生姜对小鼠免疫功能影响的实验研究

             作者：熊平源 马丙娜 郭明雄

【关键词】  生姜

　　摘 要:  目的:了解生姜对小鼠免疫功能的影响。方法:①PFC法检测小鼠脾细胞抗体生成水平;②常规法检测小鼠腹腔巨噬  细胞吞噬活性;③    3   H-TdR摄入法检测小鼠腹腔巨噬细胞细胞毒活性;④乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测小鼠脾脏NK细胞杀伤活性。  结果:与空白对照组比较，在有效剂量范围内，生姜能促进脾细胞抗体的生成，能增加小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性及细胞毒活性，能增  强NK细胞杀伤活性。结论:生姜具有调节机体免疫功能的作用。 

　　关键词:  生姜; 腹腔巨噬细胞; 免疫功能

　　姜科植物生姜为临床常用中药，民间用生姜风寒感  冒和风湿痛等具有良好的解热、镇痛、抗炎等作用。生姜对机  体免疫机能等因素是否有影响值得探讨。本研究仅就生姜对  小鼠脾细胞抗体生成水平、腹腔巨噬细胞吞噬活性、腹腔巨噬  细胞细胞毒活性、脾脏NK细胞杀伤活性等功能的影响进行了  研究。 

　　1  材料

　　1.1  动物  Balb/c品系小鼠，体重18～22g，雌雄各半，由北京大学医  学部实验动物中心提供。

　　1.2  生姜  市售当年鲜姜。生姜煎煮液的制备:将生姜洗净凉干后  切成薄片，称重，每100g加蒸馏水500ml，置100ml的烧瓶中，  放4℃冰箱中浸泡1h，加热煮沸，弱火维持40min，双层纱布过  滤，滤液浓缩至原体积的1/10，即为 100/100生姜原液（1g/  ml）。浓缩液放4℃冰箱备用（普通冰箱保存4天，室温保存2  天）。

　　1.3  主要试剂  Lps为sigma公司产品，重组人TNF为军事医学院生  物制剂中心产品，L 929 细胞株由北京大学医学部免疫学系  提供。 

　　1.4  主要仪器  CO  2 培养箱为美国Nap CO.产品，倒置生物显微镜为重庆  光学仪器厂产品，DYQ-III型多头细胞收集器为绍兴医疗器械  厂产品，DG3022型酶联免疫测定仪为华东管厂产品，LS-  5801型液体闪烁计数器为美国Backman公司产品。  

　　2  方法与结果

　　将小鼠随机分成4组，每组10只。空白对照组:每只每  日用1ml生理盐水，连续灌胃10d;生姜I组:0.25g/日/公斤体  重连续灌胃10d;生姜II组:0.5g/日/公斤体重连续灌胃10d;  生姜III组:1g/日/公斤体重连续灌胃10d。 

　　2.1  生姜对小鼠脾细胞抗体形成的影响 1］   采取PFC检测法 ［1］，于喂药第6天一次性腹腔注射2.5%  SRBC0.4ml免疫小鼠。免疫后第5天常规取脾，制成2×10    7   /  ml单细胞悬液，于96孔平底板上，每个样品设6个复孔，每个  试验孔中加入2×10    7   /ml脾细胞悬液100μl、0.25%SR-  BC50μl、1∶8补体50μl。37℃孵育1h，1000r/min离心10min，  取上清置酶标仪上测各孔OD    413    值。结果见表1。

　　2.2  生姜对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响  于喂药后的第8天，取6%淀粉肉汤1ml腹腔注射小鼠，  24h后重复一次。实验前腹腔注射3～4ml Hank's液4～5ml，  1500r/min×10min，弃上清，加入10%小牛血清RPMI1640调  细胞浓度至2～3×10    6   /ml，加入1×10    7   /ml白色念珠菌悬液  1ml，混匀后37℃孵育1h。1000r/min离心5min，弃上清，留少  许上清将沉淀吸匀，取一滴置于载玻片上，加0.05%美蓝一  滴，加盖玻片，5 min后镜检计数100个巨噬细胞，分别其  吞噬百分率和吞噬指数    ［2］    。结果见表2。    表1 生姜对小鼠脾细胞抗体形成的影响 *   注:* 与空白对照组比较。表2 生姜对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响  注:* 与空白对照组比较， P <0.01。

　　2.3  生姜对小鼠腹腔巨噬细胞细胞毒活性的影响  用     3    H-TdR标记的 L929细胞（靶细胞），将制备好的小鼠  腹腔巨噬细胞悬液加入96孔培养板中，100μl/孔（浓度为1×  10    6   /ml），培养4h，洗出悬浮细胞，加入10μl LPSj继续培养8h，  取上清作为TNF待测样品。加入    3   H-TdR标记的 L929细胞  100μl（效靶比为5∶1），同时设靶细胞对照孔 注:* 与空白对照组比较。

　　2.4  生姜对小鼠NK细胞杀伤活性的影响    ［4，5］   采取乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测小鼠脾脏NK细胞杀  伤活性，并按下列公式NK细胞杀伤活性:   NK细胞杀伤活性（%）=   实验孔OD 490    值 - 释放孔OD    490    值  最大释放孔OD    490    值 - 自然释放孔OD    490    值 ×100%结果见表4。 表4 生姜对小鼠NK细胞杀伤活性的影响  注:* 与空白对照组比较。

　　3  讨论 

　　单核巨噬细胞是重要的固有免疫的效应细胞，其通过氧  依赖性杀菌系统和氧非依赖性杀菌系统识别、杀伤、清除病原  体等抗原性异物;活化的单核巨噬细胞通过分泌MIP-1α/β、  MCP-1和IL-8等细胞因子参与和促进炎症反应，分泌的TNF-  α能诱导肿瘤及病毒感染等靶细胞凋亡。此外，单核巨噬细  胞还是专职抗原处理及提呈细胞，能启动特异性细胞免疫和  特异性体液免疫。NK细胞乃自然杀伤细胞，能通过穿孔素/  颗粒酶作用途径、Fas与fasL作用途径、TNF-a与TNF-R-I作  用途径等诱导靶细胞凋亡。姜科植物生姜为临床常用中药，  民间常用生姜风寒感冒和风湿痛等，具有良好的解热、镇  痛、抗炎等作用。本文研究发现，与空白对照组比较，在有效  剂量范围内，生姜能促进脾细胞抗体的生成、增加小鼠腹腔巨  噬细胞吞噬活性及细胞毒活性、增强NK细胞杀伤活性等。关  于生姜对小鼠免疫功能的调节机制有待进一步研究。

　　参 考 文 献

　　1 龙振洲，谢蜀生，等.五仁醇对小鼠抗体分泌细胞及特异玫瑰花形  成细胞的抑制作用.中华医学杂志，1984，64（6）:369.

　　2 熊平源，边藏丽，主编.医学免疫学与微生物学实验教程.桂林:广  西师范大学出版社，1997，5～8.

　　3 祝红焰，谭允育.八珍汤对    60    Co照射小鼠髓细胞相关细胞因子影响  的实验研究.免疫学杂志，2000，16（2）:81.

　　4 吕昌龙，赫 生生，刘北星，等. 乌贼墨及其提取物的免疫刺激作用.   中国海洋药物，1999，18（2）:22. 

　　5 温斌，吕昌龙，曹雅明，等. 灰树花提取成分对小鼠免疫功能影响的  实验研究.中国免疫学杂志，2002，18（8）:550.