Survivin基因在肝门部胆管癌组织中的表达及其与nm23和PTEN相关性的研究
作者：石晓岩 智绪亭 韩兴华
【摘要】 目的：探讨Survivin基因在肝门部胆管癌组织中的表达情况以及与nm23和PTEN 基因表达的相关性。方法：应用免疫组织化学方法测定肝门部胆管癌及相应癌旁正常组织中Survivin、nm23 和 PTEN 基因的表达，分析Survivin基因表达与肿瘤组织病理分级、淋巴结转移以及 nm23 和 PTEN 基因的相关性。结果： 44 例肝门部胆管癌组织中， Survivin 基因阳性表达率 63.6%，15 例癌旁组织中 Survivin 基因阳性表达率为 6.67%，二者比较差异有统计学意义（P<0.05）； Survivin 基因表达与病理分级无关（P>0.05），与淋巴结转移无关（P>0.05）；Survivin 基因表达与 PTEN 及 nm23 的表达呈负相关（P<0.05）。结论： Survivin 基因的高表达在肝门部胆管癌的发生、进展和转移过程中可能起重要作用；联合检测 Survivin 与 PTEN 及 nm23 基因表达可能有助于临床诊断及判断预后。
【关键词】 胆管肿瘤，肝门部·Survivin·PTEN·nm23·基因表达
Expression of Survivin and its correlation with PTEN and nm23 in hilar cholangiocarcinoma
【ABSTRACT】 Objective： Investigate the expression of Survivin and its correlation with the expression of PTEN and nm23 in hilar cholangiocarcinoma. Methods: In 44 specimens of hilar cholangiocarcinoma, 15 specimens of tissues near the carcinoma（the distance to the edge of tumor ≥1 centimeter and no infiltration pathologically）, the expressions of Survivin, PTEN and nm23 were detected by immunohistochemistry methods. Laboratory data were then analyzed statistically together with the pathological data. Results: In 44 cases of hilar cholangiocarcinoma, the positive rate of Survivin was 63.6%, in tissues near the carcinoma the positive rate was 6.67%;The expression of Survivin in hilar cholangiocarcinoma had no association with pathological stage and lymph node metastasis（P＞0.05）; The expression of Survivin in hilar cholangiocarcinoma was closely statistically related with the expressions of PTEN and nm23. Conclusion: The expression of Survivin in hilar cholangiocarcinoma is significantly higher than that in tissues near carcinoma, suggesting its correlation with tumor; Survivin plays an important role in the oncogenesis and metastasis of hilar cholangiocarcinoma; Survivin is statistically related with PTEN and nm23 and detected together may helpful for diagnosis and prognosis of hilar cholangiocarcinoma.
【KEY WORDS】 Hilar cholangiocarcinoma·Survivin·PTEN·nm23·Gene expression
Survivin基因表达产物是凋亡抑制蛋白家族中的成员，一般认为不存在于成人正常组织中，而多种恶性肿瘤呈阳性表达。本研究应用免疫组织化学检测肝门胆管癌组织中Survivin基因的表达情况，探讨其与淋巴结转移以及与PTEN和nm23两种基因表达的相关性。
1 材料与方法
1.1 材料 标本取自我院2000年1月~2006年7 月行根治性切除、病理证实为肝门部胆管癌的存档蜡块44例。组织学高分化10例，中分化15例，低分化19例。淋巴结转移26例，无转移18例。取距离肿瘤边缘≥1 cm 经病理证实无肿瘤浸润的癌旁组织15例作对照。
1.2 试剂 Survivin、PTEN和nm23多克隆抗体，免疫组化ABC试剂盒，DAB显色试剂盒均购于福州市迈新生物技术开发公司。
1.3 方法 所有标本连续切片，厚度为5 μm，采用链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP） 免疫组化法测定，实验步骤按试剂盒说明书进行。
1.4 结果判断 Survivin、PTEN及nm23基因均主要表达于细胞质，阳性表达者呈棕黄色，以染色强度明显高于背景者为阳性，无染色或显色强度与背景无明显差别者为阴性。
1. 5 统计学处理 应用SPSS12.0统计分析软件，采用χ2检验及相关性检验，α=0.05为检验水准。
2 结果
2.1 Survivin基因的表达 肝门部胆管癌组织Survivin基因表达阳性率为63.6%（28/44）；癌旁组织中Survivin基因阳性表达率为6.67%（1/15），二者比较差异有统计学意义，χ2=14.526 6，P<0.05 （图1）。
2.2 不同分化程度的肝门部胆管癌组织中 Survivin 基因的表达情况 高分化组Survivin基因表达阳性率为50.0%（5/10），中分化组阳性率为60.0%（9/15），低分化组阳性率为73.7%（14/19），三组比较差异无统计学意义，χ2=4.767 4，P>0.05。
2.3 淋巴结转移与肝门部胆管癌Survivin基因表达 淋巴结转移的癌组织中Survivin基因阳性率为67.9%（19/26），无淋巴结转移组中Survivin基因表达阳性率为50%（9/18），两组比较差异不具有统计学意义，χ2=2.448，P>0.05。
2.4 PTEN基因与Survivin基因表达 44例肝门部胆管癌组织中PTEN基因阳性表达21例，阳性率为 47.7%（图2），在癌旁组织中阳性率为86.7% （13/15）。Survivin基因表达阳性的28例肝门部胆管癌组织中，PTEN阳性表达6例，两者呈负相关，χ2=21.346 1，r=-0.696 5，P<0.05。
2.5 nm23基因与Survivin基因表达 44例肝门部胆管癌组织中nm23基因阳性表达19例，阳性率为43.2%（见图2），在癌旁组织中阳性率为93.3%（14/15），Survivin基因表达阳性的肝门部胆管癌组织中，nm23阳性表达6例，两者呈负相关，χ2=14.850 8 r=-0.581 0，P<0.05。
3 讨论
Survivin基因表达产物是Altieri等［1］在1997年发现的一种新型凋亡抑制因子，属于凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis proteins, IAP） 家族成员。Survivin基因表达产物是IAP家族最小的成员，相对分子质量只有16.5×103。研究表明Survivin基因的表达具有高度特异性，成年人的正常组织不表达，而胚胎组织和多种肿瘤组织中表达广泛，且肿瘤组织中Survivin基因的表达与其恶性程度和患者的预后密切相关［１，２］。
本研究显示，Survivin基因在肝门部胆管癌组织中有较高的表达率，且与病理分化程度无关，这与其在胚胎组织中的广泛分布不相符，但在低分化癌中，其表达绝对值为73.7%，因此需要大样本的研究才能客观评价Survivin基因与肿瘤分化程度的相关性。有学者认为表达与淋巴结转移无关［３，4］，本研究也证实了这一结论，但是也有研究表明其表达与直肠癌预后密切相关［5］，因此需大样本研究验证并通过随访提供可靠证据。此外，本研究发现癌旁的正常肝脏组织中也有Survivin基因的表达，而随访发现该患者术后不足6个月就因出现肝脏转移再次入院，这与通常认为的Survivin基因仅在肿瘤组织中表达相矛盾。由于病理结果示其阳性表达细胞为正常细胞，推测该细胞虽然形态正常，但是已经发生了转化。
Survivin基因表达产物具有抗凋亡作用［6］，能促进细胞转化、增殖［7］及肿瘤血管形成［8］， 其作用机制尚不完全清楚。Shin等［9］研究证实，Survivin基因表达产物是caspase-3和caspase-7的直接抑制剂，推测通过抑制 caspase 途径发挥抗凋亡作用。PTEN基因是通常认为的抑癌基因，而nm23基因则被认为是抑制肿瘤转移的基因。本研究显示 PTEN 及nm23基因在肝门部胆管癌组织中的表达降低，且与Survivin基因表达有相关性，提示联合检测这些基因表达情况，可以帮助诊断及判断预后。
根据Survivin基因的特性，应用其反寡义核苷酸技术可以促进肿瘤细胞凋亡［１０，１１］，国内亦有学者进行了相关的研究［１２，１３］，可能为肿瘤提供一条新途径。
【】
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