浅表性膀胱癌组织中肿瘤抑制因子 Maspin 的表达研究
【摘要】 目的：探讨 Maspin 基因蛋白在浅表性膀胱癌病理组织中的表达及意义。方法：选择浅表性膀胱癌组织病理切片 60 例，非膀胱肿瘤患者膀胱组织 13 例，应用免疫组化方法分析 Maspin 在膀胱组织中的表达。结果：非膀胱肿瘤组织 Maspin 阳性表达高达 92.3%，浅表性膀胱癌组织中 Maspin 表达阳性率仅为 33.3%，而且随着病理分级增加 Maspin 表达下降（G1 级 50.0%、G2 级 30.3%、G3 级 26.7%）。非肿瘤组织中 Maspin 阳性免疫反应部位主要位于细胞核内，而膀胱癌组织中 Maspin 阳性表达多位于细胞浆。结论：膀胱肿瘤组织中 Maspin 表达显著减少，多呈胞浆阳性表达，提示 Maspin 可能与膀胱癌的发生有关。
【关键词】 浅表性膀胱癌；Maspin 蛋白 ；免疫组化
〔Abstract Objective To study the expression and significance of tumor suppressor gene maspin in superficial carcinoma of bladder. Methods Immunohistochemistry method was used to determine the immunoreactivity of maspin in 60 patients' pathological section with superficial carcinoma of bladder and 13 with non-tumors of bladder. Results The positive immunostaining rate of maspin protein was 92.3% in non-tumors of bladder but 33.3% in superficial carcinoma of bladder. The immunoreactivity of maspin protein was chiefly located in the caryon of the former and cytoplasm of the later. Conclusion The present results indicated that tumor suppressor gene maspin might relate with the development of bladder tumor.
〔Key Words〕 Superficial carcinoma of bladder; Maspin; Immunohistochemistry
Maspin 位于 18 号染色体（18 q 21.3），它是丝氨酸蛋白酶抑制因子 (serin protease inhibitor, Serpin）家族成员，是近年被认识和重视的新的基因[1]。最近的研究显示 Maspin 具有抑制血管生长及促进肿瘤细胞凋亡的作用，因而被视为新的抑制肿瘤基因。研究表明 Maspin 对多种肿瘤（如前列腺癌、乳腺癌、舌癌等）的发生发展和转移起着重要的作用 。但 Maspin 与膀胱肿瘤的关系少见报道。本研究应用免疫组织化学方法检测 Maspin 基因蛋白在浅表性膀胱癌病理标本组织中的表达，初步探讨 Maspin 与浅表性膀胱癌发生关系。
1 材料与方法
1.1 材料分组及处理 我院于 1990-2000 年间手术切除的膀胱癌病理标本，选择浅表性膀胱癌 60 例，按 WHO 标准进行病理分级，其中 G1 级 12 例、G2 级 33 例、G3 级 15 例。正常对照组为非膀胱肿瘤患者进行膀胱镜检查中获得的活检组织，共 13 例。
1.2 试剂及方法 Maspin 检测采用卵白素-生物素-辣根过氧化氢酶复合物 ABC 法。抗 Maspin 抗体为鼠抗人单克隆抗体。2% 小牛冻干血清蛋白 BSA 为美国 Sigma 公司产品。ABC 试剂盒和 DAB 底物试剂盒为美国 Vector 公司产品。石蜡切片置于 pH 6.0 的枸橼酸钠缓冲液中微波处理 5 min。病理切片在正常小牛血清中室温下孵育 30 min 封闭非特异性抗原，一抗原液按 1:45 比例稀释后室温孵育 1 h，切片经 TBS 缓冲液冲洗后与二抗在室温下共同孵育 30 min，在和卵白素－抗生物素和 DAB 反应后，经苏木精复染、脱水、二甲苯透明、封片后置于显微镜下观察。
对照：阴性对照采用正常小鼠血清代替一抗，采用非肿瘤性前列腺组织标本作阳性对照。
1.3 结果判断 40 倍显微镜下观察，阳性强度按以下标准分类：阴性（无细胞被染色，-）；弱阳性（0~4% 细胞染色，±）；阳性（5%~49% 细胞染色，+）；强阳性（> 50% 细胞染色，++）。按阳性染色部位分为核阳性和浆阳性。
1.4 统计学分析 应用 SPSS 10.0 统计软件进行分析，结果比较采用 检验，P < 0.05 判为有统计学意义。
2 结 果
2.1 阳性表达情况 13 例非肿瘤性膀胱组织中，Maspin 阳性表达者 12 例，阳性率高达 92.3%，其中弱阳性 3 例（23.1%）、阳性 7 例（53.8%）、强阳性 2 例（15.4%）。60 例非浸润性膀胱癌组织中Maspin 表达随病理分级增加而减少，G1 级阳性率为50.0%，G2 级阳性率 30.3%，G3 级阳性率仅为26.7%，具体结果详见表 1。
2.2 表达部位 正常非肿瘤膀胱组织中，Maspin 阳性表达多位于细胞核。而非浸润性膀胱癌组织的 Maspin 阳性表达多位于胞浆，见表 2。
3 讨 论
Maspin 含 2 584 个核苷酸，编码 375 个氨基酸的蛋白质，因其具有稳定的三级结构，故可以用免疫组化方法进行检测[1]。最近的研究显示 Maspin 在体内和体外均具有抑制血管生长的作用，研究还发现Maspin 具有促进肿瘤细胞凋亡的作用，因而被视为新的抑制肿瘤基因。Maspin 与腺癌、鳞癌的关系研究较为深入，研究证明其表达减少与乳腺癌[2]、前列腺癌[3]及舌的扁平磷状细胞癌[4]的发生及转移均有密切关系，但有关 Maspin 与膀胱癌的关系研究较少，且结论不一，Martin[5]等对 110 例膀胱癌组织的检测表明，Maspin 在肿瘤组织中也有较强的表达，且其表达与否和膀胱癌的复发或痊愈时间无显著关系，提示 Maspin 在膀胱癌发生中所起的作用尚待进一步证实。
本研究表明，非肿瘤组织中 Maspin 阳性免疫反应部位主要位于细胞核内，而膀胱癌组织中 Maspin 阳性表达多位于细胞浆。非肿瘤膀胱组织 Maspin 阳性表达高达 92.3%，浅表性膀胱癌组织中 Maspin 表达显著减少，而且随着病理分级增加 Maspin 表达下降，提示 Maspin 表达减少可能与非浸润性膀胱癌的发生及严重程度有关。Maspin 在细胞内不同部位的表达是否具有不同的生物学行为和临床意义有待进一步研究。
【】
〔1〕Bailey CM, Khalkhali-Ellis Z, Seftor EA, et al. Biological functions of Maspin〔J〕. J Cell Physiol, 2006, 209(3):617-624
〔2〕Gabril MY, Duan W, Wu G, et al. A novel knock-in prostate cancer model demonstrates biology similar to that of human prostate cancer and suitable for preclinical studies〔J〕. Mol Ther, 2005, 11(3):348-362
〔3〕Cella N, Contreras A, Latha K, et al. Maspin is physically associated with[beta]1 integrin regulating cell adhesion in mammary epithelial cells〔J〕. FASEB J, 2006, 20(9):1510-1512
〔4〕Cho JH, Kim HS, Park CS, et al. Maspin expression in early oral tongue cancer and its relation to expression of mutant-type p53 and vascular endothelial growth factor (VEGF)〔J〕. Oral Oncol, 2006, 13, [Epub ahead of print]
〔5〕Martin G, Friedrich, Marieta I, et al. Expression of Maspin in Non-Muscle Invasive Bladder Carcinoma:Correlation with Tumor Angiogenesis and Prognosis〔J〕. European Urology, 2004, 737-743
