肤敏膏促进皮肤创面愈合的实验研究

【摘要】  　　目的　探讨中药复方肤敏膏促进皮肤创面愈合的作用及机制。 方法以兔背部皮肤全层切除伤为模型，于术后切取创面皮肤及组织制成切片，计数巨噬细胞、成纤维细胞；测定肉芽组织厚度；测定皮肤中羟脯氨酸含量；记录创面愈合率、创面愈合时间。结果肤敏膏可以促进创面巨噬细胞、成纤维细胞的增殖（P<0.01）；增加创面羟脯氨酸含量（P<0.01）；促进肉芽组织生长（P<0.05）；提高创面愈合率（P<0.05），缩短愈合时间（P<0.05）。结论肤敏膏具有促进皮肤创面愈合的作用，其机制可能包括促进组织修复细胞和炎性细胞的增殖,促进肉芽组织生长。

【关键词】  中药复方；肤敏膏；皮肤损伤； 愈合

　　AbstractObjective To investigate the effect and mechanism of compound Preparation of TCM Fumin Gream on skin wound. MethodsThe back of rabbits was made sterilized wound compared with taking knife wound as model. Make the skin and tissue of wound into sections, then count the number of prosthetic and inflammatory cells and calculate the thickness of granulation tissue. Measure the amount of hydroxyproline. Take down the healing time and the healing ratio of wound. ResultsFumin cream could promote the proliferation of macrophage and fibroblastic cells, elevate healing ratio and decurtate the healing time. ConclusionFumin cream can promote skin wound healing obviously. The mechanisms maybe related to preserving the activity of Prosthetic cells and inflammatory cells, facilitating the growth of granulation tissue.

　　Key wordsCompound preparation of TCM,   Fumin cream;   Skin lesion;  Agglutination
   
　　中药复方肤敏膏系云南省名中医李庆生教授在长期临床实践中出的过敏性皮肤病的有效验方,由苦参、防风、莲子等组成。据临床观察，肤敏膏对多种皮肤损伤的修复有突出作用，其剂型为膏剂可供患者内服外用，促进损伤的修复，也为中药复方在皮肤创伤修复领域的运用提供了。由此，我们对肤敏膏促进皮肤创面愈合作用进行了动物实验观察。现报道如下。

　　1  器材

　　1.1  动物

　　普通级实验兔，1.8～2.5 kg，雌雄各半，动物许可证号：SCXK（滇 2005－0007）。

　　1.2 药品与试剂

　　肤敏膏由云南省药物研究所提供。重组人表皮细胞生长因子（rhEGF）：南海朗肽生物制药有限公司分装，批号050425；康复新液，湖南中南科伦药业有限公司产品，批号20050325；羟辅氨酸、考马斯亮兰测定试剂盒，由南京建成生物工程研究所提供，批号20050812，20050806.

　　1.3 仪器

　　紫外分光光度计，UV2000型，尤尼柯（上海）仪器有限公司产品；DY89—Ⅱ型电动匀浆机，宁波新芝生物科技有限公司产品；XSP－18A型生物显微镜，江南光学仪器厂生产；Motic 数码显微镜B1配合Motic Images Plus 2.0ML 软件。

　　1.4  数据处理 

　　计量资料以±s表示；多组间样本均数比较用方差分析，方差不齐者做相应变换。实验数据用SPSS11.0统计分析软件处理。

　　2  方法与结果

　　2.1  方法

　　2.1.1  动物的处理［1，2］

　　于实验前1天，将兔背部脱毛，暴露面积约为12 cm×13 cm。在脊柱旁开1.5 cm处，避开前面肩胛骨和后面髂骨，切除全层皮肤至浅筋膜组织，由前至后做4个直径约为2 cm的创面。术后彻底止血并用凡士林油纱覆盖，无菌纱布包扎，宽绷带固定。将动物随机分成5组，单笼饲养。

　　2.1.2 用药方法
 
　　按照人临床给药量的1，3倍和动物体表面积折算， 肤敏膏设为高、低剂量组，灌胃给药并用灭菌后的药膏外涂伤口，1次/d至创面愈合；阳性对照组1 外涂1 000 u/ml rhEGF溶液（将rhEGF冻干粉溶于0.9%无菌生理盐水中）10μg/创面，1次/d至创面愈合；阳性对照组2灌胃并外喷康复新液1次/d；模型组灌胃及外涂灭菌生理盐水。

　　2.1.3  指标测定［3～5］

　　术后3，5，7，10 d切取皮肤全层及皮下组织，制成石蜡切片，染色，光镜下观察并计数巨噬细胞数、成纤维细胞数，测量肉芽组织厚度；5，7，10，14 d测定创面皮肤组织中的羟脯氨酸含量；4，6，10，14 d创面愈合率（数据均为测量二维直径所得）；最后记录创面愈合时间。

　　2.2  结果见表1～6。表1  对成纤维细胞数量的影响(略)表2  对巨噬细胞数量的影响(略)表3  对肉芽组织厚度的影响(略)表4  对组织羟脯氨酸含量的影响(略)表5  对创面愈合率的影响(略)表6  对兔背部皮肤全层缺损伤创面愈合时间的影响(略)

    从表1可以看出：肤敏膏高、低剂量组均可显著促进成纤维细胞的增殖，且两组在第7 d和第10 d差异有显著性意义（P<0.05）。用药组、阳性对照组较模型组提前3 d达到成纤维细胞增生的高峰。

    从表2可以看出：肤敏膏高、低剂量组均可显著促进巨噬细胞的增殖，且两组除第5 d外（P<0.05），其余差异均无显著性意义。用药组与阳性对照组1之间的差距从第3 d开始扩大,第5 d达到高峰，以后又逐渐缩小。

    从表3可以看出，肤敏膏高、低剂量组均可显著促进肉芽组织的生长，且两组在7 d，10 d差异有显著性意义（P<0.05）。用药组与模型组之间的差距从第3天开始扩大，到第7天有所回落，以后又继续增大。

    从表4可以看出，肤敏膏高、低剂量组均能显著提高组织羟脯氨酸含量,且两组差异有非常显著性意义（P<0.01）。

    肤敏膏高、低剂量组均能显著提高创面愈合率，两组除在第1天外其余差异均无显著性意义。各组与模型组的差距从第4天开始扩大，以后更加明显。

    肤敏膏高、低剂量组均能显著加快创面愈合时间，两组差异无显著性意义。肤敏膏组愈合时间比模型对照组提前4～6 d。

　　3  讨论

    参与皮肤伤口愈合的细胞主要包括各种炎性细胞和组织修复细胞，前者包括中性粒细胞、巨噬细胞、肥大细胞等；后者主要包括血管内皮细胞、表皮细胞和成纤维细胞［6］。成纤维细胞是构成肉芽组织的主要成分之一，在创伤愈合中起着十分重要的作用［7］。巨噬细胞是创伤愈合过程中又一重要的细胞成分，局部巨噬细胞的多寡决定着愈合速度的快慢，在创伤愈合过程中巨噬细胞一方面能清除创面局部受损伤细胞、坏死组织和病原体；另一方面它是通过分泌多种细胞因子来调控创伤修复［8］。通过实验，证明肤敏膏具有较强的促进巨噬细胞、成纤维细胞增殖的作用。
   
　　肉芽组织具有抗感染、保护创面、机化血凝块、清除坏死组织和异物，添补组织缺损的作用。观察肉芽组织的生长主要根据观察损伤部位胶原沉积情况以及肉芽厚度来评价修复效果。胶原是创面组织中的主要基质成分，创面中胶原的含量不仅可以显示愈合的速度，也可以反映愈合的质量。由于羟辅氨酸在胶原蛋白中占13.4%，在弹性蛋白中占极少量，在其它蛋白中均不存在，故创面组织中将羟辅氨酸含量可以直接反映创面胶原成分的含量［9］。通过实验证明，肤敏膏可以显著提高损伤组织羟脯氨酸含量以及促进肉芽组织的生长。

    创面愈合率、创面愈合时间是最直接而有效的创面愈合评价指标，实验结果表明肤敏膏能显著提高创面愈合率、加快创面愈合时间，且愈合后瘢痕明显小于模型组，接近正常皮肤，促进愈合效果较为理想。

【】
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　　［3］毕国华.碱性成纤维细胞生长因子促进皮肤创面愈合的动物实验研究［J］.黑龙江医学，2003，27（4）：273.

　　［4］陈玉林,黄 康.创面愈合的评价指标［J］.中国临床康复，2002,6(8)：1080.

　　［5］李斌.祛瘀生肌法 对皮肤实验性创面修复的组织形态变化的影响［J］.中医药学刊,2003,21(12)：2016.

　　［6］屈纪富,程天民,郝 利.参与皮肤伤口愈合的细胞及其作用的研究进展［J］.康复，2001，5(12)：74.

　　［7］Cook H,Davies KJ,Hurding KG, et al. Defective extra cellular matrix reorganization by chronic wound fibroblasts is associated with alterations in TIMP-1,TIMP-2,and MMP-2 activity［J］.InvestDermatol,2000,115(2)：225.

　　［8］Jude EB, Boulton AJ, Ferguson MW, et al. The role of nitric oxide syntheses anginas in the Pathogenesis of diabetic foot ulcers: Possible modulatory effects by transforming growth factor beta 1［J］.Diabetologia ,1999,42(6)：748.

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