Skp2在大肠癌中的表达及其与p27kip1表达的相关性研究

                    作者：许双塔，贺雅莉，许建华，黄旭，许东坡

【关键词】  大肠癌

　　摘要：目的：为探讨大肠癌手术标本中Skp2的表达及其与p27kip1表达的相关性。方法：应用免疫组织化学STREPT-AVIDIN-BIOTIN-COMPLEX法，检测大肠癌手术标本中Skp2、p27kip1的表达。结果：Skp2的表达的阳性率：浸润于粘膜以及粘膜下层为0％（0/4），浸润达肌层者为40％（2/5）。浸润达浆膜层者为61％（43/71）；淋巴结转移阳性者阳性率为77％（36/47）；临床病理分期第１、２、３期阳性率分别为22％（2/9），29％（7/24）和77％（36/47）。Skp2在大肠癌中的表达与p27kip1的表达呈现明显负相关；统计学检验有显著性（P<0.01）。结论：大肠癌组织中， Skp2的过度表达和p27kip1的表达缺失有明显的相关性，可能通过降低p27kip1的表达而促进肿瘤的浸润和转移。检测癌组织中Skp2、p27kip1的表达情况，有助于评估肿瘤的生物学行为，对患者的预后判断具有重要意义。

　　关键词：  大肠癌；  Skp2；  p27kip1；  免疫组织化学

　　Expression of Skp2 in Colorectal Carcinomas and its Relation with p27kip1

　　Abstract： Objective： To analyze the expression of skp2 and p27kip1 in a series of human tissue sample representing different stages of colorectal carcinomas. Method： Paraffin embedded materials from 80 samples of colorectal carcinomas were analyzed by immunohistochemistry for skp2 and p27kip1 expression. Result： Of 80 cases, 45(56.3%) were positive for skp2. The expression of skp2 was significantly related to the lymphatic metastasis77%(36/47) and the rate of skp2 expression in different TNM stage of the colorectal carcinomas. It also has significant relation with the expression of p27kip1  (p<0.01).Conclusion： The skp2 expression are related to the invasion and metastasis of the colorectal carcinomas and the expression of p27kip1.It promotes the invasion and metastasis of colorectal carcinomas .

　　Key words：  Colorectal cancer;  Skp2；  p27kip1;  Immunohistochemistry

　　Skp2是F-box蛋白家庭成员之一，在细胞的增殖调节中起到重要作用。其作为泛素蛋白酶体路径的底物识别序列，因能泛素化降解p27kip1而与肿瘤关系密切。目前，Skp2与恶性肿瘤细胞的发生、、预后方面的研究正在不断深入，已经成为肿瘤学研究中的一大热点，具有潜在的诊断和价值。

　　1  资料与方法

　　1.1  一般资料：我院1990年至1996年大肠癌根治手术切除标本80例，其中男48例，女32例，年龄40～78岁，平均年龄57.6岁。所有标本都经过病理证实为大肠癌。所有病例术前未经过放射治疗或化学治疗。病例的临床病理分期：Duke’s A期9例，B期24例，C期47例。随访资料完整。标本经过福尔马林固定，常规石蜡包埋，制成连续5um切片备用。每例取原发灶癌组织。

　　1.2  试剂：主要试剂包括：鼠抗人Skp2、p27kip1单克隆抗体；STREPT-AVIDIN-BIOTIN-COMPLEX免疫组织化学试剂盒。

　　1.3  方法：采用免疫组织化学STREPT-AVIDIN-BIOTIN-COMPLEX法，按照STREPT-AVIDIN-BIOTIN-COMPLEX试剂盒说明进行。每份标本行苏木素伊红染色对照。用缓冲液替代一抗作为阴性对照。

　　1.4  结果判断标准：①：Skp2、p27kip1阳性标准：阳性显色为棕黄色颗粒，着色以细胞核为主，少数细胞有胞浆显色，并且显色的细胞占全部细胞数的10％以上者。②：Skp2、p27kip1阴性标准：切片中细胞核不显色，或显色的细胞总数占全部粘膜细胞的10％以下者。

　　1.5  统计学分析：采用统计学软件包SPSS进行统计学分析。方法上应用卡方检验。

　　2  结果

　　Skp2的表达的阳性率为：浸润于粘膜以及粘膜下层0％（0/4），浸润达肌层者为40％（2/5）。浸润达浆膜层者为61％（43/71）；淋巴结转移阳性者阳性率为77％（36/47）；Duke’s 分期第A、B、C期阳性率分别为22％（2/9），29％（7/24）和77％（36/47）。统计学检验有显著性；（P<0.01）由此可见， Skp2的表达与肿瘤的浸润深度、淋巴转移和临床病理分期显著相关。同时，Skp2的表达和p27Kip1的表达呈现明显的负相关（P<0.01）。

　　3  讨论
　　
　　不可控制的细胞增殖是癌症的特征。肿瘤的恶性增殖从生物学角度看主要表现在两个方面：一方面是肿瘤细胞的“不灭性”，即凋亡障碍；另一方面是细胞分裂的失控，即细胞周期调控系统的障碍。参与细胞周期调控的分子有：细胞周期蛋白（Cyclins），细胞周期蛋白依赖性激酶（Cyclin-dependent kinase，CDK），磷酸化酶以及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白（Cyclin-dependent kinase inhibitor，CKI）。Cyclin-CDK复合物对细胞周期有正调节作用，CKI则起到负调节作用，并且能够通过和Cyclin-CDK形成稳定的复合物，抑制CDK催化活性。

　　
　　p27kip1是新型候选抑癌基因，其能够阻止细胞通过G1-S期转换关卡而抑制细胞增殖。其低表达被认为与肿瘤的预后不良及高度的侵袭性密切相关［1，2］。细胞S期激酶相关蛋白Skp2，作为泛素蛋白酶体路径的底物识别序列，因能泛素化降解主要的CKI－p27kip1而与肿瘤关系密切，目前在已经成为肿瘤学研究中的一大热点，具有潜在的诊断和价值。Masuda小组应用RT-PCR方法和免疫组织化学方法检测了98例胃癌患肢标本及邻近正常组织中Skp2的表达，发现其与淋巴结转移、浸润等肿瘤生物学行为相关，并且与胃癌的预后相关［3］。Kudo小组应用免疫组化的方法检测了15例口腔癌标本中Skp2的表达，发现Skp2高表达组的累计生存率显著降低，并且阐明了以Skp2和p27kip1在口腔癌中联合判断预后的临床价值［4］。Signoretti等在乳腺癌中检测到Skp2的高表达，通过Cox回归模型，提示Skp2高表达是预后不良的一个明显的相关因素［5］； Yang等研究了Skp2在前列腺癌细胞中的Skp2表达情况，提出Skp2的表达可以作为前列腺癌根治术后复发的强有力预测指标［6］；Dong等在喉癌标本中检测出Skp2的高表达和p27kip1的低表达，并且认为，二者是判断喉癌进展程度的有效指标［7］。
　　
　　近来一些研究表明，在恶性肿瘤中Skp2的表达有不同程度的增高，同时伴随有p27kip1表达的降低。因此一些学者认为，这是由于其造成肿瘤细胞中的p27kip1表达降低造成的。上述研究揭示了在一些恶性肿瘤中，Skp2的表达增高不同程度影响肿瘤细胞的生物学行为，但是在Skp2和p27kip1的相关关系的研究中，仍然存在一些争议。国外一些学者认为这种相关关系仅仅表现在某些特定的肿瘤中，并且也仅仅在这些特定的肿瘤中具有明显的预后判断价值。Dowen等在宫颈癌中Skp2表达和p27kip1表达的相关研究中，发现Skp2的高表达确实与肿瘤的恶性程度相关，但是在高表达的Skp2标本中，并未检测到其与p27表达的相关性［8］； Oliveira等在软组织肉瘤中的Skp2表达研究中，同样没有发现二者的表达相关［9］。目前Skp2在大肠中的表达的研究在国内外尚处于空白，国内更无大肠癌中Skp2与抑癌基因p27kip1表达的相关性研究报道。
　　
　　本研究的结果表明在浸润程度高、有淋巴转移和临床病理分期晚的肿瘤组织中Skp2的表达明显增高，与上述研究报道相符。研究结果表明，随着大肠癌疾病的进展，Skp2的表达呈现一种增高的趋势。并且，Skp2的高表达常伴随p27kip1的低表达状态，二者具有显著相关性。因此，我们可以推测，Skp2通过泛素化降解主要的CKI－p27kip1而在大肠癌的发生过程中起到重要的作用。
　　
　　目前，Skp2的研究尚局限于少数一些恶性肿瘤中间，对Skp2的表达和其与p27kip1的相关机制的研究才刚刚开始，现有的研究已经为我们提供了一个较好的研究预期，并且揭示了二者联合在预后判断中的重要临床价值。

　　：

　　［1］  许双塔，许东坡．新型候选肿瘤抑制基因p27Kip1研究进展［Ｊ］．福建医科大学学报，2000，34：

　　［2］  许双塔，许东坡．p27Kip1在结肠癌中的表达及临床意义［Ｊ］．福建医科大学学报，2000，３4：

　　［3］  Masuda TA, Inoue H, Sonoda H, et al. Clinical and biological significance of S-phase kinase-asscoiated protein 2(skp2) gene expression in gastric carcinoma: modulation of malignant phenotype by skp2 overexpression , possibly via p27 protcolysis［Ｊ］. Cancer Res, 2002, 62(13):3819-3825.

　　［4］  Kudo Y, Kitajima S, Sato S, et al. High expression of S-phase kinase-interacting protein 2, human F-box protein, correlates with poor prognosis in oral squamous cell carcinomas［Ｊ］． Cancer Res, 2001, 61(19):7044-7047.

　　［5］  Signoretti S, Di Marcotullio L, Richardson A, et al. Oncogenic role of the ubiquitin ligase subunit Skp2 in human breast cancer［Ｊ］. Clin Invest, 2002, 110(5):633-641．

　　［6］  Yang G, Ayala G, Marzo AD, et al. Elevated Skp2 protein expression in human protrate cancer: association with loss of the cyclin-dependernt kinase inhibitor p27 ad PTEN and with reduce recurrence-free survival［Ｊ］. Clin Cancer Res, 2002,8(11):3419-3426.

　　［7］  Dong Y, Sui L, Watanabe Y,et al. S-phase kinase-associated protein 2 expression in laryngeal aquamous cell carcinomas and its prognostic implications［Ｊ］. Oncol Rep,2003,10(2):321-325．

　　［8］  Shigemasa K, gu L, O Brien TJ,et al. Skp2 over expression is a prognostic factor in patients with ovarian adenocarcinoma［Ｊ］. Clin Cancer Res, 2003, 9(5):1756-176３．

　　［9］  Dowen SE, Scott A, Mukherjee G, et al. Overexpression of skp2 in carcinoma of the cervix does not correlate inversely with p27 expression［Ｊ］. Int Cancer, 2003,105(3):326-330.