胆管癌与CD44v6和MMP-9表达相关性的研究
【摘要】 目的：探讨胆管癌组织中CD44v6和MMP-9表达的相关性及其与胆管癌侵袭转移的关系。方法：采用免疫组织化学方法检测60例胆管癌患者CD44v6和MMP-9的表达。结果：有浸润转移的35例胆管癌标本中CD44v6和MMP-9表达的强阳性率分别为68.6%和71.4%，无浸润转移的25例胆管癌标本中CD44v6和MMP-9表达的强阳性率分别为36.0%和40.0%，CD44v6与MMP-9的表达与胆管癌侵袭转移倾向呈正相关（P＜0.01）；CD44v6与MMP-9的表达亦呈正相关（P＜0.05）。结论：CD44v6及MMP-9的表达可能作为胆管癌预后及转移倾向的判断指标。
【关键词】 胆管癌；浸润；转移；免疫组织化学；CD44v6；MMP-9
胆管癌（cholangiocarcinoma）是指源于肝外胆管，包括肝门区至胆总管下端的恶性肿瘤，好发于50岁～70岁，男女比例为2.8∶1。胆管癌的发病率为0.01%～0．50%，占恶性肿瘤总数的2%。近20年来，胆管癌的发病率有增高趋势，由于胆管癌的特殊解剖位置，胆管癌的诊治未能取得令人满意的进展。本实验采用免疫组化法对胆管癌患者中MMP-9及CD44v6蛋白表达进行检测，旨在研究胆管癌的浸润转移机制，以提高胆管癌的防治水平。
1 资料与方法
1.1 临床资料
60例病例均为我院手术切除的胆管癌患者，其中男36例，女24例；年龄38岁～77岁，平均（54.3±7.4）岁；临床病理资料将病例分为有局部浸润、淋巴结转移或远处转移的肿瘤组织和无浸润转移肿瘤组织，临床和病理证实伴有浸润转移者35例（包括淋巴结、肝、胆囊、肠系膜和胰腺等），无浸润转移者25例。所有病例手术前均未进行抗癌。
1.2 方 法
采用PV-9000（PV-9000试剂盒购自北京中山生物技术有限公司）免疫组织化学法，所有标本均经40 g/L甲醛固定，石蜡包埋，所有病例存档的组织块均进行4 μm连续切片，分别作HE染色及DAB显色。判断标准：CD44v6（工作浓度1∶100)和MMP-9（工作浓度1∶100）阳性信号分别为细胞膜和细胞浆出现棕黄色或棕褐色染色。根据染色强度及显色癌细胞比例将染色分为“-，+，++”3级。按切片细胞显色有无及深浅进行评分：无显色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。按显色细胞比例评分：显色细胞＜10%为0分，10%～30%显色为1分，31%～60%显色为2分，61%以上显色为3分。积分=切片细胞显色有无及深浅评分×显色细胞比例评分。按积分高低分为：阴性（-），积分为0分；阳性（+），积分1分～4分；强阳性（++），积分4分。以PBS代替一抗作为阴性对照，阳性对照采用已知的CD44v6阳性切片及MMP-9阳性切片。统计学方法采用四格表法χ2检验。
2 结 果
2.1 胆管癌中CD44v6表达情况
阳性产物定位于胆管癌细胞膜，呈棕黄色或棕褐色颗粒，60例标本中有33例（55.0%）呈强阳性，其中转移者35例标本中有24例（68.6%）呈强阳性，无转移者25例标本中有9例（36.0%）呈强阳性，转移者中CD44v6的表达明显高于无转移者（P＜0.01），CD44v6的表达与胆管癌侵袭转移呈正相关。
2.2 胆管癌中MMP-9表达情况
阳性产物定位于细胞浆内，呈棕褐色颗粒，60例标本中有35例（58.3%）呈强阳性，其中转移者35例标本中有25例（71.44%）呈强阳性，无转移者25例标本中有10例（40.0%）呈强阳性，转移者中MMP-9的表达明显高于无转移者（P＜0．01），MMP-9的表达与胆管癌侵袭转移呈正相关。在MMP-9呈强阳性表达的35例标本中有24例CD44v6呈强阳性表达，MMP-9呈弱阳性表达的25例标本中有9例CD44v6呈强阳性表达，CD44v6表达与MMP-9表达呈正相关（P＜0.0５）。
3 讨 论
大量研究证明，基质金属蛋白酶（MMPS）能降解细胞外基质，促进肿瘤的侵袭与转移。MMP-9是MMPS中最主要的一种酶，分子量最大，以酶原形式分泌，被激活后形成Ⅳ型胶原酶，降解、破坏靠近肿瘤表面的细胞外基质（ECM）中的Ⅳ型、V型胶原和明胶，使肿瘤细胞沿着缺失的基膜（BM）向周围浸润，最终导致肿瘤的侵袭和转移 ［1］。肿瘤的形成和转移的发生是多基因、多因子共同作用的结果，因而MMP-9在肿瘤的浸润和转移中的作用必将受到其他基因的影响。
CD44是分布极广泛的一种跨膜蛋白，位于11号染色体的短臂上，作为淋巴细胞的归巢受体和透明质酸受体，能连接细胞基质中的纤维连接蛋白、层黏蛋白、I型胶原和透明质酸分子以及与骨架蛋白相结合，引起细胞形态和游动性改变，能直接参与肿瘤的浸润和转移 ［2-3］。CD44v6是CD44的一种拼接变异体，与肿瘤的关系最为引人注目。体外实验显示CD44参与了癌细胞与基底膜主要成分Laminin和Ⅳ型胶原的黏附，有CD44v6外显子的变异拼接体能使癌细胞发生以淋巴系统为途径的扩散转移 ［4-5］。许多研究表明CD44v6的过表达与多种人体恶性肿瘤密切相关 ［6］。由于MMP-9与CD44v6在功能上的差异，因而探讨其表达的相关性必然对理解和阐明肿瘤转移的形成具有重要的理论意义。本实验研究表明CD44v6表达与胆管癌侵袭转移呈正相关性，MMP-9表达与胆管癌侵袭转移呈正相关性，同时表明CD44v6表达与MMP-9表达呈正相关性，但这种相关性是否必然，他们之间哪个起决定性作用有待进一步研究。
【】
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