低剂量辐射对环磷酰胺致肝功能损伤的影响

【关键词】  低剂量辐射；环磷酰胺；氧化应激；肝损伤

　　【关键词】 低剂量辐射；环磷酰胺；氧化应激；肝损伤

　　1材料和方法

　　1.1材料清洁型昆明种小白鼠53只，雄性，体质量（20±2）g，4～6周龄，由青岛市实验动物和动物实验中心提供. 随机分为空白对照组、荷瘤对照组（假照组）、荷瘤低剂量照射组（LDR组）、荷瘤环磷酰胺化疗组（CTX组）和荷瘤低剂量照射联合化疗组（LDR+CTX组）. 常规饲养，饮水、食物不限.

　　1.2方法

　　1.2.1荷瘤动物模型的制备小鼠先适应1 wk，常规饲养. S180肉瘤细胞腹腔传代10 d，抽取腹水，将处于对数生长期的肿瘤细胞按常规方法制成8×1010/L的悬液，于小鼠左腹股沟皮下各接种8×106（0.1 mL）个肿瘤细胞（空白对照组除外）.

　　1.2.2照射条件60Co照射，源皮距209.5 cm，使用自制纸盒盛装小鼠，中间放置30 cm水模滤过射线，剂量率为11.14 mGy/min，总剂量为75 mGy，均为一次性全身照射.

　　1.2.3荷瘤鼠照射及化疗情况接种肿瘤后第8日，用游标卡尺测量肿瘤水平方向最大长径a(cm)及垂直方向最大横径b(cm)，各重复两次，取平均值，舍弃肿瘤过大（ab＞1.5 cm2）或过小（ab＜0.4 cm2)的小鼠，按下列公式肿瘤平均体积：V＝(1/2)ab2. 比较无差异后，对LDR组、LDR+CTX组小鼠进行低剂量全身照射. 30 h后（第9 日）对CTX组和LDR+CTX组小鼠腹腔注射CTX3.0 mg；第11～12日重复上述低剂量照射和化疗一次 . 第13日处死所有小鼠.

　　1.2.4标本采集眼眶采血：固定小鼠，稍用力将头下压使眼球外突，用眼科镊子将眼球摘除，将血滴入EDTA抗凝管中，立即混匀，置4℃保存. 3500 r/min离心10 min，收集血浆用于肝功等指标的检测. 取肝脏：将取血后的小鼠脱颈椎处死，迅速取出肝脏，于4℃条件下制备成100 g/L的肝组织匀浆，3500 r/min离心10 min，取上清-20℃保存备用，1 wk内测定超氧化物歧化酶（SOD），丙二醛（MDA）及谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPX).

　　统计学处理: 采用SPSS11.5 for windows统计软件包中的单因素方差分析法对结果进行统计分析，组间比较采用两两比较的q检验.

　　2结果

　　各组肝组织MDA含量及SOD, GSHPX活性(表1)和血浆丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性及蛋白含量均有一定差异（表2）.

　　表1各组肝组织氧化和抗氧化指标的比较（略）

　　表2各组血浆ALT活性及蛋白含量的比较（略）

　　3讨论

　　CTX应用于临床可致肝损伤，表现为血清转氨酶、胆红素升高等. 药物诱导的肝脏损伤机制可能与氧化应激有关［1］. 倪秀雄等［2］的研究显示，S180荷瘤小鼠经小剂量重复腹腔注射环磷酰胺后，肝组织抗氧化防御系统的抗氧化功能不同程度下降，肝组织MDA含量升高；病理检查也发现肝细胞点状及小灶性坏死，均提示氧化应激在环磷酰胺致肝损伤中的作用. 本实验结果与上述研究结果基本一致. 若在化疗前给予低剂量照射则显著降低化疗所致的MDA含量的增加（P<0.01），表明低剂量预先照射可减轻大剂量环磷酰胺化疗所致氧化应激对肝组织的损伤作用，具有一定的保护作用.

　　CTX腹腔内连续给药可抑制小鼠组织或血液中GSH, GSHPX, SOD及过氧化氢酶的水平［3］. 本实验结果显示在大剂量化疗前给予低剂量照射则可显著增加化疗所致的GSHPX, SOD活性的下降(P<0.05). 结果说明低剂量预先照射可诱导机体抗氧化酶系统，改善大剂量CTX化疗所致的抗氧化酶活性下降，促进自由基的清除，从而减少化疗的副作用. 本实验前期研究结果表明［4］，小鼠CTX化疗后体内自由基增多，SOD防御系统破坏，红细胞SOD活性下降；若预先低剂量全身照射，6 h后腹腔注射CTX,则红细胞SOD活性回升，表现出明显的适应性反应.  肝功能  90％以上的血清总蛋白和全部的血清白蛋白由肝脏合成，因此血清总蛋白和白蛋白检测是反映肝脏功能的重要指标. 本实验从侧面说明机体荷瘤及大剂量化疗均可在一定程度上影响肝功能，加用低剂量辐射可能对肝脏蛋白合成功能起到一定的改善作用. 许多化学物质包括CTX具有一定的肝毒性，而低剂量预先照射可使这种毒性作用得到缓解. 腹腔内注射Fe3+NTA可致血液中肝细胞酶，如乳酸脱氢酶(LDH), ALT及AST活性于12 h达高峰；若预先给予低剂量X射线全身照射则可抑制这些酶活性的短暂升高同时显著增加SOD活性［5］. 本实验研究结果也显示，与空白对照组相比，荷瘤对照组及荷瘤CTX化疗组血浆ALT活性均有升高趋势，但差别无统计学意义(P>0.05)；荷瘤低剂量照射组与荷瘤对照组相比，荷瘤低剂量照射联合化疗组与荷瘤CTX化疗组相比，其血浆ALT活性均有下降趋势，但差别亦无统计学意义(P>0.05).

　　【】

　　［1］Lear L, Nation RL, Stupans I. Effects of cyclophosphamide and adriamycin on rat hepatic microsomal glucuronidation and lipid peroxidation［J］. Biochem Pharmacol, 1992,44(4):747-753.

　　［2］倪秀雄, 姚琦, 林秀珍, 等. 环磷酰胺致S180荷瘤小鼠肝损伤机制的实验研究［J］. 福建医药杂志. 2004,26(2):93-94.

　　［3］Rekha PS, Kuttan G, Kuttan R. Effect of brahma rasayana on antioxidant systems and cytokine levels in mice during cyclophosphamide administration［J］. J Exp Clin Cancer Res, 2001,20(2):219-223.

　　［4］卢彦达, 殷亮, 于洪升, 等. 低剂量辐射诱导小鼠红细胞免疫及2, 3DPG, SOD适应性反应［J］. 中华放射医学与防护杂志, 2002, 22(1): 36-37.

　　［5］Yamaoka K, Nomura T, Iriyama K, et al. Inhibitory effects of prior low dose Xray irradiation on Fe(3+)NTAinduced hepatopathy in rats［J］. Physiol Chem Phys Med NMR, 1998,30(1):15-23.