇提取物，连续4d，末次给药1h后测定小鼠血清丙氨酸转移酶(ALT)及天冬氨酸转氨酶(AST)含量，肝脏匀浆中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性，同时行肝组织切片，染色，观察病理变化.［结果］红景天超微粉和乙醇提取物均可明显降低急性肝损伤小鼠血清ALT，AST及肝组织匀浆中MDA含量，提高SOD活性.［结论］红景天超微粉和乙醇提取物对小鼠急性肝损伤均具有保护作用，而红景天超微粉的作用优于红景天乙醇提取物.

【关键词】  肝疾病 红景天 超微粉 小鼠

    ABSTRACT:OBJECTIVETo study the protective effect of the ultra fine powder and the ethanol extracts of Rhodiola sachalimemsis A.Bor for acute liver injury in mice，and compare the protective effect to dose effect relationship between equal dose of them.METHODSThe mice performed by intragastric administration with the ultra fine powder and ethanol extract of Rhodiola sachalimemsis A.Bor, respectively. The mouse model of acute liver injury were induced by D?galactosamine, and the serum levels of ALT and AST and the contents of  MDA、activity of SOD in livers of the mice were measured, and pathologic changes were observed.RESULTSThe groups of ultra fine powder and ethanol extract of the Rhodiola sachalimemsis A.Bor significantly reduced the levels of serum ALT and AST which were induced by ethanol, and the contents of  MDA,activity of SOD in livers were significant different compared to the model groups.CONCLUSIONThe ultra fine powder of the Rhodiola sachalimemsis A.Bor has protective effects against hepatic injury, and they were superior to ethanol extract.

    Key words:liver diseases；Rhodiola sacra;ultra fine powder；mice

    高山红景天（Rhodiola sachalimemsis A.Bor.）是景天科红景天属多年生草本植物，全草均可入药，具有清肺止咳及止血等功效，常用于跌打损伤、烧烫伤、阳痿及糖尿病等.研究结果表明，红景天苷对实验性肝损伤小鼠具有较好的保护作用［1，2］，但尚未见红景天超微粉的相关报道.本实验观察了红景天超微粉对急性肝损伤小鼠的保护作用，并将其与红景天乙醇提取物的作用进行了比较.

    1  材料与方法

    1.1  材料  实验动物取雄性昆明种小鼠，体重为22～25g，由延边大学医学部实验动物科提供.高山红景天购自吉林省安图县药材市场，由延边大学药学院生药学教研部刘永镇教授鉴定为高山红景天（Rhodiola sachalimemsis A.Bor.）.D?氨基半乳糖由重庆医科大学提供；护肝宁片为吉林省通化天立药业有限公司产品.丙氨酸转移酶(alanine aminotransferase， ALT)及天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase, AST)试剂盒均为北化康泰临床试剂有限公司产品；超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)及考马斯亮兰试剂盒均为南京建成生物工程研究所产品.SP4430型生物化学分析仪为日本ARKRAY TACTORY INC. SHIGA公司产品；DY89?1型电动玻璃匀浆器为宁波玻璃仪器厂产品.

    1.2  红景天的超微粉及乙醇提取物的制备  取红景天干燥根适量，粉碎(由四平高期达纳米材料设备有限公司实施)，得直径分别为0.3μm,0.5～1.0μm,1.0～5.0μm 3种规格的红景天超微粉；取红景天干燥根1kg，用700mL/L乙醇回流提取3次，每次1h，合并3次滤过液，减压浓缩得红景天乙醇提取物180g.

    1.3  分组及给药方法  取100只昆明种小鼠，随机分为10个组，即正常对照组、模型对照组、超微粉纳米大、小剂量组、亚微米大、小剂量组、微米大、小剂量组、乙醇提取物组及护肝宁片组，每组各为10只.灌胃给予各药物组小鼠相应剂量、相应剂型的药物，超微粉组的大剂量为1.5g/kg，小剂量为0.5g/kg，乙醇提取物组的剂量为1.0g/kg，护肝宁片组的剂量为0.3g/kg，灌胃给予正常对照组及模型对照组小鼠等体积的蒸馏水，早晚各1次，连续4d.第4日，末次给药1h后腹腔注射给予正常对照组小鼠生理盐水0.3mL，其余各组腹腔注射给予D?氨基半乳糖700mg/kg.禁食16h，颈动脉取血，静置，以3000r/min离心10min，取血清，测定ALT，AST值；剖取肝脏，制成100mL/L的肝组织生理盐水匀浆液，离心取上清液，测定SOD活性及MDA含量；取肝组织，用100g/L中性福尔马林溶液固定，行石蜡切片，厚度为5μm，行苏木精?伊红染色，用光学显微镜进行观察.

    1.4  统计学处理  采用SPSS11.5统计软件进行处理，所有数据均以均数±标准偏差(±SD)表示，组间比较采用两样本均数的t检验.

    2  结果

    2.1  红景天超微粉对急性肝损伤小鼠血清ALT，AST值的影响  红景天超微粉纳米、亚微米及微米大、小剂量组及乙醇提取物组急性肝损伤小鼠血清ALT，AST值均降低，与模型对照组比较均有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001)，提示红景天乙醇提取物及超微粉均对小鼠急性肝损伤有保护作用；纳米大剂量组、微米大剂量组及亚微米小剂量组小鼠血清ALT，AST值较乙醇提取物组降低，组间比较均有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)；见表1.表1  红景天提取物等对急性肝损伤小鼠血清中ALT，AST值的影响

    2.2  红景天超微粉对急性肝损伤小鼠肝组织SOD活性及MDA含量的影响  红景天超微粉纳米、亚微米及微米大、小剂量组及乙醇提取物组小鼠肝组织SOD活性较模型对照组升高，而MDA含量则降低，相比较均有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001)；除微米小剂量组外各组小鼠肝组织SOD活性及MDA含量变化均呈量效关系；见表2.表2  红景天超微粉对急性肝损伤小鼠肝组织SOD活性及MDA含量的影响# 与空白对照组比较, P＜0.01； 与模型对照组比较, * P＜0.05， ** P＜0.01,  *** P＜0.001；与乙醇提取物组比较，△ P＜0.05, △△ P＜0.01

    2.3  红景天乙醇提取物及超微粉对急性肝损伤小鼠肝组织病理变化的影响  模型对照组小鼠肝细胞广泛脂肪变性、坏死，肝索排列紊乱，细胞核浓缩或消失，可见大量的颗粒变性；纳米大剂量组(图1A)、亚微米大剂量组(图1B)、微米小剂量组(图1C)及乙醇提取物组(图1D)小鼠肝组织细胞病理变化比较小，肝小叶清晰，肝索排列接近正常，肝细胞膜清晰，细胞核较大，其中纳米大剂量组及亚微米大剂量组小鼠肝组织细胞未见明显的病理变化，接近正常肝组织.

    3  讨论

    红景天超微粉对急性肝损伤小鼠血清AST，ALT值及MDA含量的升高具有明显的抑制作用，且呈一定的量效关系，而明显提高SOD活性，提示红景天超微粉可明显改善急性肝损伤小鼠肝脏的病理性损伤.本实验结果表明，红景天乙醇提取物及超微粉对D?氨基半乳糖所致小鼠急性肝损伤均有一定的保护作用，而红景天超微粉的作用优于乙醇提取物.红景天超微粉的最佳粒度、剂量以及肝保护作用机制有待于进一步研究.

【】
  ［1］ Gu YL, Wang DK, Chen XY， et al..Advences in studies on Rhodiola sachalimemsis A.Bor［J］.Chinese Medicine Transaction，2003，18(9)：560.

［2］ Wu XL, Zeng WZ, Chen XB.The effects of Rhodiola sachalimemsis A.Bor on the activites of tibrosis associated enzymes in serun and tissue in rats of CCl4?induced liver tibrosis［J］.West China Journal of Pharmaceutical Sciences，2002，17(6)：416.