乙肝病毒前S1蛋白相对滴度与HBV-DNA定量表达相关性研究
【摘要】 目的：探讨前S1蛋白(Pre-S1)相对滴度与HBV-DNA定量表达的相关性。方法：用ELISA法检测180份标本前S1蛋白、乙肝标志物(HBVM)，荧光定量PCR法检测HBV-DNA;Pre-S1相对滴度值,计算HBV-DNA常用对数值。结果： 180份标本中Pre-S1和HBV-DNA阳性检出率没有差异(P>0.05)，Pre-S1相对滴度与HBV-DNA定量对数值在标志物HBeAg分组和不同临床类型中同步升降，呈正相关，相关系数分别是0.9789、0.9380。结论： Pre-S1抗原相对滴度与HBV-DNA定量结果密切正相关,有利于临床分型、。
【关键词】 Pre-S1相对滴度； 前S1蛋白、 HBV-DNA定量
1990年Petit［1］等观察到乙肝前S1蛋白(Pre-S1)主要存在于血清完整的HBV表面，同时还认为Pre-S1是HBV-DNA复制的必然伴随物，与HBV复制关系密切。检测结果表明乙肝E抗原和HBV-DNA阳性组100%检测到前S1抗原。进一步研究表明前S1蛋白参与介导病毒颗粒粘附宿主细胞，并直接反应HBV-DNA的血清浓度［2，3］。为进一步探讨前S1蛋白与HBV-DNA的关系，我们对Pre-S1和HBV-DNA进行定量研究，现将结果报告如下。
1 材料和方法
1.1 标本来源
2006年9月～2007年3月总共7个月收集急慢性乙型肝炎患者、HBsAg携带者和正常健康体检者标本共180份，其中急性乙型肝炎患者(AH)30份，慢性活动性肝(CAH)35份，慢性迁延性肝炎(CPH)35份无症状携带者(ASC)40份健康体检标本40份作阴性对照，患者都符合《病毒性肝炎防治方案》(1990上海)诊断标准。
1.2 仪器、试剂和方法
① 芬兰MK3型酶标仪， WELLWash４洗板机，瑞士罗氏Light cyclerTM全自动荧光定量PCR诊断系统。②Pre-S1检测试剂购于上海阿尔法生物技术有限公司, 乙肝标志物检测HBsAg、HBsAb、 HBeAg、 HBeAb、 HBcAb, 检测试剂购于上海科华公司，(ELISA法)按说明书操作； HBV-DNA检测试剂购于上海科华公司PCR荧光定量法。③ 将前S1蛋白的吸光度/Cut off比值拟定为相对滴度，计算均数和标准差, HBV-DNA以copies/ml对数计算均数和标准差(±s)，均数和相关系数的显著性检验用t检验，率的检验用u检验。
2 结果
2.1 180份HBsAg阳性标本Pre-S1和HBV-DNA检出结果表1 Pre-S1和HBV-DNA检出结果从表1 可见180份标本中Pre-S1检出率40% (72/180)，HBV-DNA检出率33.33%(60/180)，两者比较无显著差异 (P>0.05)，两者均阳性52例，均阴性100例，两者符合率84.44% (152/180)。
2.2 对Pre-S1和HBV-DNA均阳性的52份标本，按HBeAg分组统计Pre-S1相对滴度和HBV-DNA定量对数值
从表2可见，在HBeAg+ 组HBV-DNA值高，Pre-S1相对滴度值高，HBeAg-组与HBeAg+ 组HBV-DNA值比较有非常显著性差异（P<0.01）； Pre-S1相对滴度HBeAg-组与HBeAg+ 组比较也有显差异，而HBeAg-组间比较Pre-S1和HBV-DNA均没差异。计算Pre-S1和HBV-DNA相对滴度和病毒载量对数的相关系数r=0.9789,经t 检验P<0. 01，说明两者关系密切。表2 Pre-S1和HBV-DNA均阳性分组定量结果注：*与“HBeAg+”组比较组间差异P<0.01，△P<0.05。
2.3 不同临床类型HBV感染标本Pre-S1相对滴度和HBV-DNA定量对数值关系表3 不同临床类型HBV感染标本Pre-S1相对滴度和 HBV-DNA定量对数值关系注：* 与ASC比较， P<0.05。
从表3可知， AH和CAH组Pre-S1相对滴度和HBV-DNA对数值与CPH和ASC组同步增高，CAH与CPH比较，P<0.05有显著性差异，统计Pre-S1组与HBV-DNA组相关性，相关系数r=0.9380，高度相关。
3 讨论
乙型肝炎病毒Pre-S1蛋白经常存在于HBV标志物如 HBeAg、HBV-DNA或HBV-DNAP阳性血清中，故认为是病毒复制的标志物之一［4］,有些学者认为不能正确地反应HBV 的复制情况［5］。HBV-DNA是HBV复制的直接依据，本研究的目的是从量的角度进一步探讨Pre-S1与HBV-DNA的相关关系。
本研究结果表明：Pre-S1和 HBV-DNA两组分别从180例标本中检出率分别为40.00%和33.33%，两者比较无显著差异(P>0.05),且阴阳性符合率84.44%。在Pre-S1阴性标本中，HBV-DNA 检出8例，检出率为7.41% (8/108),可能与免应答中S1抗体的中和作用有关；而在HBV-DNA阴性组中，Pre-S1检出20例，检出率为16.67 (20/120)，则可能因HBV-DNA水平低于检出限值有关，同时也表明两者各自表达的意义不同。
在乙型肝炎的诊断和中，应用HBV-DNA定量技术为乙型肝炎的治疗和预后监测提供了重要依据［6］，HBV-DNA值直接表达了病毒感染的数量的多少，只有入侵肝才能引起细胞损伤，Pre-S1在病毒入侵中起重要作用［7］，因而研究其量的相关性对肝炎患者肝脏损害有重大意义。实验结果表明(表2)，在HBeAg+的标志物组和在HBeAg-的标志物组中，比较Pre-S1相对滴度有显著差异性， 比较HBV-DNA定量对数值也有显著差异性，HBeAg-的标志物组内两者均无差异，且出现相对应的高低水平，比较Pre-S1和 HBV-DNA的相关性，相关系数r为0.9787，高度正相关。
观察不同临床类型HBV感染者血清Pre-S1和HBV-DNA量的表达，对乙型肝炎发病机理研究、疾病治疗和转归预测有十分重要的意义。本实验结果表明，不同临床类型的乙肝患者存在着不同水平的Pre-S1和HBV-DNA量，AH：Pre-S1相对滴度和HBV-DNA分别是5.5964±2.1627、7.5246±2.1529，CPH：4.2526±1.4325、6.5428±2.0091，CAH：2.8921±1.2493、4.8916±1.3542，ASC：2.9205、3.6978，而将AH、CPH组Pre-S1相对滴度与CAH、ASC比较， P<0.05，其HBV-DNA对数值比较P<0.05。统计不同的病程Pre-S1相对滴度和HBV-DNA对数值相关性，相关系数r=0.9380，两者密切相关。结果还表明临床分型不同，Pre-S1相对滴度和HBV-DNA对数值相对应，有助于临床分型。
有学者认为，前S1抗原与HBsAg相关，不能正确地反应HBV复制的情况，我们定量地研究了Pre-S1和HBV-DNA关系，说明两者密切正相关，因此前S1定量检测可较好地反应HBV的存在或复制情况，特别同步检测对评价临床表现和抗病毒效应有较在的实用价值。
【】
1 Petiti M A， Zoulim F, et al. Variable expression of Pre S1 antigen in serum during chronic hepatitis B virus infection: An accurate marker for the level of hepatitis B virus replication. Hepatology ,1990，11:809.
2 Hu P S. Quantiative studies of hepatitis B virus pre-s proteins: Lack of correlation with the HBeAg status I.Virol Meth,1987，16:97.
3 Gerken G. Pre-S encoded surface proteins relation to the major viral surface antigen in acute HBV infection. Gastroenterology,1987，92:1864.
4 Zoulim F, Petit M A, Vitviski L, et al. Detection of Pre S1 antigen in PBMC and serum of anti HBc positive chronic HBsAg carries: A relevant too for the decision of antiviral therapy, J Hepatol,1989，9:89.
5 费国忠,姚光弼.IFN a.-2b治疗慢性乙型肝炎中血清前S1、S2的动态变化.上海免疫学杂志,1992，12:87.
6 吕建新.分子诊断学在检验医学中的应用前景.中华检验医学杂志，2005，28：138 .
7 Dash S. Rao KV, panda SK. Receptor for PreS1(21～47) component of hepatitis B Virus on the liver cell: role in virus cell interaction. J Med Virol,1992，37:116.
