自动酶免疫分析系统中微板置放顺序对结果影响的观察
【关键词】 酶联免疫吸附试验
［摘要］ 目的：评估RSP 100BEP Ⅲ自动酶免疫分析系统中微板置放顺序对检测结果的影响。方法：评价基本性能，该系统的不精密度；与经典方法比较分析不准确度。将乙肝6项标志物微板置于不同序号检测，以观察该系统中微板置放顺序对结果的影响。结果：RSP 100BEP Ⅲ自动酶免疫分析系统性能良好；对于微板置放顺序，双抗体夹心法和中和法无明显差异，而对竞争抑制法检测结果有显著影响。结论：RSP 100BEP Ⅲ自动酶免疫分析系统可提高酶免疫分析方法的精密度，减轻劳动强度。但应注意竞争抑制法ELISA存在时效性，必须用RSP 100加样后立即以BEP Ⅲ进行后续处理。
［关键词］ 酶联免疫吸附试验；自动化；仪器；微板；顺序
自动酶免疫分析系统在血站系统应用较为普及，针对血源筛选试验的夹心法ELISA检测报道较多［1,2］。我们于2002年引进RSP 100BEP Ⅲ自动酶免疫分析系统，应用于临床免疫学实验室常规ELISA(包括夹心法、竞争法、中和法)工作，1年多来使用表明，临床实验室所面对的检测项目和分析模式具有多样性，有必要进行深入探讨。
1 材料与方法
1.1 样本 观察样本采用无溶血、无黄疸、无脂血的血清。乙肝质控物由卫生部临床检验中心提供。
1.2 仪器 自动酶免疫分析系统 RSP100样本分配器(简称RSP100)，瑞士Tecan公司产品。BEPⅢ酶免疫分析仪(简称BEP Ⅲ)，德国DADEBEHRING公司产品。经典方法所用仪器1575 洗板机和550酶标仪，美国BIO－RAD公司产品。
1.3 试剂 试剂A由月亮湾(深圳)生物科技有限公司提供；试剂B由英科新创(厦门)科技有限公司提供。
1.4 方法
1.4.1 自动酶免疫分析系统(仪器法)的检测参数和流程严格按照试剂盒说明书编制。检测过程中，先以RSP100分配样本，再置入BEP Ⅲ自动完成全部后续分析及报告结果。经典法的质控物设定、各操作步骤和结果判定均严格按照试剂盒说明书用人工执行。
1.4.2 基本性能评价
1.4.2.1 不精密度分析 在同一微板上将一份混合阳性血清分别以仪器法和经典法重复检测20孔HBsAg，批内CV；并将该混合血清分装20份用仪器法连续检测20 d，获得吸光度以计算批间CV。
1.4.2.2 与经典方法比较分析不准确度 在同一天分别采用仪器法和经典法检测67份血清HBsAg、HBcAb和HBeAb，比较两者阳性百分率(%)。
1.4.3 微板置放顺序观察 以检测乙肝6项标志物为例，将各项目微板编出不同序号，在RSP100分配血清后，组合不同顺序置入BEP Ⅲ中，其中1号位微板项目在7号位重复检测，观察1号位与7号位由于等待处理时间对HBsAg、HBcAb和HBeAb吸光度和阳性率的影响。
1.4.4 统计学分析 统计学处理由SPSS软件完成。
2 结果
2.1 系统不精密度检测结果 见表1。两法S/CO均值无明显差异，但仪器法批内CV明显低于经典法，批间CV满足实验要求，说明自动酶免疫分析系统具有较好的精密度。
表1 仪器法与经典法检测HBsAg的不精密度比较(略)
注：※配对资料t检验 t=1.454
2.2 仪器法和经典法不准确度的比较 67份样本中，两者的阳性检出率相同，HBsAg为43例(64.2%)、HBcAb为37例(55.2%)、HBeAb为18例(26.9%)；且阳性结果对应的血清样本均一致。结果表明自动酶免疫分析系统单独检测各种类型ELISA项目的准确性高。
2.3 微板置放顺序对检测结果的影响 对于试剂A的HBsAg和HBeAb，其微板置于1号位～7号位，吸光度和阳性率没有区别。即在本仪器系统中，已加样本的微板在BEP Ⅲ内常规滞留时间不影响试验结果。而HBcAb微板置放顺序对试验吸光度和阳性率有明显差异，以1号位实验结果与经典法一致,试剂B也具有相同结果。试剂A检测结果见表2。
表2 在BEPⅢ1号位和7号位微板的试验结果比较(略)
配对资料t检验＃t=0.132
配对资料χ2检验※※χ2=0.08<χ20.05(1) 3.84，P>0.05※※※χ2=4.63>χ2 0.05(1) 3.84 P<0.05
3 讨论
关于免疫学检验自动化仪器，检验科现多引进化学发光仪和电化学发光仪，但因配套试剂价格昂贵，故在常规工作中选择自动酶免疫分析系统势在必行、符合国情。RSP100在样本处理过程中，可以采用多种国产试剂，加样、稀释和标本的处理均达到了自动化、标准化。BEPⅢ根据经典的酶免疫技术原理，其设计合理，通过电脑程序控制和调节加液量，保温时间，洗涤次数等条件变化，处理所检测的常规数据。RSP100与BEPⅢ配合使用，形成自动酶免疫分析系统，不仅节省人力和时间，也大大提高精密度，使酶免疫分析技术方便快速，是大、中型医院临床实验室较为理想的免疫学检验仪器之一。
临床实验室常用酶联免疫吸附实验(ELISA)原理大体上分为夹心法：包被于固相载体上的抗体或抗原与样本中的抗原或抗体结合再与酶标记的抗体或抗原反应，如检测HBsAg，HBsAb；竞争抑制法：样本中的抗体和酶标记的抗体竞争性的与包被抗原结合，如检测HBcAb；中和法：属于竞争抑制法，(但其中和抗原是与样本平行加入，为便于区别，称之为中和法)待测抗体与包被抗体竞争性的与中和抗原反应再与酶标记的抗体结合，如检测HBeAb；检测IgM类抗体的捕获法等。RSP100－BEP Ⅲ自动化酶免疫分析系统性能良好，在血站多年应用于夹心法ELISA结果令人满意［1］，我们也观察到该系统在检测夹心法和中和法ELISA时结果准确可靠，但竞争法ELISA存在处理时效性的问题。在医院免疫学检验实验室，多为各种不同检测原理项目的组合检验，应注意以竞争法检测样本时，必须用RSP 100加样后立即以BEPⅢ进行后续处理。否则，因微孔中加入样本血清后滞留时间过长，未能及时加入竞争性酶标抗体，而导致吸光度下降，阳性率增高。
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［1］ 伍建宁，夏传友，李交，等.自动化酶免检测系统与手工酶免检测的对比评价［J］.上海医学检验杂志，2001,16(5)：294295.
［2］ 王春艳，马学冬，王凯.全自动酶免分析系统在血站筛选试验中应用的优越性［J］.误诊医学杂志，2002,2(4)：552553.
