枳椇子水提取液治疗非酒精性脂肪性肝炎的实验研究

                       作者：张永华 李永峰 张敏娜 冯慧

【摘要】  目的：观察枳椇子水提取液对实验大鼠非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的作用。方法：用高脂饲料诱导非酒精性脂肪性肝炎大鼠模型8周后，灌服枳椇子水提取液治疗2周，观察对模型大鼠肝脏病理脂肪变、炎症程度及血清ALT、AST、TNF?α、IL?8、FFA、胰岛素敏感性指标（ISI）和肝组织MDA、SOD的影响，并与凯西莱联合易善复治疗进行比较。结果：枳椇子能明显减轻模型大鼠肝脏炎症和脂肪变程度（P<0.01）；降低血清ALT、AST、TNF?α、IL?8、FFA、肝组织MDA、SOD、提高ISI（P<0.01或P<0.05）。除肝组织MDA、SOD外，其它指标均明显优于对照组（P<0.05）。结论：枳椇子水提取液对高脂饲料诱导的大鼠NASH有明显的治疗作用，效果优于凯西莱联合易善复治疗，其作用机制可能与提高胰岛素敏感性、抗氧化、抑制炎症细胞因子等有关。

【关键词】  非酒精性脂肪性肝炎 大鼠 枳椇子

    Abstract  Objective:To observe the therapeutic efficacy of the water extract of raisin tree seed on non?alcoholic steatosis hepatitis (NASH) in rats. Methods:NASH rat model was established after an 8?week high fat diet. NASH rats were gavaged with the water extract of raisin tree seed for 2 weeks. Fatty change and inflammation in the liver was observed pathologically and serum alanine aminotransferase(ALT), aspartate aminotransferase(AST), tumor necrosis factor  α (TNF?α), interleukin 8 (IL?8), fatty acid, insulin sensitivity index (ISI), and malondialdehyde(MDA) and superoxide dismutase(SOD) in liver tissue were measured or calculated after the administration. Another group treated with Tiopronin combined with Essentiale Forte served as the control group. Results:The extract of raisin tree seed dramatically improved the fatty change and inflammation in the liver (P<0.01), decreased ALT, AST, TNF?α, IL?8, fatty acid, MDA and SOD, and increased ISI (P<0.01 or P<0.05). Compared to the control group, most of the parameters were better in the raisin tree seed group except MDA and SOD (P<0.05). Conclusion:The exract of raisin tree seed has a better therapeutic efficacy on high fat diet?induced NASH compared to Tiopronin combined with Essentiale Forte. The underlying mechanism of this effect may be related to increasing insulin sensitivity, antioxidation, and inhibiting inflammatory cytokines.

    Key words  non?alcoholic steatosis hepatitis  rat  raisin tree seed

    近年来，随着人们生活方式和饮食结构的改变等，脂肪性肝病的发病率不断增加，在某些地区已成为仅次于慢性病毒性肝炎的第二大肝病[1]，目前尚缺乏有效的治疗方法。我们根据中医记载和自己临床经验，应用枳椇子水提取液治疗实验大鼠NASH，现将结果报道如下。

    1  材料与方法

    1.1  实验动物  SD雄性大鼠40只，清洁级，体重200～250g，由浙江省实验动物中心提供，许可证号为SYXK(浙)2005-0074，饲养于浙江省医学院实验动物中心。

    1.2  造模方法  正常大鼠每天用高脂饲料(基础饲料82.5%、胆固醇2%、胆酸钠0.5%、蛋黄粉5%、猪油10%)持续饲养8周，诱导NASH大鼠模型。

    1.3  药物制备  ①枳椇子水提取液制备：取枳椇子（产地陕西），压扁，置小型提取器中，加水提取两次，合并煎液，制取含生药0.2g/ml浓度枳椇子水提取液。②硫普罗宁和多烯磷脂酰胆碱混合药液制备：硫普罗宁片(商品名：凯西莱，批号061207，河南省新谊药业股份有限公司)和多烯磷脂酰胆碱片（商品名：易善复，批号D8096，北京安万特有限公司）分别研粉，加蒸馏水配制成每毫升含硫普罗宁6mg/ml、多烯磷脂酰胆碱13.68mg的混合药液。

    1.4  分组及治疗  40只大鼠随机分为空白组、模型组、枳椇子组、对照组，每组各10只。空白组：正常饲养8周后，予蒸馏水10ml/kg，1天分2次灌服；模型组：造模8周后，予蒸馏水10ml/kg，1天分2次灌服；枳椇子组：造模8周后，予枳椇子水提取液10ml/kg，1天分2次灌服；对照组：造模8周后，予硫普罗宁和多烯磷脂酰胆碱混合药液10ml/kg，1天分2次灌服，均连续2周。

    1.5  观察指标  实验结束后，股动脉取血，采用奥林巴斯全自动生化仪测定肝功能（ALT、AST）和血糖(FBG)；采用ELIAS法测定血清肿瘤坏死因子(TNF?α)、白介素8（IL?8)、脂肪酸（FFA）；采用放射免疫法测定胰岛素(FINS)，以1/FBG×FINS胰岛素敏感性指标（ISI），因为非正态分布，统计时取其对数。处死大鼠，取肝组织加生理盐水(1∶9)匀浆取上清夜，采用化学比色法测定丙二醛（MDA）、超氧化歧化酶（SOD）。取肝组织HE染色，中华医学会肝病学会分会脂肪肝和酒精性肝病学组“非酒精性脂肪肝诊断标准”[2]观察病理改变。

    2  结  果

    2.1  各组肝组织脂肪变、炎症程度  模型组肝组织脂肪变及炎症积分均较空白组明显增高（P<0.01）；枳椇子组肝组织脂肪变及炎症积分较模型组明显减轻（P<0.01）；枳椇子组脂肪变、炎症程度明显低于对照组（P<0.05），见表1。

    2.2  各组ALT、AST和ISI  模型组血清ALT、AST较空白组明显增高（P<0.01），ISI较空白组明显降表1  各组肝组织脂肪变、炎症程度积分比较

    与空白组比较，**P<0.01；与模型组比较，△△P<0.01；与对照组比较，▲P<0.05低（P<0.01）；枳椇子组血清ALT、AST较模型组明显降低（P<0.01），而ISI较模型组明显升高（P<0.05）；枳椇子组ALT、AST明显低于对照组（P<0.05）、ISI明显高于对照组（P<0.05），见表2。

    2．3  各组血清炎症细胞因子水平  模型组血清TNF?α、IL?8、FFA水平较空白组明显增高（P<0.01）；枳椇子组血清TNF?α、IL?8、FFA水平较模型组明显减轻（P<0.01或P<0.05）；枳椇子组与对照组比较，血清IL?8、FFA水平明显降低（P<0.05），见表3。

    2．4  各组肝组织MDS、SOD  模型组肝组织SOD较空白组明显减低（P<0.01），MDA较空白组明显增高（P<0.01）；枳椇子组肝组织SOD较模型组明显增高（P<0.01），MDA较模型组明显减低（P<0.05）；枳椇子组SOD明显低于对照组（P<0.05），见表4。

    3  讨  论

    枳椇子是鼠李科植物枳椇的成熟果实和种子，无毒，为药食两用物品。《本草纲目》记载该药“甘，平，无毒。止烦除渴，去膈上热，润五脏，利大小便”。我国民间也常用该药养肝保肝。研究证明其对酒精性肝病有较好的防治作用[3]，但对非酒精性肝病研究较少。

    非酒精性脂肪肝(NAFL)确切的发病机制目前尚不明确。大多数学者认可“二次打击学说”[4]。表2  各组ALT、AST和ISI比较与空白组比较，**P<0.01；与模型组比较，△P<0.05,△△P<0.01；与对照组比较，▲P<0.05表3  各组血清TNF?α、IL?8、FFA比较表4  各组肝组织MDS、SOD比较

    与空白组比较，**P<0.01；与模型组比较，△P<0.05,△△P<0.01；与对照组比较，▲P<0.05其中胰岛素抵抗为NAFLD和NASH发病机制的第一次打击，氧应激和脂质过氧化则是第二次打击。本研究在观察枳椇子水提取液对NASH模型大鼠肝功能指标和肝脏病理影响的同时，观察了其对炎症细胞因子和自由基指标的影响。实验结果表明，通过高脂饲料持续喂养8周后，大鼠肝脏发生明显的脂肪变和炎症，肝功能明显异常，提示造模成功；血清炎症细胞因子水平和肝组织MDS、SOD明显升高，ISI明显降低，说明大鼠NASH的发病机制与人类基本一致。枳椇子水提取液后大鼠肝脏脂肪病变、炎症程度明显改善，ISI指数明显提高，血清肝功能、TNF?a、IIL?8、FFA和肝组织MDS、SOD水平均明显下降，提示枳椇子水提取液对非酒精性脂肪性肝炎具有较好作用，其作用机制与枳椇子增加胰岛素敏感性、抗氧化、抑制炎症细胞因子等作用有关。

【】
  1 范建高,朱 军,李新建,等.上海市成人脂肪肝患病率及其危险因素流行病学调查.中华肝脏病杂志,2005,2（13）:83?88

2 中华医学会肝病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组．酒精性肝病诊疗指南．肝脏，2006，11(1)：66?67

3 丁 静．枳椇子预防大鼠酒精性脂肪肝的实验研究．浙江中西医结合杂志，2007，17(3)：156?58

4 Savas MC，Koruk M，Pirim I，et al．Serum ubiquitinlevels in patients with nonalcoholic steatohepatitis．Hepatogast roenterology，2003，50(51)：738?741