建立标准化聚合酶链反应实验室的重要性和必要性
【关键词】 标准化实验室；聚合酶链反应；重要性
聚合酶链反应（PCR）技术问世20年来，已经成为致病基因分析的重要手段，但是多年来PCR一直很难直接用于临床疾病的常规诊断，其原因主要是PCR常规实验中存在的污染问题难以解决。长期进行PCR的许多实验室都有污染造成试验失败的经验和教训［1］。今天，荧光实时定量PCR（Q?PCR）在全封闭的试管中进行，避免了PCR的污染，而且可以精确地基因定量，使患者在不同病期、不同实验室进行检测的结果有了可比性［1］。利用这一技术，为我县大量的乙肝和结核病患者实现就地诊断和是社会效益和效益的重要机遇。净化现有的医疗市场，与一些不法分子利用患者对医学知识的无知、欺骗患者钱财的行为作斗争是医院的重要使命和社会责任，同时标准化PCR实验室的建设是完成上述任务和使命的重要条件。
1 有丰富的乙肝、结核卫生资源急需标准化PCR实验室的建设和运行
所谓标准化PCR实验室是指按［卫医发（2002）10号］卫生部颁发的《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》和［卫检字（2002）8号］卫生部临床检验中心发出的配套文件《临床基因扩增检验实验室工作规范》［2］之规定，严格按标准执行建设的实验室，但由于标准化PCR实验室的建设需要大量资金的投入，并有一定的技术难度和复杂的验收过程，导致我院在标准化PCR实验室的建设一直没能实施。资金投入后的回收是不成问题的，因为丰富的卫生资源：
1.1 我县拥有可利用的乙肝病毒定量PCR检查的卫生资源丰富 我县20世纪80年代中期以前出生的人口中乙肝病毒携带率约10%，而近5年来学生和征兵体检中统计乙肝病毒携带率约为6%。我县是一个拥有128万人的人口大县，乙肝感染人数至少7.68万人。
1.2 我县的经济水平现状决定了大多数患者只能选择在本地诊断和治疗 我县是一个全国贫困县，以前大量的乙肝患者因我县辖区内无一家国家认可的标准化PCR实验室，使得一部分患者到县外就医，其中各项开支大大高于在我县内诊治；而另一部分患者，由于经济承受能力较差，干脆放弃治疗，因为没有乙肝病毒定量PCR分析来指导治疗，患者往往花去了太多的冤枉钱（平均每一位患者盲目服用100元钱的药品，全县将消耗约768万元）。如果每年大约10%的乙肝患者来我院检查治疗，我院就可完成约7 680人份的乙肝病毒定量PCR检查，按我院现行定价为每人次75元，1年能完成50余万的业务收入，医院一方面可提升形象，另一方面可得到经济效益和社会效益的双重丰收，同时患者和医院将达成共赢。但这仅仅是拥有丰富的卫生资源，如何去开发和利用，还需要检验与临床的共同努力。
1.3 我院现在拥有的卫生资源丰富 2006年我院门诊人数18万人次，其中至少有约5%（9 000人）的患者患有乙肝，至少有40%（3 600人）的乙肝患者需要也有经济条件接受乙肝病毒定量PCR分析。大约有10%的乙肝患者（900人）需要正规的针对乙肝病毒的治疗，且每一位接受标准化治疗的患者最少要接受4次～6次的乙肝病毒含量监测，这是我院感染科最有潜力的发展项目，而住院患者9 000例次中，患有乙肝的孕产妇也是我院可利用的乙肝病毒DNA定量检测的卫生资源，其中包括孕妇孕前、孕期、产后血液和乳汁以及新生儿脐血乙肝病毒定量和传染性分析。
1.4 我县的结核病患病率高，耐药结核普遍 临床诊断结核多靠临床表现、X线检查、皮肤试验、标本镜检和培养。但镜检阳性率低且无法鉴定结核与其他分枝杆菌；培养特异性较好，可进行菌型鉴定和药敏，但TB生长缓慢，培养需3周～8周，阳性率低且常因污染而失败；OT/PPD试验，仅能说明机体是否感染过结核，并不能区分是现症感染或既往感染，更不能表明是否还存在结核杆菌；常规的X线检查和临床表现同样存在较大的局限性，而荧光定量PCR灵敏度高，在发病早期或菌量较少时即可发现TB，适于早期诊断；荧光PCR特异性强，可利用特异的引物设计和探针设计与其他分枝杆菌鉴别；用于鉴别肺结核与肺癌基因变异株的研究等方面的应用。
2 我院的诊疗工作和临床科研需要高质量的PCR分析
2.1 内科对乙肝患者药物的疗效观察 乙肝病毒是DNA病毒，长期侵害人的肝细胞，现阶段所有治疗乙肝的化疗药物，均对人体有不可忽视的副作用，并且长时间使用，将会引起乙肝病毒发生变异。在没有使用PCR定量分析仪前，所有针对乙肝的治疗方案和疗效观察均带有盲目性，往往造成部分患者因盲目治疗而人财两空，这并不是每一位医务工作者所愿意接受的结果。有些乙肝患者经过一段时间的化疗后，其病毒含量没有明显改变者，可通过乙肝病毒DNA定量分析结果来决定停药或换药的时间，患者可免遭更大的身体损害和损失。PCR检测还可作为乙肝患者严格的愈后判断指标。
2.2 妇产科乙肝患者需要PCR的定量分析 国家实行独生子女政策，加上国家一些政策和用人单位对乙肝患者的歧视，下一代考学与就业将面临更激烈的竞争，每一位母亲都希望自己有一个健康的子女；要让每一位乙肝父母实现自己的愿望，我们医务工作者将需要乙肝病毒定量PCR分析来决定孕前治疗、计划怀孕时间、生产方式、是否注射乙肝免疫球蛋白阻断、新生儿乙肝疫苗注射剂量、选择人工喂养或母乳喂养等。
2.3 饮食从业人员、学生、征兵体检等的需要 虽然暂无有关乙肝病毒消化道传染的依据，但饮食从业人员和集体生活群体（军队和部分专业的学生等）仍将乙肝病毒检查作为一项常规性检查，但常规的ELISA方法无法检测低度乙肝病毒感染，每年的体检中有约5%的标本谷丙转氨酶升高，要排除乙肝病毒的感染仅靠常规的乙肝病毒的ELISA法检查是不够的，而荧光PCR定量灵敏性高，可检出血清学方法不能发现的病例。
2.4 体液和分泌物中乙肝病毒含量监测，对HBV传染性的估计 HBV?DNA是否有病毒的直接证据。唾液、尿液、精液中乙肝病毒含量的检测，对一些有乙肝病毒感染的家庭，其成员是否需要隔离或保护，乙肝病毒PCR定量是一项必不可少的常规性检查。乳汁中乙肝病毒的检测，对推行和提倡母乳喂养提供可靠的实验依据。
2.5 临床科研和的需要 我院作为全县首家综合性二级乙等，肩负着保护全县人民身体健康的重要使命；同时作为县内的行业龙头，需要不断提高全院诊疗技术水平，不断规范各种医疗行为。现在提倡的循证医学，是需要大量有说服力的实验室数据来支持的，传统的免疫学方法已经不能满足这一要求；大量的病毒类（丙肝病毒、艾滋病毒、乙脑病毒、轮状病毒、流感病毒、麻疹病毒、腺病毒、EB病毒、风疹病毒等）、衣原体、支原体和结核感染的确诊是需要PCR技术来支持的；在临床诊治过程中对多种疾病的疗效观察和经验，以及开展科研课题的需要。
3 规范医疗行为，抵制不正之风的需要
近年来，我县一些小医院为了单纯的经济利益，与一些外地非法医疗组织和药品生产、经营者联合起来，以免费进行HBV?DNA定量分析等虚假广告骗取大量乙肝患者的钱财。原因是我县以前没有一家医院的实验室开展了乙肝病毒DNA定量检测，许多患者在受骗后很长一段时间后来我院复查，才得知以前在一些非法机构接受治疗期间的乙肝病毒DNA定量检查是人为编造的报告，或者是由一些没经国家相关部门验收认证的简陋实验室检测的。
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［1］ 朱平.实时荧光定量聚合酶链反应技术开始用于临床常规基因诊断［J］.中华检验医学杂志，2005，28（8）：778.
［2］ 叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程［M］.南京：东南大学出版社，2006：927.
