松节油透明在冰冻切片中的应用
【关键词】 松节油；透明；冰冻切片；应用
Application of Turpentine in Hyalinizing Frozen Section
Key words:Turpentine; Vitrification; Frozen section; Application
在冰冻切片中，目前透明还是选用二甲苯试剂，而且日常外检工作也大量使用。不可否认组织透明应用二甲苯确有它的优势，比如透明力强、作用较快,但也不能忽略了它的不足之处，组织透明容易收缩、变硬、变脆，它易挥发、有毒性，长期吸入及皮肤接触危害健康，污染环境。我们选用医用松节油替代二甲苯在冰冻切片中做透明剂，经过多年工作实践证明，松节油完全能替代二甲苯透明在冰冻切片中做透明剂，而且效果良好。
1 材料及方法步骤
1.1 材料 松节油（天津市博迪化工有限公司生产的试剂型）为无色或者淡黄液体,折光率1.458 0～1.470 0，有松香气味能与乙醚乙醇等有机溶剂互溶。能溶解石蜡及中性树脂胶，不溶于水。
1.2 方法步骤：
1.2.1 将新鲜组织块直接放入恒冷式切片机-23 ℃冷冻10 min。
1.2.2 切片后贴付在载玻片上，置入95%乙醇内固定1 min。
1.2.3 自来水冲洗片刻，置入苏木素染液内3 min。
1.2.4 自来水冲洗片刻，1%盐酸乙醇分化1 s～3 s。
1.2.5 自来水冲洗片刻，1/500氨水返蓝10 s，自来水冲洗片刻。
1.2.6 切片置入1%伊红水溶液内复染5 s，自来水冲洗片刻。
1.2.7 梯度乙醇各浸洗3 s。
1.2.8 松节油Ⅰ、Ⅱ透明各10 s。
1.2.9 中性树脂胶封固，阅片。
2 结果与讨论
折光率是生物制片的一项十分重要的技术指标。医用松节油（试剂型）是以天然优质脂松节油进行了先进工艺再加工产品，外关无色透明无毒性。松节油的折光率（1.458 0～1.470 0）比氯仿（1.433 0）和樟油（1.385 0）的折光率大，比二甲苯的折光率（1.495 0）小，而与纯甘油和松脂精的折光率（1.470 0）相仿,所以在HE染色镜下观察，组织红蓝分明，组织细胞结构清晰。另外松节油替代二甲苯透明做透明剂,作用柔和,制片材料不易硬化,制片容易获得成功。如人体活检、尸检，包括心、肝、肺、肾、脾、胃、肠、胆、脑、脊髓、扁桃体、眼结膜、皮肤、口唇、气管、乳腺、肾上腺、前列腺、骨、膀胱、子宫颈、卵巢、睾丸、脂肪、肌肉等组织，用松节油透明3 h已达到目的，但延长至24 h和96 h对切片也没有影响，都容易获得完成的切片，不易脆碎，透明后边缘即使卷曲也易展平。传统的透明剂二甲苯是一种芳香族化合物，无色透明的液体，折光率1.495 0，沸点144 ℃，气味难闻，毒性极强，易挥发。其中的苯以蒸汽形式经呼吸道进入体内很快进入血液，约50%的苯以由肺呼出，部分在体内氧化后由肾排出，少量的苯残留在体内主要在骨髓脂肪及肌组织中。虽然可以慢慢的氧化排出体外，但是长期反复吸入高浓度的笨并在体内累积增加，就会苯中毒，主要表现为：对中枢神经系统有麻痹作用，轻度者头晕头痛恶心；严重的手脚麻木打颤痉挛神志不清；对呼吸中枢有麻痹作用，主要表现为疲乏、心迹、头痛、恶心呕吐、呼吸困难、口唇紫绀；对造血系统有破坏作用，有些人长期接触苯后白细胞降低，若停止接触又可恢复。因为苯在体内代谢产物的酚，会抑制破坏粒细胞与红细胞的分裂，使红白细胞的再生受到阻碍；对皮肤也有一定损伤，主要是二甲苯的甲基因有溶脂性，长期反复的接触，会引起皮肤脂肪干燥干裂，甚至出现红疹水疱性的皮炎与湿疹。此外二甲苯经微核实验，呈阳性反应对人体有致癌作用。苯毒可使人肝硬化，肺气肿并易使孕妇胎儿畸形等。为了防止苯类毒害人体和污染环境，国外已应用无毒的Histoclcar和Solrent CRP 30代替有毒的苯类，但配方保密。目前我们无法得到，长期以来人们曾多方面寻找，希望有一种对人体无毒副作用的透明试剂代替二甲苯。因此我们应用松节油在冰冻切片中做透明剂，实践证明与二甲苯透明度相同。在HE染色镜下观察，组织红蓝分明，组织细胞结构清晰。二者间无任何质量差别。固封后阅片为松香气味不会象二甲苯那样引起阅片者头晕头痛、恶心等现象。切片经长期保存观察，无腿色现象。因此松节油不但适应冰冻切片，也能很好地用于外检常规制片工作中，而且也适用于特殊染色、免疫组化，并完全能够达到良好的透明效果和作用。重要的是松节油为植物油对于人体无毒害，不污染环境。笔者认为是目前替代二甲苯作透明剂较理想的试剂，它最大的优点为组织不收缩变形，不会硬化脆化，起到了快速优质的效果，值得一试。
【】
［1］ 吴振球.职业中毒［M］.增订版.北京：人民卫生出版社.
［2］ 徐斯行，余心如，倪型颢.病理诊断与技术［M］.杭州：浙江大学出版社，2003：20?1.
［3］ 上海市劳动卫生职业病防止院.苯中毒的防止［M］.北京:人民卫生出版社.
［4］ 麦兆煌.病理组织标本制作技术［M］.北京:人民卫生出版社.
［5］ 上海第一医学院病理教研组.病理检验技术［M］.上海:上海技术出版社.
