α-抑制素CD99联合应用在卵巢性索间质肿瘤表达意义的研究
【关键词】 α-抑制素
摘 要：目的：探讨α-抑制素、CD99、EMA在卵巢性索间质肿瘤中的表达情况及在该类肿瘤的诊断、鉴别诊断及预后等方面的意义，为临床病理诊断和鉴别诊断提供依据。方法：收集我院病理确诊的卵巢性索间质肿瘤41例，其中颗粒细胞瘤21例，卵泡膜纤维瘤11例，环状小管性索瘤4例, 支持间质细胞瘤3例，卵巢支持细胞瘤2例。同时选择10例卵巢上皮性肿瘤作为对照进行对比观察（见附表）。所有标本均经中性福尔马林固定，4um切片，用SP法免疫组化标记，α- 抑制素、CD99、EMA均为鼠抗单克隆抗体。DAB显色后，苏木素复染、中性树胶封固。以正常一抗动物血清代替一抗做阴性对照，抗体由北京中山生物技术公司提供。结果判定:α-抑制素阳性在核或浆，CD99阳性表达在细胞膜或浆。结果：颗粒细胞瘤21例中，α-抑制素19例阳性,阳性率为90.5%,CD99 有17例阳性,阳性率80.9%；卵泡膜纤维瘤11例中，α-抑制素9例阳性,CD99均为阳性；环状小管性索瘤4例，α- 抑制素均为阳性,CD99 3例阳性；支持间质细胞瘤3例、支持细胞腺瘤2例，α-抑制素、CD99均为阳性,幼年性颗粒细胞瘤复发者1例两次均为阳性。结论：α-抑制素、CD99联合应用标记性索间质肿瘤有很高的敏感性和特异性，对区分性索间质肿瘤类型、判定复发、预后、转移有重要意义，其效果明显优于单纯应用CD99、苗勒抑制物、Melan- A等标记物。
关键词： 卵巢性索间质肿瘤； 免疫组化； α- 抑制素； CD99
Investigate the Expression of α-inhibin、CD99 in Ovarian Sex Gonad Stromal Tumors
Abstract： Objective： To investigate the expression of α-inhibin, CD99, EMA in ovarian sex gonad stromal tumors and the significance in diagnosis, differential diagnosis and prognosis of these tumors. To provide more scientific bases for clinical pathologic diagnosis and differential diagnosis.Method： 41 specimens and clinical history were collected including 21 cases of granulosa cell tumor, 11 cases of ovarian fibroma, 4 cases of sex cord tumor with annular tubules, 3 cases of sertoli-leydig cell tumor and 2 cases of ovarian sertoli cell tumor.And 10 cases of ovarian epithelial tumor are selected as controls (see the attached table). All these specimens are processed neutral formaldehyde solution fixation, 4um section; then labeling with SP immunohistochemistry, α-inhibin, CD99, EMA are murine monoclonal antibody, after DAB ,neutral gum mounting at last. Instead of primary anti, we use normal primary anti animal blood serum as the negative contrast, the antibody is provided by Beijing zhongshan biotechnology company. Result： Determination:α-inhibin positive occurs on cell nucleus or cell plasm, CD99 positive occurs on cell membrance or plasm. In the 21 cases of granulosa cell tumor, 19 cases are α-inhibin positive, positive rate is 90.5%; 17 cases are CD99 positive, positive rate is 80.9%; In the 11 cases of ovarian fibroma, 9 cases are α- inhibin positive, all these cases are CD99 positive;In 4 cases of sex cord tumor with annular tubules, all of them are α-inhibin positive and 3 cases CD99 positive. In 3 cases of sertolileying cell tumor and 2 cases of ovarian sertoli cell adeoma,all of them are both α-inhibin positive and CD99 positive. In 1 case of repea childhood granulosa cell tumor both are positive in primary and relapse. Conclusion： High sensibitity and specificity can be obtained by labelling sex gonad stromal tumors with the combination of α-inhibin and CD99. It has important significance in distinguishing the types of sex gonad stromal tumors, determining relapes, prognosis and metastasis. It is superior to use CD99,mullenian inhibiting substance ,Melan- A purely and proper to wide usage.
Key words: Ovarian sex gonad stromal tumor; Immunohistochemistry; α- inhibin; CD99
1 资料与方法
1.1资料来源：全部病例均为我院1993年7月至2004年4月妇科住院手术病例,经光镜病理确诊的性索间质肿瘤,筛选无出血、坏死的41例的蜡块标本,其中颗粒细胞瘤21例,卵泡膜纤维瘤11例,环状小管性索瘤4例,支持间质细胞瘤3例, 支持细胞腺瘤2例。
1.2方法:所选蜡块标本均经中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，4um切片，分别做HE染色和免疫组化：α-抑制素、CD99、EMA均为鼠抗单克隆抗体、枸缘酸钠缓冲液（0.01mol/l、PH值6.0）处理,微波92～98℃，10～15min修复，一抗4℃冰箱过夜，经DAB显色后，苏木素复染，中性树胶封固，PBS缓冲液代替一抗做阴性对照，抗体由北京中山生物技术公司提供。结果判定α- 抑制素阳性在核/浆，CD99阳性表达在胞膜/浆上，定量计数标准:1%～10%（+）、10%～50%（++）、＞50%（+++）、＜1%（―）。
2结 果
2.1临床资料:41例病例中, 病人年龄12～68岁，平均年龄39.1岁,高峰年龄为30～45岁，其中双侧者4例，单侧32例，转移1例。临床症状：下腹包块26例，阴道流血3例，经期延长伴月经量增多3例，闭经伴毛发增多4例，其中一例幼年性颗粒细胞瘤出现性早熟现象。肿物最大D：30.5cm，最小D：3.4cm，D>16cm巨大肿物6例，切面呈囊实性7例，实性34例。复发1例，转移2例，颗粒细胞瘤行双侧卵巢子宫全切12例，其中2例伴子宫内膜样癌行子宫根治术,1例为幼年行肿物单纯切除术后一年复发;卵泡膜纤维瘤瘤单纯切除11例。
2.2免疫组化结果:颗粒细胞瘤21例中α-抑制素19例阳性,阳性率为90.5%、CD99 有17例阳性,阳性率80.9%、EMA均为阴性；卵泡膜纤维瘤11例中α-抑制素9例阳性、CD99均为阳性、EMA均为阴性；环状小管性索瘤4例，α-抑制素均为阳性、CD99 3例阳性、EMA均为阴性；支持间质细胞瘤3例，α-抑制素、CD99均为阳性、EMA均为阴性；支持细胞腺瘤2例α-抑制素、CD99、EMA均为阳性,幼年性颗粒细胞瘤复发者1例,两次均为阳性。见表1。
表1 α- 抑制素、CD99与EMA与卵巢肿瘤类型的关系比较表（略）
3 讨 论
卵巢肿瘤种类繁多，而性索间质类肿瘤相对少见，约占卵巢肿瘤的5%［1］，主要包括向女性间叶分化的颗粒细胞瘤、卵胞膜细胞瘤、硬化性间质瘤、纤维瘤和向男性间叶分化的支持- 间质细胞瘤等，此外还包括向两性分化的两性母细胞瘤和未分类的伴环状小管性索瘤等。约2/3该类肿瘤病人临床常常有内分泌症状。在以上肿瘤中，颗粒细胞瘤约占肿瘤的一半；我们知道，颗粒细胞瘤容易远期复发和转移，为恶性或低度恶性肿瘤；而高分化-支持间质细胞为良性肿瘤，但部分中度分化和低分化支持- 间质细胞瘤又常常表现为恶性生物学行为，其他大部肿瘤均为良性。因此，正确区分其组织类型对指导临床和判断预后，就显得尤为重要。大多数卵巢性索间质肿瘤，都能通过普通HE染色，光镜检查得以确诊；但当肿瘤分化较低、形态结构不典型时，往往诊断较为困难，这就需要借助免疫组化进行区分；以往由于缺乏特异性较强的标志物，使免疫组化在性索间质肿瘤中的应用价值作用不大，虽有人用Calretinin、苗勒抑制物、Melan- A等作为性索间质肿瘤的有效抗体，但不敏感［2］。后来人们研究发现：尤文氏肉瘤的特异性标志物CD99在性索间质肿瘤中有高达94.5%［6］的表达率，且临床有内分泌症状时表达率更高，原因不明［3～5］。近来有人发现：卵巢颗粒细胞能分泌一种激素叫抑制素,是一种二聚体蛋白激素，由α、β亚单位组成，其生理功能是抑制垂体分泌滤泡生成素，是卵巢滤泡生长发育的调节因子；现已明确：几乎所有的卵巢性索间质肿瘤细胞都能分泌抑制素，尤其是颗粒细胞瘤细胞最为明显。其分泌的抑制素为α和βA、βB亚单位，而卵巢上皮性肿瘤只能分泌βA亚单位，因此，α- 抑制素可作为卵巢性索间质肿瘤的有效敏感的标记物。我们把α- 抑制素和CD99联合应用于性索间质肿瘤的诊断和鉴别诊断，结果发现：a-抑制素和CD99在各种性索间质肿瘤中均有很高的表达率：本组资料中a-抑制素在颗粒细胞瘤、卵泡膜纤维瘤的表达率分别为90.5%和81.8%,在支持间质细胞瘤、伴环状小管性索瘤、支持细胞瘤中均显示100%表达，CD99除2例肉瘤型颗粒细胞瘤和一例伴环状小管性索瘤表达不理想外，其余肿瘤也显示较强表达。本课题中病例赵尔莹，13岁，女，术后一年复发，特别是复发的肿瘤，组织结构更不典型，但α- 抑制素和CD99免疫组化两次均为阳性，结果相同,为肿瘤的确诊提供了依据。两例转移到网膜的肿瘤，常规考虑为腹腔促纤维增生性小细胞肉瘤和小细胞癌，免疫组化Vimtin（+）、α-抑制素、CD99均为阳性，支持颗粒细胞瘤的诊断，确定了肿瘤组织来源；研究结果还显示：α- 抑制素、CD99在颗粒细胞瘤中的表达强度比卵泡膜纤维瘤要高；临床有内分泌症状的肿瘤，其阳性表达率高于无症状者；而患者的年龄对表达率无明显影响。本实验还显示：支持间质细胞瘤中的间质细胞、黄素化的卵泡膜细胞、和形成明显腺管状结构的支持细胞部分着色强度更加明显。从对照的结果来看，绝大部分上皮性肿瘤a-抑制素和CD99都呈阴性反应。据报道，a- 抑制素在黏液性肿瘤中表达率相对较高，可达28%。对颗粒细胞瘤与上皮性肿瘤的鉴别诊断，以结合使用EMA比较理想，因为一般认为颗粒细胞瘤EMA为阴性，而约40%的病例不同程度的表达CK。综上所述：本研究认为，a-抑制素和CD99单克隆抗体对卵巢性索间质性肿瘤细胞有很高的敏感性和特异性，其中又以a-抑制素的特异性更高，是卵巢肿瘤鉴别诊断中很有实用价值的抗体。本课题研究实施费用较低，使用即用型药盒，无需添加专门的仪器设备即能开展工作，适于各推广使用。
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