牙龈鳞癌中p65和VEGF的表达及意义
作者：姜艳娥,李奇志,毛永荣
【摘要】 目的 研究p65和VEGF在牙龈癌组织中的表达及意义。方法 应用免疫组化SP法检测46例牙龈鳞癌组织中p65和VEGF的表达，并与临床病理指标结合进行分析。结果 牙龈鳞癌组织中p65与VEGF阳性率分别为63.04%与56.52%。p65的表达与牙龈鳞癌的病理分级、淋巴结转移无相关性，与临床分期明显相关(P＜0.05）。VEGF的表达与牙龈鳞癌的病理分级、淋巴结转移密切相关(P＜0.05)。p65与VEGF在牙龈鳞癌的表达呈正相关。结论 p65和VEGF参与牙龈鳞癌的发生过程，可作为评估牙龈鳞癌生物学行为的一项指标，用于识别高危转移和不良预后者。
【关键词】 牙龈癌;免疫组织化学;p65;VEGF
NF?κB (p65)是具有多向性转录调节作用的序列特异性DNA结合蛋白,调控多种基因的表达,参与细胞增殖、凋亡及细胞因子的产生,在肿瘤的发生发展中起重要作用。血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)是从粘液细胞或神经母细胞瘤中提取的较强的血管生成因子，能特异性地结合血管内皮细胞，促进内皮细胞生长，增强血管通透性，从而协助肿瘤细胞进入脉管系统，加速肿瘤的扩散与转移，影响患者的预后，本实验拟探讨牙龈癌组织中p65和VEGF的表达及其相互关系。
1 资料和方法
1.1 病例选择
所有检测标本为湖北省肿瘤1995年1月～2005年11月间牙龈癌手术后病人的病理存档蜡块，筛选病例，要求所有患者术前未接受放疗或化疗。共收集46例标本，其中男性19例，女性27例，年龄29～71岁，平均年龄52.36岁。病理分级,其中高分化24例，中分化22例。切片后HE染色，并经病理科医师重新阅片后确诊。8例正常口腔粘膜的石蜡标本作为对照，对照标本来自湖北省肿瘤医院切除舌下腺和舌部良性肿块时切取的周围正常口腔粘膜。
1.2 试剂和方法
p65和VEGF单克隆抗体及SP试剂均购于福州迈新生物技术开发公司。石蜡包埋标本制成4～5μm的连续切片，脱蜡，脱水，采用SP染色（按照说明书进行操作），分别对p65和VEGF进行染色。用已知阳性切片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判断
p65的阳性表达为细胞浆及部分细胞核出现棕黄色颗粒，VEGF的阳性表达为细胞浆出现棕黄色颗粒。高倍镜下取5个不同视野，各计数200个细胞，按阳性细胞所占的百分率分为阴性 ～阳性。阳性细胞＜10%为阴性，阳性细胞≥10%为阳性。实验时，均设立阳性及阴性对照。
1.4 统计学处理
所有数据在SPSS 11.0 for WINDOWS统计软件下进行分析。统计学方法采用χ2检验和相关分析。
2 结果
2.1 p65和VEGF蛋白在牙龈癌组织中的表达 牙龈癌组织中p65蛋白呈阳性表达者29例，阳性率为63.04%，与对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。VEGF蛋白呈阳性表达者26例，阳性率为56.52%，与对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表1。表1 p65和VEGF在实验组和对照组中的表达
2.2 牙龈癌组织中p65和VEGF蛋白表达与临床病理参数之间的关系
本实验中p65的表达与临床分期明显相关，差异有统计学意义(P＜0.05)。VEGF蛋白表达与组织学分级、临床分期明显相关(P＜0.05)。有淋巴结转移者VEGF阳性表达率明显高于无淋巴结转移者。两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05),见表2。表2 p65和VEGF与牙龈癌临床病理特征的关系
2.3 牙龈癌组织中p65和VEGF表达间的相互关系
29例p65表达阳性的牙龈癌中，有22例VEGF呈阳性表达，阳性率为75.86%，而17例p65表达阴性者，VEGF呈阳性表达为7例，阳性率为41.18%，两者比较，差异具有统计学意义(P＜0.01)。
3 讨论
3.1 核因子κB(Nuclear factor of kappa B，NF?κB)最早由Sen和Baltimore于1986年发现，是一类具有多向性转录调节作用的核蛋白因子，通常由p50和p65组成异源二聚体。有研究证明p65在卵巢癌、结肠癌、乳腺癌、咽部鳞癌等恶性肿瘤中表达增加[1]。本实验结果表明：p65在牙龈癌组织中的表达显著高于正常口腔粘膜的表达，其表达上调提示细胞增生旺盛及癌变可能，推测是通过转录凋亡调控基因和转录增生相关基因，参与细胞增生和凋亡的调控，在肿瘤的发生过程中发挥重要作用[2]。本实验发现p65在临床分期中Ⅲ、Ⅳ期的表达明显高于Ⅰ、Ⅱ期，与Aggarwal等[3]研究相符。其机制可能是通过阻断头颈部鳞癌细胞p65信号传导通路，抑制基质金属蛋白酶?9等基因的表达，从而抑制了癌细胞的生长和转移。肿瘤组织中p65异常高表达及核移位可增加促转移因子的表达，影响肿瘤的区域淋巴结转移及其对周围组织的侵袭，促进肿瘤发生转移，成为预后不良的因素。
3.2 VEGF是1989年由Ferrara等在牛垂体滤泡星状细胞培养物中纯化分离到的一种肝素结合因子，人类VEGF基因位于染色体的6p21.3，全长28kb，由8个外显子和7个内含子构成，是一种同型二聚体。VEGF对血管内皮细胞具有强烈的促分裂和趋化作用，在体内可刺激血管的发生和生长，同时促进血管内物质的渗漏，为血管内皮细胞的迁移及肿瘤细胞的转移提供基质[4]，本研究发现VEGF在牙龈癌中的表达率为56.52%，提示在肿瘤发生、发展的整个过程都可能存在VEGF的分泌。王禹等[5]用EL1SA法检测36例乳腺癌患者、22例乳腺纤维腺瘤及乳腺囊性增生患者和35例正常健康女性血清VEGF含量结果显示，VEGF水平乳腺癌组与良性病变组和正常对照组比较差异有统计学意义。本研究发现VEGF在Ⅲ、Ⅳ期的表达明显高于Ⅰ、Ⅱ期，这与郭翔等[6]的研究一致，其将血清VEGF的表达与组织VEGF的表达结合起来分析鼻咽癌患者预后，结果表明鼻咽癌组织及血清中VEGF蛋白检测均可用于判断鼻咽癌患者远处转移风险，两者联合检测可提高预测患者出现远处转移的能力。本组实验发现VEGF表达与颈淋巴结转移具有正相
关性。这可能与VEGF增加微血管特别是毛细血管后静脉和小静脉的渗透性，加之瘤区缺乏有效的淋巴循环，导致瘤内及瘤周间质水肿，使组织间隙变宽和开放，大量组织间液在回流过程中引导瘤细胞向毛细淋巴管方向运动，最后随组织液一起进入到毛细淋巴管，最终导致淋巴道转移。
3.3 本研究结果p65和VEGF共同表达22例，统计学分析两者具有相关性（P＜0.05）。提示p65和VEGF在牙龈癌生物学行为中可能有内在联系，共同促进牙龈癌的血管形成与远处侵袭转移。VEGF本身在血管形成中的作用已较清楚，与p65之间的密切关系初步得以证实，但两者间相互作用机制有待进一步研究。
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［1］ Yu LL，Yu HG，Yu JP，et al．Nuclear factor?kappa B p65(RelA) transcription factor is constitutively activated in human colorectal carcinoma tissue[J]．World J Gastroenterol，2004，10(22)：3255?3260．
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[5] 王禹，张颖超，杨威，等．乳腺癌和良性乳腺疾病患者血清中VEGF的变化[J]．吉林大学学报(医学版)，2005，31(1)：133?135.
[6] 郭翔，曹素，洪明晃,等．VEGF蛋白检测对预测鼻咽癌远处转移风险的价值[J]． 癌症，2004，23(10)：1171?1175．
