2型糖尿病患者血浆Ps和PTM的水平变化及其临床意义
作者：孙志强，杨文东，李召芳，安振国
【关键词】 2型糖尿
［摘要］ 目的：通过检测2型糖尿病(T2DM)患者血浆P选择素(Pselectin，Ps)和血栓调节蛋白(Plasma thrombomodulin，PTM)水平变化，探讨检测患者血浆Ps和PTM的临床意义。方法：采用ELISA法检测了95例T2DM 患者和50例健康对照组血浆Ps和PTM水平。结果：T2DM患者血浆Ps和PTM水平与对照(NC)组相比差异有显著性(P<0.01)；T2DMⅠ组血浆Ps和PTM水平与NC组相比均差异无显著性(P＞0.05)；T2DMⅡ组和T2DMⅢ组血浆Ps和PTM水平与NC组相比差异均有显著性(P<0.01)；T2DMⅠ组、T2DMⅡ组和T2DMⅢ组血浆Ps和PTM水平分别依次升高，且相差显著；T2DM患者血浆Ps与PTM水平呈显著的正相关(r=0.5207、P<0.01)。结论：T2DM患者体内存在血浆Ps和PTM的异常表达，即存在血小板活化和血管内皮细胞损伤，凝血系统与纤溶系统都是活化的。通过检测血浆Ps和PTM水平，可作为T2DM并发血管病变、病情判定以及效果观察的指标。
［关键词］ 2型糖尿病；Ps；血栓调节蛋白
糖尿病(DM)并发血管性疾病是DM病人最常见的并发症之一，其发病机制复杂。其中血小板活化和内皮细胞损伤起着重要作用。Ps存在于静息的血小板膜表面，介导细胞与细胞、细胞与基质间粘附作用，参与炎症和血栓形成［1］。在组胺、凝血酶以及炎症等刺激下血小板被激活，部分Ps游离于血浆中，即成为血浆Ps，故血浆Ps可作为血小板活化的标志物。血栓调节蛋白(Thrombomodulin，TM)是血管内皮细胞合成并位于细胞表面的凝血酶受体，具有介导蛋白C(Protein，PC)活化调节血液凝固和血小板的功能［2］。当血管内皮受损时，TM便脱落于血中，可引起血浆TM(Plasma thrombomodulin，PTM)的浓度上升，检测PTM是反映血管内皮损伤的敏感指标［3］。我们采用ELISA法，对95例2型糖尿病(T2DM )患者进行了血浆Ps和PTM的检测，并分别作为血小板活化和血管内皮细胞损伤标志物，同时以糖尿病肾病(DN)作为血管病变表达平台来研究两者的相关性。
1 对象与方法
1.1 研究对象 患者组：临床确诊的T2DM 患者95例，均符合WHO1999年诊断标准。男51例、女44例，年龄30岁～77岁，病程0.5 a～21 a。根据患者24 h尿白蛋白排泄率(UAE)分为T2DMⅠ、Ⅱ、Ⅲ 3组。正常对照(NC)组：本院健康体检者50例，男27例、女23例，年龄31岁～60岁。无肝和骨骼病变，也无内分泌疾病或其他慢性疾病。
1.2 标本采集 收集所有患者24 h尿液(加入10 ml甲苯防腐)，混匀记录尿总量，留取4 ml尿标本放入-20 ℃冰箱冻存，待测定尿白蛋白的排泄量，根据24 h尿量分别尿UAE。所有检测对象均于晨起抽取肘静脉血3 ml，2.7 ml于0.109 mol/L枸橼酸钠抗凝剂0.3 ml的试管中混匀，分离血浆置于-20 ℃低温保存待测血浆Ps和PTM。
1.3 方法 血浆Ps和PTM测定采用ELISA法，试剂盒由深圳晶美生物工程有限公司提供。操作方法严格按说明书进行，经孵育、洗板、酶标、再洗板、显色、酶标仪测定等步骤得出结果。酶标仪为芬兰产Multiskan MK3酶标仪、Wellwash 4 MK2洗板机。尿mALB测定，采用速率散射比浊法，仪器为美国Backman Array 360特定蛋白分析仪及配套试剂。
1.4 统计学处理 计量资料均以±s表示，组间、组内显著性比较分别采用成组和配对t检验。相关性分析进行直线回归，求出r值。
2 结果
2.1 分组 据24 h UAE把95例T2DM患者分为3组：Ⅰ组为正常白蛋白尿组(UAE＜30 mg/24 h)，共34例；Ⅱ组为微量白蛋白尿组(30 mg/24 h＜UAE＜300 mg/24 h)，共32例；Ⅲ组为大量白蛋白尿组(UAE＞300 mg/24 h)，共29例。
2.2 T2DM患者与对照组血浆Ps和PTM水平差异 见表1。
表1 两组血浆Ps和PTM检测结果(略)
表1显示:T2DM患者血浆Ps和PTM水平与对照组相比差异有显著性(P<0.01)。
2.3 T2DM患者各组血浆Ps和PTM水平差异 见表2。
表2 各组血浆Ps和PTM检测结果(略)
注：与NC组△P>0.05,※P<0.01；与T2DMⅠ组▲P<0.01；vs T2DMⅡ组★P<0.01。
表2显示:T2DMⅠ组血浆Ps和PTM水平与NC组相比差异均无显著性(P＞0.05)；T2DMⅡ组和T2DMⅢ组血浆Ps和PTM水平与NC组相比差异均有显著性(P<0.01)；T2DMⅠ组、T2DMⅡ组和T2DMⅢ组血浆Ps和PTM水平分别依次升高，且相差显著。
2.4 T2DM患者血浆Ps与PTM相关性分析 T2DM患者血浆Ps与PTM水平呈显著的正相关(r=0.520 7，P<0.01)。
3 讨论
Ps贮存于血小板的α颗粒及内皮细胞的WeibelPalade小体。炎症时活化的内皮细胞表面首先出现Ps，随后出现Es。它们对于召集白细胞到达炎症部位具有重要作用。血小板Ps［血小板颗粒膜糖蛋白140(GMP140)］是血小板颗粒膜上的糖蛋白，分子量约为140 000。当内皮细胞受损和血小板活化时，Ps可与开放管道系统的膜融合，而整合至活化血小板膜的表面即为血小板表面Ps，也可游离至血浆中即为血浆Ps。Ps一方面参与介导白细胞与内皮细胞的起始粘附，另一方面，血小板活化时表面表达的Ps可促进白细胞与血小板的粘附及在血栓部位的聚集［4，5］。TM最初发现于血管内皮细胞，也存在于胎盘滋养层细胞、血小板、巨核细胞、单核细胞、中性粒细胞、滑液层细胞、角化层细胞、脑膜细胞、平滑肌细胞、部分肿瘤细胞［6］。TM有两种形式：固定型(膜型)和溶解型(血液型)。PTM可能是膜型TM代谢所产生或血管内皮细胞损伤、炎症时受酶解而脱落下来的完整TM的胞膜外部分。TM与凝血酶以化学计量1∶1的比例形成可逆性复合物，该复合物形成后，凝血酶不再具有促凝活性但却获得了比游离的凝血酶强1 000倍的激活蛋白C的能力，活化的蛋白C在蛋白S存在情况下可以使血液凝固因子Ⅴa及Ⅷa失活，抑制凝血，还能降解纤溶酶原激活物抑制剂，增加血中纤溶酶原激活物水平，促进纤溶。本研究T2DM患者血浆Ps和PTM水平显著高于对照组；随着尿UAE的增加T2DMⅠ组、T2DMⅡ组和T2DMⅢ组血浆Ps和PTM水平分别依次升高，相差异具有显著性；T2DM患者血浆Ps与PTM水平呈显著的正相关。说明T2DM患者体内同时存在着血管内皮细胞的损伤和血小板活化，并且在微血管发生病变后更为显著。T2DM患者由于持续高血糖，在糖基化终产物形成过程中产生大量自由基直接损伤血管内皮细胞，使PTM水平升高。血管内皮细胞损伤后，皮下胶原暴露，凝血因子被激活(如凝血酶等)，引发血小板活化，使血浆Ps水平升高。活化后的血小板发生粘附、聚集，从而引起粘滞度增高，导致组织缺血缺氧，进一步加重血管病变的发生，促进了病情的。
本研究结果显示，T2DM 患者体内存在血浆Ps和PTM的异常表达，即存在血小板活化和血管内皮细胞损伤，凝血系统与纤溶系统都是活化的。T2DM患者随着尿UAE的增加血浆Ps和PTM水平分别依次升高，各组间差异具有显著性，血浆Ps与PTM水平呈显著的正相关，两个指标联合诊断意义更大［8］，因此，通过检测血浆Ps和PTM水平，可作为T2DM并发血管病变、病情判定以及效果观察的指标。
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