藏方猫乳散对尿酸钠致痛风性关节炎模型大鼠TNF-α、IL-1、IL-6含量的影响

                    作者：程生辉，李会芳，孙晓波， 秦旭华，代竹青

【摘要】  目的：探讨藏方猫乳散急性痛风性关节炎的作用机理。方法：40只雄性SD大鼠随机分成空白组、模型组、猫乳散组、吲哚美辛组4组，每组10只。空白组、模型组灌服生理盐水，猫乳散组、吲哚美辛组分别灌服猫乳散和吲哚美辛溶液，共给药5 d。于给药第3 d 将0.2 mL尿酸钠溶液注入除空白组外其余各组大鼠右侧踝关节腔造模，于给药第5 d 处死大鼠，分离右踝关节周围软组织并制成匀浆，取上清液检测TNF-α、IL-1、IL-6的含量。结果：模型组局部组织中TNF-α、IL-1、IL-6含量明显高于空白组（P<0.05），猫乳散组和吲哚美辛组TNF-α、IL-1、IL-6含量明显低于模型组（P＜0.05）。结论： 藏方猫乳散抗痛风作用机理与其能够降低局部炎性细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6的含量有关。

【关键词】  藏方猫乳散；痛风性关节炎；炎性细胞因子；TNF-α；IL-1；IL-6

    Abstract    Objective：To explore the mechanism of Tibetan formula Maoru powder on acute gouty arthritis.Methods：40 male SD rats were randomly divided into four groups：control group，model group，Maoru powder group and antifani group. On the third day of treatment，the acute gouty arthritis rat models were established with once injection of 0.2 mL monosodium urate solution into the right ankle joint cavity of every rat.On the 5th day of treatment，all rats were killed，then soft tissue around right rankle joint was obtained and made into homogenate，TNF-α，IL-1，IL-6 contents in supernatant were detected.Results：Contents of TNF-α、IL-1、IL-6 of model group rats were significantly higher than those of control group rats（P<0.05），contents of TNF-α、IL-1、IL-6 of Maoru powder group and antifani group rats were significantly lower than those of model group rats（P<0.05）.Conclusion：The anti-gout effects of Maoru powder may be related to the decrease in contents of TNF-α、IL-1、IL-6 of soft tissue around rankle joint.

    Key words   Tibetan formula Maoru powder，gouty arthritis，inflammation cytokine ，TNF-α，IL-1，IL-6      近年来随着人民生活水平的提高，嘌呤类食物摄入的增多，痛风的发病率逐年升高。西藏地处高寒地区，当地居民的饮食习惯是长期以牛、羊肉等高嘌呤食物为主，且喜饮酒以御寒，因而高尿酸血症和痛风的发病率较高 ［1］。藏族人民在长期的生活和医疗实践中了许多治疗痛风的宝贵经验，本课题在藏医药理论的指导下，通过查阅大量的藏医药，从众多的藏医药经验方中筛选出复方猫乳散［猫乳、 达布桑（秦皮）、 吉解那保（大叶秦艽）、 杰尔哇（黄檗）］用于高尿酸血症及痛风的治疗。《晶珠本草》记载猫乳有“干黄水”之功 ［2］，主要用于关节“黄水”增盛引起的关节红肿疼痛，是常用来治疗痛风的藏药。前期研究已经表明藏方猫乳散具有良好的降低血尿酸和治疗痛风性关节炎的作用 ［3-4］，本文拟从局部炎性细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6方面探讨该方的抗痛风作用机理。

    1   材料与方法

    1.1   实验材料

    1.1.1   实验动物   SPF级SD大鼠，雄性，180 g~220 g，四川省医学院实验动物研究所提供，动物合格证号：SCXK（111）2004-16。

    1.1.2   药品与试剂   藏方猫乳散全方药物购自成都五块石药材市场，经成都中医药大学卢先明教授鉴定。实验用药为猫乳散的水提液（1 g/mL）和醇提液（1 g/mL）的混合物；吲哚美辛片，由江苏亚邦药业集团股份有限制造分公司生产，批号：0404111；尿酸，SIGMA公司生产，批号：050K08822；大鼠TNF-α ELISA试剂盒，批号：041025，晶美生物工程有限公司进口分装；大鼠IL-1

    ELISA试剂盒，上海森雄科技实业有限公司进口分装，批号：141108；大鼠IL-6 ELISA试剂盒， 批号：041008， 晶美生物工程有限公司进口分装。

    1.1.3   实验仪器   Thermo Labsystems MuLtikan MK3全自动酶标仪； Thermo Labsystems WeLLwash 4MK2全自动洗板机。

    1.2   实验方法

    1.2.1   分组与给药   40只SD大鼠随机分为空白组、模型组、吲哚美辛组、猫乳散组4组，每组10只。造模前2 d开始灌胃给药，吲哚美辛组和猫乳散组分别按0.04 g/kg和5 g/kg给药，每日1次；空白组和模型组以同体积生理盐水灌胃。造模后各组连续给药3 d。

    1.2.2   尿酸钠结晶及尿酸钠溶液的制备［5］   取194 mL蒸馏水加6 mL NaOH（1 M），煮沸后加1 g尿酸，用1 N HCl调pH至7.2，搅拌冷却，贮存于4℃冰箱中24 h，去上清液，用滤纸将沉淀物水份吸干，干燥即可得尿酸钠结晶。取1 250 mg尿酸钠结晶，加入45 mL生理盐水，同时加入5 mL吐温80，加热搅拌，配成50 mL尿酸钠溶液备用。

    1.2.3   造模方法   用6号注射针在模型组、吲哚美辛组、猫乳散组大鼠右足右侧踝关节背侧从45 ℃方向插入胫骨肌腱内侧，将0.2 mL尿酸钠溶液（2.5 mg/100 mL）注入踝关节腔。

    1.2.4   TNF-α、IL-1、IL-6含量的测定方法   用药5 d后，大鼠股动脉放血处死，于置有冰块的干燥托盘内快速分离出右足踝关节周围软组织，制成匀浆，取上清液作样本测内含物TNF-α、IL-1、IL-6的含量（根据ELISA试剂盒法）。

    2   结   果

    藏方猫乳散对痛风性关节炎模型大鼠局部细胞因子的影响，结果见表1。由表1可以看出，与空白组比较，模型组TNF-α、IL-1、IL-6的含量明显升高（P<0.05）；与模型组比较，吲哚美辛组和猫乳散组TNF-α、IL-1、IL-6含量显著降低（P<0.05）。

    3   讨   论

    急性痛风的疼痛非常剧烈，犹如“虎咬之状”，难以忍受。痛风急性发作是尿酸钠结晶在关节周围组织沉积引起的急性炎症反应，尿酸钠结晶刺激局部组织产生大量TNF-α、IL-1、IL-6等炎性细胞因子，引起局部血管扩张、通透性增加、渗出、水肿、白细胞聚集等炎症反应。本实验也证实造模后，局部关节软组织中TNF-α、IL-1、IL-6含量增高，而藏方猫乳散能显著降低痛风性关节炎模型大鼠局部TNF-α、IL-1、IL-6的含量，从而减轻局部“红、肿、热、痛”的炎症反应，从而发挥抗痛风作用。藏方猫乳散发挥抗痛风作用机理可能与其能够降低局部炎性细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6的含量有关。

【】
  ［1］孟昭亨.痛风［M］.北京：北京医科大学协和医科大学联合出版社，1997：19-30.

［2］帝玛尔·丹增彭错.晶珠本草［M］.上海：上海技术出版社，1986.

［3］孙晓波，李会芳，代竹青. 藏方猫乳儿散的抗痛风作用的实验研究［J］.中药药理与临床，2005，21（5）：47-48.

［4］孙晓波，李会芳，陈蛹，等. 藏方猫乳儿散抗炎镇痛的实验研究［J］.中国民族医药杂志，2005（5）：25-26.

［5］徐淑云，卡如濂，陈修.药理实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2003：905-911.