乙酰基转移酶2基因多态性与大肠癌遗传易感性的相关性研究
【摘要】 目的:探讨N?乙酰基转移酶2(NAT2)基因多态性和大肠癌遗传易感性的关系。方法:采用PCR?RFLP方法调查NAT2基因多态性在大肠癌组和对照组的分布，对患者临床资料进行统计分析。结果:基因型WT/M2在大肠癌组明显高于对照组（χ2=10.22，P<0.01）。快速型和慢速型在大肠癌组和对照组的分布差异无显著性（χ2=0.13，P>0.05）。吸烟者在大肠癌组的出现频率显著高于对照组，χ2=5.42，P<0.05。高吸烟指数者中，WT/M2基因型在大肠癌组的分布频率显著高于对照组，χ2=5.45，P<0.05。患者中WT/M2基因型频率在≥60岁组高于<60岁组，差异有显著性（χ2=4.69，P<0.05），在病理类型、性别、淋巴结有无转移、肿瘤浸润广度等方面差异无显著性。结论：NAT2 WT/M2基因型可能是大肠癌发生的高危因素，该基因型的个体吸烟剂量大、高龄可能增加大肠癌发病风险。
【关键词】 大肠癌；N?乙酰基转移酶2；基因多态性；限制性片段长度多态性
N?乙酰基转移酶2（NAT2）直接影响杂环胺类物质在人体内的代谢，推测和大肠癌有关。我们采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCR?RFLP）方法进行病例对照研究，探讨NAT2基因多态性和大肠癌遗传易感性的关系。
1 材料与方法
1.1 材料 随机选取2005年11月至2006年11月河北医科大学第四病理确诊的大肠癌患者83例，年龄29岁~74岁；男46例，女37例。对照组83例排除肿瘤、遗传性疾病、结缔组织病等疾病，与大肠癌患者同民族、同性别，职业、年龄、居住史具有可比性，年龄26岁~73岁；男46例，女37例，实验对象均为血缘无关个体，抽取静脉血3 ml，EDTA抗凝送检。
1.2 方法
1.2.1 采用PCR?RFLP方法调查NAT2基因多态性 按照PEL?FREEZ试剂盒操作说明提取DNA。PCR?RFLP方法进行NAT2基因分析：上游引物：5，GGA ACA AAT TGG ACT TGG，下游引物：5，TCT AGC ATG AAT CAC TCT GC。PCR反应体系为40 μl（包括基因组DNA 50 ng~200 ng，引物20 mM，dNTP 1.25 mM，MgCl2 225 mM，1×PCR缓冲液，Taq酶5 U）。循环参数设定：95℃预变性5 min；95℃ 1 min，57℃ 1 min，72℃ 1.5 min循环35次，72℃延伸5 min。扩增之后，分别取15 μl PCR产物以KpnI酶（M1 allele）、TaqI酶（M2 allele）、BamHI酶（M3 allele）、MspI/AluI酶（M4 allele）进行限制性酶切，酶切产物在琼脂糖凝胶中电泳1 h~3 h，用凝胶成像分析系统拍照分析。
1.2.2 调查大肠癌组临床资料 如吸烟、年龄、性别、淋巴结转移、肿瘤浸润广度、病理分级等。
1.3 统计学处理 应用SPSS 10.0软件，以χ2检验等进行统计学分析，检验水准α=0.05，以比值比（OR）表示相对危险度。
2 结果
2.1 NAT2基因多态性与大肠癌的相关性
2.1.1 NAT2各种基因型在大肠癌组和对照组的分布 各种基因型分布如表1所示，WT/M2在大肠癌组明显高于健康人群，差异具有显著性。
表1 大肠癌组与对照组NAT2基因型分布比较（略）
2.1.2 快、慢速基因型在大肠癌组和对照组的分布 如表2所示，快速基因型在两组的分布差异无显著性。
表2 大肠癌组与对照组NAT2快速基因型分布比较（略）
注：χ2=0.13，P>0.05。
2.1.3 NAT2各种基因型与大肠癌易感性的相关性 以基因型WT/WT的危险度OR为1，则基因型WT/M2 OR为3.21，95%的可信区间为（1.33～7.76），而其余各种基因型的95%可信区间均包括1，见表3。
表3 NAT2各基因型与大肠癌的相关性（略）
注：χ2=1,2,3,4
2.2 大肠癌患者临床资料分析
2.2.1 NAT2基因型和吸烟、大肠癌易感性的关系 吸烟者在大肠癌组的出现频率为59.04%（49/83），显著高于健康组40.96%（34/83），χ2=5.42，P<0.05。吸烟状况通过吸烟指数(SI)评价。SI=每天吸烟支数×吸烟年数。SI≤400为低吸烟指数组，SI>400为高吸烟指数组。高吸烟指数者中，WT/M2基因型在大肠癌组的分布频率显著高于对照组。低吸烟指数者中，WT/M2基因型在两组的分布无明显差异，见表4。
表4 WT/M2基因型在大肠癌组和对照组不同吸烟指数人群的分布（略）
2.2.2 大肠癌患者中WT/M2基因型与临床病理特征的关系 见表5。
表5 大肠癌患者中WT/M2基因型与临床病理特征的关系（略）
3 讨论
NAT2等位基因的分布具有种族和地域的差异，现已发现26种等位基因［1］。WT为未突变者，突变等位基因常见的有4种：M1、M2、M3、M4。第481位点突变，KpnI酶的识别位点消失产生M1；第 590位点突变，TaqI酶识别位点消失产生M2；第857位点突变，BamHI酶识别位点消失产生M3。第191位点突变， MspI酶识别位点消失产生M4。突变可能导致NAT2酶表达降低、稳定性下降及催化活性减低［2］。等位基因的多态性决定了基因型的多态性：WT/WT、WT/Mx（χ2=1，2，3，4）、Mx1/Mx2（χ21=1，2，3，4；χ22=1，2，3，4）。基因型为WT/WT、WT/Mx（χ2=1，2，3，4）的个体表现为快速乙酰化表型，基因型为Mx1/Mx2（χ21，χ 2 2=1，2，3，4）的个体表现为慢速乙酰化表型。目前国内外对NAT2基因多态性和大肠癌遗传易感性的关系尚不清楚。通常认为NAT2的快速乙酰化表型是患大肠癌的高危因素［3］。郑树［4］认为基因型WT/WT是大肠癌的保护因素。Juergen认为NAT2基因型和大肠癌无关［5］。本研究中基因型WT/M2在大肠癌患者组明显高于对照组。推测该基因型可能为本地大肠癌发病的危险因素。烟草、烤肉中含有较多的杂环胺类物质。Lilla［6］等发现NAT2快速型个体，过多进食高温烹调的红肉或暴露于烟草环境时大肠癌风险性会提高。本研究中吸烟者在大肠癌组的出现频率显著高于对照组。高吸烟指数者中，WT/M2基因型在大肠癌组的分布频率显著高于对照组，说明WT/M2基因型的个体吸烟剂量高可能增加大肠癌的发病风险。我们的资料显示大肠癌组WT/M2基因型频率在大于60岁组明显高于小于60岁组。推测和以下因素有关：随着年龄的增长，人体的免疫功能下降，NAT2其他基因型的患者可能突变为WT/M2；年龄增长使患者接触杂环胺类物质的机会和时间增加，增加了遗传易感个体癌变的概率。
【】
［1］ Hein DW, Doll MA, Fretland AJ, et al. Molecular genetics and epidemiology of the NAT1 and NAT2 acetylation polymorphisms［J］. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2000,9(1):29?42.
［2］ Furet Y, Bechtel Y, Le Guellec, et al. Clinical relevance of N?acetyltransferase type 2 (NAT2) genetic polymorphisms［J］. Therapie,2002,57(5):427?431.
［3］ Gago?Dominguez M,Bell DA,Watson MA, et al. Permanent hair dyes and bladder cancer: risk modification by cytochrome P4501A2 and N?acetyltransferases 1 and 2［J］. Carcinogenesis,2003,24(3):483?489.
［4］ 郑树，刘希永，曹江,等.代谢酶NAT2多态性与大肠息肉及腺瘤的复发［J］.中华医学杂志，2001,81(15):907?909.
［5］ Juergen Borlak，Stella Marie Reamon?Buettner, N?acetyltransferase 2 (NAT2) gene polymorphisms in colon and lung cancer patients［J］. BMC Med Genet，2006，7:58.
［6］ Lilla C,Verla?Tebit E,RischＡ，et al. Effect of NAT1 and NAT2 genetic polymorphisms on colorectal cancer risk associated with exposure to tobacco smoke and meat consumption［J］. Ｃancer Epidemiol Biomarkers Prev,2006,15(1)：99?107.
