子宫内膜癌中PTEN突变研究

【摘要】  目的：研究抑癌基因PTEN在子宫内膜癌中的表达，探讨其临床意义。方法：采用免疫组化法，检测对正常子宫内膜、子宫内膜增生过长、子宫内膜不典型增生各20例，子宫内膜癌50例及子宫内膜癌旁组织50例中PTEN的表达情况。结果：PTEN在正常子宫内膜、子宫内膜增生过长、子宫内膜不典型增生、子宫内膜癌旁组织及子宫内膜癌中表达缺失率逐渐上升，P<0.05，差异有统计学意义。表达缺失率与组织学类型、组织学分级有关，P<0.05,与子宫内膜腺癌肌层浸润深度、临床分期、淋巴结转移无关，P>0.05。结论：PTEN表达缺失是早期诊断子宫内膜腺癌的较好的生物标志，参与子宫内膜腺癌的发生、。

【关键词】  子宫内膜癌 PTEN 基因突变 免疫组织化学染色SP法

    [Abstract]   Objective:To study the expression and clinical significance of PTEN in the pathogensis of endometrial carcinoma. Methods: A specific and sensitive immunohistochemical S-P assay was used to detect the expression of PTEN  in 20 cases of normal endometrium，endometrial hyperplasia and atypical hyperplasia of endometrial, 50 cases of the tissue near the endometrial carcinoma and endometrial carcinoma. Results：The loss expression rates of PTEN in normal proliferative endometrium , endometrial hyperplasia , atypical hyperplasia of endometrial , the tissue near the endometrial carcinoma , and endometrial carcinoma were gradually increased. The difference was significant . In endometrial carcinoma the loss of PTEN expression was significantly related to the histological type(P<0.05) and the cell grade(P<0.05),but not related to the depth of myometrium invasion and the clinical stage and metastasis(P>0.05).Conclusion：The loss of PTEN expression may be used as a diagnostic biomarker for the earliest endometrial carcinoma, and may play some roles in the carcinogenesis and development of endometrial carcinoma.

    [Key words]   Endometrial carcinoma；PTEN；Gene mutalion; Inmunohistochemical s-p assay

    子宫内膜癌是妇女最常见的生殖系统恶性肿瘤，其发生的分子机制尚不清楚。子宫内膜癌的发生过程漫长，在此过程中抑癌基因的失活、突变和癌基因的异常激活可能发挥重要的作用，找出它的早期分子变化，对子宫内膜癌的防治至关重要。PTEN是近年来发现的具有双重特异性磷酸酶活性的抑癌基因，它的突变或缺失在子宫内膜腺癌中达到40%~83%[1]。本文采用免疫组化法，检测对50例子宫内膜癌中PTEN蛋白表达情况,以了解其在子宫内膜癌发病中所起的作用。

    1   材料与方法

    1.1   临床材料   南通大学第二附属1996年1月～2005年1月住院的子宫内膜癌患者50例，年龄21～85岁，平均56.25岁。选取同期诊刮后正常子宫内膜，子宫内膜增生过长，子宫内膜不典型增生各20例，所有子宫内膜癌患者行广泛或次广泛子宫切除加盆腔淋巴结清扫，术前未经任何治疗，所有病例经病理证实。

    1.2   病理检查及免疫组织化学   子宫内膜癌及相应癌旁组织、正常子宫内膜、子宫内膜增生过长、子宫内膜不典型增生组织，经4%的中性甲醛固定，常规石蜡包埋，连续切片，切片厚5μm，经我院两名高年资病理科医生复片。PTEN蛋白采用免疫组织化学染色SP法，二氨基联苯胺（DAB）显色。PTEN多克隆抗体为即用型抗体，购自福州迈新生物公司。一抗为Ket-S710,试剂用已知阳性的肺鳞癌作为PTEN阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。

    1.3   免疫组化结果判断   细胞的胞核，胞浆染成棕黄色为阳性细胞。光镜观察10个高倍视野，阳性细胞数＜10%为阴性（-），10%~50%为弱阳性（+），＞50%为强阳性（++）。

    1.4   统计学方法   所有资料采用SPSS10.0统计软件，计数行χ2检验，秩和检验和Spearman秩相关分析，P＜0.05示有统计学意义。

    2   结      果

    2.1   不同子宫内膜组织中PTEN的表达   见表1。免疫组化结果显示PTEN主要分布于正常子宫内膜和子宫内膜癌细胞的细胞浆中，部分胞核着色。

    2.2   PTEN与子宫内膜癌临床病理特点的关系   见表2。50例子宫内膜癌中PTEN阴性29例，表达缺失率58%，子宫内膜癌旁组织、子宫内膜不典型增生中表达缺失率34%，35%，差异有统计学意义（P<0.05）。在正常子宫内膜、子宫内膜增生过长中表达缺失率分别为0，5%，P>0.05,差异无统计学意义。PTEN表达缺失率在两组肿瘤间为63.6%、16.7%差异有统计学意义（P<0.01），随着组织学分化程度的降低，G1G2分别与G3级比较，差异有统计学意义（P<0.05）。PTEN表达缺失率在临床分期、肌层浸润深度、淋巴结转移差异无统计学意义（P>0.05）。

    3   讨      论

    PTEN，又称MMACI基因，定位于染色体10q23，由9个外显子组成，编码450个氨基酸组成的蛋白质，相对分子质量为5000～50000，具有双重磷酸酶活性，主要是通过脂质磷酸酶活性即PIP3脱磷酸，降低细胞内的PIP3水平，阻断Akt—蛋白激酶B(PKB)途径，使细胞周期阻断在G1期或促使细胞凋亡，对细胞的生长起负调控作用[2]。PTEN是子宫内膜癌中突变率最高的基因，也是该肿瘤恶变中占主导地位的突变基因[3]，本研究显示，50例子宫内膜癌中，PTEN的表达缺失率达58%，在正常子宫内膜、子宫内膜增生过长、子宫内膜不典型增生、子宫内膜癌旁组织中分别为0%，5%，35%，34%，子宫内膜癌旁组织、子宫内膜不典型增生较子宫内膜癌中的表达缺失率明显降低，与国内张育军[3]报道的在正常子宫内膜及子宫内膜癌中的表达缺失率为0%，56.7%较为接近，差异有统计学意义，本研究对PTEN表达与子宫内膜癌的生物学行为进行探讨，发现6例子宫内膜癌腺鳞癌与44例子宫内膜腺癌PTEN表达缺失率分别为16.7%，63.6%，提示子宫内膜腺癌与其它组织类型癌有不同的发生机制，据Mutter[4]报道，PTEN突变率在子宫内膜腺癌中比浆液性乳头状腺癌高7倍，因此，后者的发生和PTEN突变无关。本实验对子宫内膜癌两种不同病理类型可能起源于不同的子宫内膜干细胞，即支持子宫内膜癌的二元理论。PTEN在不同组织学分级的子宫内膜腺癌中，表达缺失率随组织学分级的增高显著增强，在G1、G2、G3中，PTEN表达缺失率分别为46.7%、68.1%、85.7%，G1、G3间P<0.01，G2、G3间P<0.05，与肌层浸润深度、手术病理分期、淋巴结转移无关，与国内高庆蕾报道的相一致[5]，本研究表明，随着子宫内膜从良性向恶性的转化，PTEN的表达缺失率逐渐增加，PTEN在子宫内膜腺癌的发生中发挥作用，Mutter[4]用免疫组化检测132例内膜组织，包括正常增生期、复合型增生和EIN,其PTEN表达缺失率为43%，56%，63%，提示PTEN是子宫内膜腺癌早期分子事件，对病人的早期诊断有重要意义。

【】
  [1] Nagase S,Yamakawa H,Sato S,et al.Identification of a 790-kilobase region of common allelic loss in chromosome 10q25-26 in human endometrial cancer[J].Cancer Res,1997,57:1630-1633.

[2] 李淑敏.子宫内膜癌组织中抑癌基因PTEN的研究现状[J].中华妇产科杂志,2002，37（12）：754-758.

[3] 张育军,魏丽惠，孙铁铮，等.肿瘤抑癌蛋白PTEN、P53在子宫内膜癌组织中的表达[J].妇产科临床,2001,2(4):230-233.

[4] Mutter GL, Linmc C， Fitzgeraldj T, et al. Altered PTEN expression as a diagnostic marker for the earliest endometrial precancers[J].Nati Cancer Insti,2005,92:924-931.

[5] 高庆蕾，叶 飞，邢 辉,等. PTEN在子宫内膜癌中的表达及其意义[J]. 中国组织化学与细胞化学杂志，2002，11（4）：425-427.