核仁组成区嗜银蛋白染色在良恶性疾病诊断中的价值
【关键词】 ,AgNOR；细胞化学；诊断
［摘要］ 目的：探讨核仁组成区嗜银蛋白(AgNOR)计数在良、恶性疾病诊断中的临床应用价值。方法：采用李青AgNOR改良法对组织切片进行染色，按照“上海方案”(1993)进行分型计数。结果：74例良性疾病AgNOR计数均值X=1.94/细胞，S=0.42；74例恶性疾病AgNOR计数X=5.98/细胞，S=0.49。经统计学处理P＜0.001，两者之间差异有极为显著性。结论：AgNOR可以用于临床良、恶性疾病的鉴别诊断，而且有快速、可靠、易操作、易推广之特点。
［关键词］ AgNOR；细胞化学；诊断
The Value of AgNOR in the Diagnosis of Benign and Malignant Disease
Abstract：Objective To investigate the clinical value of AgNOR count in the diagnosis of benign and malignant disease.Methods The silver colloid technique improved by LI Qing were used in the tissue slice staining to examine the AgNOR count,and AgNOR count was based on the Shanghai Proposal(1993).Results In 74 patients with benign disease,the mean AgNOR count was 1.94 percent, s=0.42;and in 74 patients with malignant disease,the mean AgNOR count was 5.98 percent,s=0.49.The mean AgNOR count had significant difference between two groups,P<0.001.Conclusion AgNOR count may be used in the differential diagnosis of benign and malignant disease,and it has following features:fastresulting,lowcost,good reliability,and easy handling.
Key Words：AgNOR；Cytochemistry；Diagnosis
核仁是非分裂细胞核的主要结构，在特殊的染色体部位形成，此部位有rRNA基因编码。人类核仁组成区位于近端着丝点染色体13、14、15、21和22号短臂的次缢痕区［1］。这10条染色体上核仁组成区可用银染色方法显示，其功能可能与核糖体RNA活性、蛋白质合成和细胞增殖等有关。因此，观察细胞中核仁组成区嗜银蛋白(AgNOR)的数量，可以反映细胞倍体数和细胞生长活性并可作为疾病良、恶性的鉴别诊断指标等作用。
1 对象与方法
1.1 对象 随机抽取我院病理科2004年1月至2004年10月确诊病例标本148例，其中良性疾病标本74例，恶性疾病标本74例，男69例，女79例，年龄28岁～76岁。
1.2 方法 石蜡常规切片，厚度4 μm，脱蜡至水；去离子水洗3次，每次3 min；按照李青AgNOR改良法(1993)［2］行银染色；按照“上海方案”［3］进行AgNOR计数和分型。
2 结果
148例良、恶性疾病标本AgNOR计数分别为X=1.94/细胞，S=0.42；X=5.98/细胞，S=0.49。经成组样本均数t检验(因两组标本数均大于50，可免方差齐性检验)P＜0.001，差异有极其显著性。另外，良、恶性疾病AgNOR分型分布构成也不尽相同。良性疾病AgNOR分型构成比依次为单一型94.60%；核仁内型2.70%；聚集型1.35%；弥散型1.35%；未见混合型。恶性疾病AgNOR分型构成比依次为单一型2.70%；核仁内型25.68%；聚集型5.41%；弥散型55.41%；混合型10.80%。具体结果见表1、表2、表3。
表1 148例良、恶性疾病AgNOR计数结果（略）
注：经成组设计，两样本t检验P＜0.001，差异有极显著性
表2 148例良、恶性疾病AgNOR形态分型（略）
表3 148例良、恶性疾病种类（略）
3 讨论
人类的rDNA分别位于第13、14、15、21和22号5对染色体上，这10条含有rDNA的区段以襻环形式集结在核仁中，而每一襻环上成串排列的rDNA即为一个核仁组成区(NOR)，即专门为合成rRNA提供模板，理论上应形成10个核仁，但实际上细胞中通常仅见1个~2个核仁，因为小的核仁往往迅速生长后互相融合，形成一个或数个大的核仁。核仁是一个高度动态的结构，有丝分裂过程中表现出周期性的解体与重建，当细胞从间期进入分裂期时，随着染色质的凝集，含rDNA的襻环回缩至相应的染色体。染色质的主要化学成分为DNA和组蛋白，二者含量约1∶1，此外还含有少量的非组蛋白和RNA。其中DNA与组蛋白含量极为稳定，非组蛋白与RNA的含量则随细胞生理状态不同而变化。细胞化学表明银既不与rDNA结合，也不与rRNA结合，而是和与rRNA相关的酸性非组蛋白结合。后者即为AgNOR。非组蛋白因富含带负电荷的天冬氨酸和谷氨酸而呈酸性，可以与染色体上特异的DNA序列相结合，故又称为特异性DNA结合蛋白。其和DNA的比例为0.6∶1，虽然量极少，种类多，功能各异。包括有与DNA合成修复有关的DNA聚合酶、连接酶、rRNA聚合酶、部分结构蛋白和调节蛋白，并能特异性解除组蛋白对DNA的抑制作用，参与基因的表达调控。能和银结合的相关蛋白主要是具有转录活性的(NOR)，而它极有可能是RNA聚合酶Ⅰ的亚单位，是rDNA转录的调节蛋白或者是高度磷酸化的蛋白。如果是前者，则代表着rDNA的转录情况和蛋白的合成情况，如若是后者，则代表着细胞已很少或不受组蛋白抑制而进入无限增殖，甚至“永生化”。另外，(NOR)位于具有近端着丝粒染色体次缢痕区，其数目和rDNA大体应相当，所以它又决定着核仁数目，是细胞进行有丝分裂的原动力。细胞核内AgNOR数目主要取决于：核仁内rDNA的转录活性；染色体组中含有近端着丝粒染色体的数目，而其增加的主要可能是：细胞分裂加剧，核仁分解致使AgNOR散布于胞核内；核仁融合有缺陷，AgNOR分解；细胞染色体的倍体数增加导致含NOR染色体的数目增多；rDNA转录活动增加，使本来不明显的AgNOR重现。良性疾病和恶性疾病(癌)的主要区别就在于后者细胞异常分化，自律(主)增殖，所以笔者通过银染计数AgNOR也就从客观上反映二者本质上的区别，笔者的试验结果也证实了这一点。二者无论是AgNOR数目多少，形态构成均极不相同，恶性标本AgNOR分型构成比可能也预示了其异质程度。因为AgNOR数目和形态间接地提示细胞增殖程度、转化情况、是良是恶。由此可推该技术很可能是一项集、迅速、可靠、易于推广且能较好地用于疾病的良、恶性鉴别诊断指标。
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［1］ 杨抚华．医学生物学［M］.北京：出版社，2003：77115.
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