乌索酸对小鼠酒精性肝损伤的保护作用
作者：邱林立 罗德生 许娟 潘代，黄佳 卢淑梅 吴卉
【摘要】 目的 探讨乌索酸对小鼠酒精性肝损伤的影响。方法 利用乙醇灌胃法建立小鼠急性肝损伤病理模型，分别以乌索酸按30mg/kg、60mg/kg小鼠口服给药，观察其对急性肝损伤小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性及肝组织丙二醛(MDA)含量的影响。结果 急性肝损伤模型组与空白对照组比较，各项指标差异均有显著性(P<0.01);乌索酸组与模型组比较，血清ALT、AST活性及肝组织MDA含量明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论 乌索酸对酒精所致的小鼠急性肝损伤具有保护作用。
【关键词】 乌索酸;乙醇;丙氨酸氨基转移酶;天门冬氨酸氨基转移酶;丙二醛;急性肝损伤
ABSTRACT:Objective To study the protective effect of ursolic acid (UA) on acute alcoholic liver injury in mice.Ursolic acid was administrated ig to the mice with acute liver injury induced by alcohol. Colorimetric method was used to detect serum ALT,AST activities and liver MDA content.Results Compared with model group, ursolic acid could significantly decrease serum ALT, AST activities liver MDA content in mice with acute liver injury induced by alcohol (P<0.05 or P<0.01).Conclusion Ursolic acid has protective effect agains acute liver injury induced by alcohol.
KEY WORDS:Ursolic acid;Alcohol;ALT;AST;MDA;Acute liver injury
乙醇滥用与乙醇依赖是社会一个重要的社会和医疗问题。肝脏是体内酒精代谢的主要器官，过量酒精的摄入会使肝脏受到不同程度的损伤。近年来，因为大量饮酒导致的酒精性脂肪肝、肝炎、肝硬化已经受到社会的广泛关注。
乌索酸(ursolic acid，UA，又名熊果酸、乌苏酸) 从忍冬科接骨木属植物陆英(sambucus?chinensis lindl)中提取[1]。陆英作为抗肝炎中药早已应用于临床，其具有显著的降酶、退黄、增进食欲、恢复肝功能的作用[2]。通过对陆英化学成分的深入研究，发现乌索酸在陆英有效成分中含量最高[3]。而乌索酸对CCl4、D?氨基半乳糖(D?GalN)等多种方法所致的小鼠急性实验性肝损伤具有保护作用[4]。为了进一步研究乌索酸的护肝作用，本实验拟观察乌索酸对酒精致小鼠急性肝损伤的影响，为乌索酸用于临床防治酒精性肝病提供一定的实验依据。
1 材料与方法
1.1 主要药品及试剂
UA(纯度98%以上)由天津市思利达科技有限公司提供;吐温80(医药上海化学试剂公司);56度红星二锅头(北京红星股份有限公司);GPT测定试剂盒(批号20080429)、GOT测定试剂盒(批号20080429)、MDA测定试剂盒(批号20080429)均为南京建成生物工程研究所出品。
1.2 主要仪器
TD4?II低速自动平衡离心机(湖南星科仪器有限公司);HSS?1数字式超级恒温浴槽(江苏省金坛市医疗仪器厂);TOSHIBA全自动生化分析仪(东芝医疗系统有限公司，ISO9001∶2000);Uvmini?1240紫外可见分光光度计(岛津制作所)。
1.3 动物分组及给药
昆明种健康小鼠60只，体质量23±5g，雌雄兼用，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。将小鼠随机分为4组，即：①空白对照组(下称空白组);②模型组;③UA高剂量(60mg/kg)组;④UA低剂量(30mg/kg)组，每组15只。空白组及模型组动物，每天每只小鼠按0.2ml/10g的蒸馏水灌胃;UA高、低剂量组动物，每天按上述用量分别用不同浓度的UA (用吐温80助溶)灌胃。小鼠自由饮食及饮水，连续6d。 中途死亡的小鼠予以剔除。
1.4 制备急性肝损伤模型
按[5]方法，在末次给药1h后，模型组和UA高、低剂量组经口一次性给予56度红星二锅头20ml/kg，禁食16h。然后4组小鼠均眼眶采血，及时分离血清。采用TOSHIBA全自动生化分析仪测血清AST、ALT活性。另取小鼠肝脏同一位置部分组织称重，用生理盐水匀浆成10%肝组织匀浆，用Uvmini?1240紫外可见分光光度计测其MDA值。
1.5 统计学处理
数据用±s表示，组间比较采用t检验，P<0.05为差异有显著性，P<0.01为差异有非常显著性。
2 结 果
本实验结果发现，与空白组比较，模型组小鼠血清ALT、AST活性和肝组织MDA含量明显升高(P< 0.01)，提示急性肝损伤病理模型制备成功;而UA高、低剂量组小鼠血清ALT、AST活性和肝组织MDA含量均较模型组相应指标低，差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。见表1。表1 UA对酒精致肝损伤小鼠血清ALT、AST活性及肝MDA含量的影响 与模型组比较，*P<0.05、**P<0.01
3 讨 论
急性酒精性肝损伤的机制是大量乙醇一次性进入机体后，在乙醇脱氢酶的催化下大量脱氢氧化为乙醛和乙酸盐，使三羧酸循环障碍和脂肪酸氧化减弱而影响脂肪代谢。乙醇可导致α?磷酸甘油增多而促进甘油三酯合成，致使脂肪在肝细胞内沉积，同时激活氧分子，产生大量氧自由基致肝细胞膜的脂质过氧化及体内还原型谷胱甘肽(GSH)的耗竭[6]。GSH是一种抗氧化剂，是GSH?PX的底物，对自由基有较强的清除作用。乙醇代谢产物乙醛能直接与GSH结合[7，8]，消耗肝细胞中的GSH，使肝组织中的GSH进一步下降，以致不足以清除自由基，抗氧化能力减弱，MDA含量升高。目前已有研究表明乌索酸对CCl4、D?GalN、BCG?LP引起的小鼠实验性肝损伤具有明显的保护作用[9]。但尚未见关于其对酒精性肝损伤的保护作用。
本实验观察到通过一次性给予小鼠灌胃56度红星二锅头可致模型组小鼠血清ALT、AST活性和肝组织MAD含量明显高于空白组，表明急性肝损伤动物病理模型成功复制。乙醇可以激活氧分子产生氧自由基导致肝细胞膜的脂质过氧化损伤，使AST、ALT从受损肝细胞内逸入血液。本实验同时发现，UA组小鼠的血清ALT、AST活性明显低于模型组，说明UA可以有效阻止肝细胞坏死。MDA是脂质过氧化的最终产物，UA可以显著抑制乙醇所致的肝脏MAD含量增加，表明UA可对抗乙醇所致的肝脏脂质过氧化反应，减轻乙醇对肝细胞的损害。实验结果提示，UA对乙醇诱导的急性肝细胞损伤的保护作用与其抗脂质过氧化、阻止肝细胞坏死有关，作用机理可能为抑制脂质过氧化、提高GSH含量、稳定肝细胞膜系统、促进肝组织修复等[9]。
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