食管癌MGMT、survivin蛋白的表达及其临床意义
【摘要】 目的 研究食管癌MGMT、survivin蛋白的表达及其临床意义。方法 应用免疫组化（EnVision二步法）检测56例食管鳞状细胞癌、20例腺样结构食管癌和9例小细胞癌组织中MGMT、survivin蛋白的表达，并分析其与临床病理诸因素之间的关系。结果 小细胞癌与鳞状细胞癌及腺样结构食管癌的MGMT蛋白表达比较均有显著性差异（P<0.01）；低分化鳞癌MGMT蛋白阳性表达率为45.45%，低于高、中分化鳞癌的阳性率（84.44%，P<0.05）。食管鳞状细胞癌survivin阳性表达率明显高于腺样结构食管癌（P<0.05）。结论 MGMT、survivin蛋白表达与食管癌的组织学类型有密切关系，可作为食管癌预后判断的指标。
【关键词】 食管癌；MGMT；survivin；免疫组化
Expression and Clinical Significance of MGMT and survivin in Esophageal Carcinoma
Abstract：Objective To investigate the expression and clinical significance of MGMT and survivin in esophageal carcinoma.Methods Expression and their relationship with clinicopathological parameters of MGMT gene and survivin proteins was detected by immunohistochemical techniques(EnVision) in 56 cases of esophageal squamous cell carcinoma,20 cases of carcinoma with adenoid structure and 9 cases of small cell carcinoma.Results Significant difference was observed in the expression of MGMT between small cell carcinoma and esophageal squamous cell carcinoma、esophageal carcinoma with adenoid structure（P<0.01）; The positive rate of Survivin expression in poor differentiated esophageal squamous cell carcinoma(45.45%) was lower than that in well and moderate differentiated esophageal squamous cell carcinoma(84.44%，P<0.05).The expression of survivin was significantly higher in esophageal squamous cell carcinoma than in esophageal carcinoma with adenoid structure (P<0.05).Conclusion The expression of MGMT and survivin was signicantly correlated with histological type of the esophageal carcinoma,which may be used as important indexes to evaluate the prognosis of esophageal carcinoma.
Key words：Esophageal neoplasms；MGMT；survivin；Immunohistochemistry
0 引言
6?氧?甲基鸟嘌呤?DNA甲基转移酶(Ｏ6?methylguanine DNA methytransferase,ＭＧＭＴ)是一种高效的DNA直接修复酶,对保护细胞免受烷化剂损害,防止细胞癌变和死亡具有极为重要的作用。survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成员,在凋亡抑制和细胞周期中发挥作用。目前,国内外中对MGMT、survivin基因在食管癌中的表达报道甚少，两者在腺样结构食管癌组织的表达尚未见报道。本文应用免疫组织化学EnVision二步法，检测食管癌组织中MGMT、survivin的表达,并初步探讨其表达的临床意义。
1材料与方法
1.1 材料
收集我院病理教研室收检的食管癌手术切除标本85例，其中鳞状细胞癌56例（其中高分化24例，中分化21例，低分化11例）、腺样结构食管癌20例（其中腺癌2例、黏液表皮样癌10例、腺鳞癌8例）和9例小细胞癌。85例食管癌中，癌组织浸润粘膜下层1例，浸润肌层22例，余均浸润到外膜层；40例伴有区域淋巴结转移。
1.2方法
1.2.1试剂 MGMT鼠抗人单克隆抗体（工作浓度为1∶50）、survivin兔抗人抗血清（工作浓度为1∶100）均来自美国抗体诊断公司。
1.2.2免疫组织化学染色采用EnVision二步法进行免疫组化染色。染色步骤按说明书进行，采用微波抗原修复，一抗4℃过夜，DAB显色，苏木素复染。用已知阳性切片作阳性对照，ＰＢＳ代替第一抗体作阴性对照。
1.3 结果判定
MGMT、survivin以细胞浆/细胞核出现棕黄色颗粒为阳性。按阳性细胞占肿瘤细胞的百分比分为：阳性细胞≤5%为（－），6%～25%为阳性(＋)，26%～75%为(＋＋)，>75%为(＋＋＋)。
1.4统计学处理
用SPSS13.0统计软件进行统计学处理，采用χ2检验，Fisher精确概率法检验和非参数检验。
2结果
2.1MGMT、survivin蛋白在食管癌组织的定位
85例食管癌经MGMT和survivin蛋白免疫组化染色后，阳性表达呈棕黄色，阳性细胞在癌组织内呈灶性/弥漫性分布,见图1、2。MGMT蛋白阳性颗粒位于细胞核和（或）细胞浆，但癌巢的中央以细胞浆为主，周围以细胞核为主。survivin蛋白表达定位与MGMT蛋白基本相同。
2.2MGMT、survivin蛋白在不同类型的食管癌组织中的表达。
小细胞癌MGMT蛋白表达与鳞状细胞癌及腺样结构食管癌的表达均有显著性差异（P<0.01）,而鳞状细胞癌与腺样结构癌之间没有显著性差异（P>0.05）。食管鳞癌survivin蛋白阳性表达率明显高于腺样结构癌组织（P<0.05），余两者之间均无差异，见表1。表1 MGMT、survivin蛋白在不同类型的食管癌组织中的表达（略）注：与小细胞癌相比，a χ2=0.00，P<0.01；bχ2=0.00，P<0.01；与腺样结构癌比较，c χ2=0.035，P<0.01
2.3食管癌MGMT、survivin蛋白的表达及其与临床病理特征之间的关系。
MGMT蛋白的表达与食管鳞癌的分化程度密切相关（χ2=5.510，P<0.05），而与性别、年龄、部位、浸润深度及淋巴结转移无关。survivin蛋白的表达与性别、年龄、部位、浸润深度、分化程度以及淋巴结转移均无关,见表2。表2 MGMT、survivin蛋白在食管癌的表达及其与临床病理特征之间的关系（略）注：与低分化鳞癌相比，a χ2=5.510，P<0.05了85例食管不同类型的癌组织,发现MGMT蛋白在食管鳞状细胞癌、腺样结构癌和小细胞癌中的阳性表达率依次为78.57%、90.00%、11.11%。
2.4MGMT与survivin蛋白在食管癌组织中表达的相关性。
为探讨食管癌组织中MGMT与survivin蛋白表达的相互关系，本实验采用Spearman相关分析。结果发现MGMT与survivin蛋白表达之间没有相关关系（r=0.059，P>0.05）,见表3。
3讨论
食管癌是我国常见的恶性肿瘤，亚硝胺等烷化剂与食管癌的发生有密切关系。烷化剂主要作用于ＤＮＡ上的鸟嘌呤,形成Ｏ6?mＧ，后者在ＤＮＡ复制过程中与Ｔ配对,导致ＤＮＡ中Ｇ∶Ｃ配对转换为Ａ∶Ｔ配对,从而导致肿瘤的形成。 ＭＧＭＴ是一个重要的ＤＮＡ修复酶,能把ＤＮＡ上Ｏ6?mＧ的甲基转移到自身的半胱氨酸残基上，从而修复甲基化的ＤＮＡ。MGMT在正常细胞均有表达,但约1/5的肿瘤细胞及1/3的人淋巴细胞却不表达。本文检测MGMT在小细胞癌的表达显著低于鳞状细胞癌和腺样结构癌（P<0.01），低分化鳞癌的表达率显著低于高、中分化鳞癌（P<0.05），提示MGMT蛋白在不同类型的食管癌中表达不同，MGMT蛋白表达的缺失与肿瘤的恶性程度有关。另外，有研究表明，年龄与性别也会影响ＭＧＭＴ基因的表达，如Rolhion等[1]对神经胶质细胞瘤的研究发现,ＭＧＭＴ基因表达与年龄呈负相关；但本研究显示MGMT蛋白表达与性别、年龄无关，这与吕嘉春等［2］结果一致。表3 MGMT与survivin蛋白在食管癌组织中表达的相关性（略）
survivin是1997年被分离鉴定的凋亡抑制蛋白家族的一个新成员,表达于胚胎发育组织和人类大多数肿瘤组织，但在正常成熟组织中不表达（胸腺、生殖腺除外）。survivin蛋白与食管癌的组织学类型、分化程度以及淋巴结转移的关系报道不尽一致。有研究认为survivin蛋白表达与肿瘤分化程度[3]、淋巴结转移相关，但也有相反报道[4]。目前survivin蛋白在食管癌的研究中，大多局限在食管鳞状细胞癌，而其他类型的食管癌报道甚少。本文通过对85例食管癌survivin蛋白的检测发现，其表达与食管癌的组织类型有密切关系。食管小细胞癌组织survivin蛋白表达高于鳞癌及腺样结构癌，提示与鳞癌和腺癌比较，食管小细胞癌是分化最差、恶性程度最高的肿瘤。
已有研究表明，ＭＧＭＴ基因过甲基化与p53基因突变明显相关[5]，而survivin蛋白表达与p53呈正相关[6]。为了解MGMT与survivin蛋白表达是否也存在某种关系，我们对两种蛋白表达进行了相关分析，结果发现MGMT与survivin蛋白表达之间没有相关关系。本文结果显示,食管癌MGMT蛋白表达的缺失与survivin蛋白的高表达是恶性度高的表现。检测食管癌MGMT和survivin蛋白的表达，可作为食管癌预后的指标。
【参考】
［1］Rolhion C,Penault?Llorca F,Kemeny JL,et al.O(6)?methylguanine?DNA methyltransferase gene (MGMT) expression in human glioblastomas in relation to patient characteristics and p53 accumulation[Ｊ].Int J Cancer，1999，84 (4)：416?420.
[2]吕嘉春,施侣元,吴中亮，等.ＤＮＡ修复基因Ｏ6?甲基鸟嘌呤?ＤＮＡ甲基转移酶在人群肺癌发生中的作用[Ｊ].中华流行病学杂志，2003，24(1)：40?44.
[3]Nemoto T,Kitagawa M,Hasegawa M,et al.Expression of IAP family proteins in esophageal cancer[Ｊ].Exp Mol Pathol，2004，76(3)：253?259.
[4]Ikeguchi M,Yamaguchi K,Kaibara N.survivin gene expression positively correlates with proliferative activity of cancer cells in esophageal cancer[J].Tumour Biol，2003，24(1)：40?45.
[5]Zhang YJ,Chen Y,Absan H,et al.Inactivation of the DNA repair gene O6?methyguanine?DNA?methyltransferase by promoter hypermethylation and its mutation in hepatocellular carcinoma[Ｊ].Int J Cancer，2003,103(4)：440?444.
[6]Lu CD,Altieri DC,Tanigawa N.Expression of a novel antiapoptosis gene,survivin,correlated with tumor cell apoptosis and p53 accumulation in gastric carcinomas[J].Cancer Research ，1998 ，58(9)：1808?1812.
