复方黄连降糖片对2型糖尿病大鼠血糖影响的量效及时效关系研究
作者：刘小美，宋菊敏 刘丽琼，舒适，吴中华，施建铃
【摘要】 目的 探讨复方黄连降糖片对2型糖尿病大鼠血糖影响的量-效及时-效关系。方法对小剂量链脲佐菌素注射加高脂饮食诱导的2型糖尿病大鼠，给予复方黄连降糖片小、中、大3个剂量，治疗2，4周和8周时，测定空腹血糖和糖负荷2 h血糖。8周处死时取血清测定血脂四项。结果①治疗2周时，3个剂量组的药物对空腹血糖和2 h血糖均未见明显影响，治疗4周时只有中剂量组两者都有明显降低（均为P<0.05）。到治疗8周时，3个剂量组的空腹血糖均显著降低（均为P<0.001），但2 h血糖只有中剂量组的明显降低（P<0.05）。②8周时，中剂量组对胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)和甘油三酯(TG)都有明显的降低作用（分别为P<0.05，P<0.001，P<0.01），小剂量组只对TG有明显下降作用（P<0.05），大剂量组只对LDL和TG有显著下降作用（均为P<0.01）。结论中剂量治疗8周较其他给药方法作用强。
【关键词】 糖尿病；复方黄连降糖片；量-效关系；时-效关系；大鼠
Abstract：ObjectiveTo research the dose-effect and time-effect relationship of Fufang Huanglian Jiangtangpian(FFHLJTP) on blood glucose in type 2 diabetic rats.MethodsThree doses of FFHLJTP (little-dose,mid-dose and big-dose) groups were given to type 2 diabetic rats. The fasting blood glucose(FBG) and two hour's glucose were measured three times at the second, fourth and the eighth week after therapy. The blood-fat was tested in the eighth week.Results①The FBG and two hours glucose were not significantly decreased in the three groups with FFHLJTP treatment for two weeks.Both FBG and two hours glucose were obviously decreased in mid-dose group for four weeks(P<0.05).For eight weeks,the FBG was significantly decreased in three groups(all P<0.001),but only two hours glucose decreased in mid-dose group(P<0.05).②For eight weeks,total cholesterol(TC),low density lipoprotein cholesterol(LDL), triglyeride(TG) were all decreased after treatment with mid-dose(P<0.05，P<0.001，P<0.01). TG was decreased only in little-dose(p<0.05).LDL and TG were decreased in big-dose (P<0.01). ConclusionThe method of therapy for eight weeks with mid-dose is better than the others.
Key words:Diabetes mellitus; Fufang Huanglian Jiangtangpian(FFHLJTP); Dose-effect relationship; Time-effect relationship; Rat
糖尿病是一种慢性终身性疾病,一旦确诊需要终身治疗。但在对糖尿病进行临床或实验研究过程中，由于人力、财力、物力、时间等因素的存在，常根据糖尿病自身的特点，人为地确定一个治疗周期，来观察某种药物对糖尿病的防治作用。那么，这个周期确定为多少才尽可能准确地反映研究药物对糖尿病的影响呢？对此周期的确定报道不尽相同，常见的有：1个月为1个疗程，治疗1～3个月；亦有不分疗程，连续治疗3～12周等。本研究旨在探讨复方黄连降糖片对2型糖尿病大鼠血糖影响的量-效及时-效关系。
1 器材
1.1 动物选用12周龄清洁级健康雌性Wistar大鼠90只，由上海复旦大学医学院实验动物中心提供，体重（250±20）g。
1.2 药品及其配制
链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）购自美国Sigma公司，临用前以0.1 mol/L浓度，pH 4.4柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液配制成2%STZ溶液。
高脂饲料由基础饲料55%，猪油16%，蛋黄粉2%，绵白糖27%组成，总热量为19.93 kJ/g，基础饲料总热量为16.20 kJ/g。
复方黄连降糖片由大黄、黄连、肉桂等中药煎液而成。
盐酸二甲双胍片（商品名美迪康，深圳市中联制药有限公司），用蒸馏水配成悬浊液。
.3 试剂及仪器葡萄糖试剂盒由上海生物制品研究所提供，血脂四项测定试剂盒由浙江东瓯生物工程有限公司提供。葡萄糖由北京鼎国生物技术有限责任公司提供。
2 方法
2.1 造模及分组给药Wistar大鼠共90只，适应性饲养1周后，设正常组15只，其余按28 mg/kg体重腹腔注射2%STZ溶液。造模第14天，测定大鼠空腹血糖及糖负荷2 h血糖，以空腹血糖低于10 mmol/L并糖耐量异常者为造模成功大鼠，根据空腹血糖及2 h血糖将模型大鼠随机分为模型组、复方黄连降糖片小、中、大剂量组及西药组（二甲双胍），每组13只，均给予高脂饲料喂养。给药方法见表1。表1 分组后各剂大鼠给药情况（略）
2.2 测定指标及方法
2.2.1 空腹血糖和2 h血糖血糖浓度用葡萄糖氧化酶法测定，分别于治疗2，4，8周时，大鼠禁食10 h后称重，尾静脉取血25μl测定空腹血糖，然后腹腔注射25%葡萄糖液（按2 g/kg），测定糖负荷2 h血糖。
2.2.2 血脂四项取全血3 500 r/min离心沉淀15 min，分离血清，分别测定TC，TG，LDL-C，HDL-C。TC用胆固醇酯酶-胆固醇氧化酶-过氧化物酶比色法(CHOD-PAP法)，TG用甘油激酶-甘油磷酸氧化酶-过氧化物酶比色法(GPO-PAP法)，LDL-C用聚乙烯硫酸沉淀法（PVS），HDL-C用选择性沉淀法（PTA-Mg2＋法）。
2.3 统计学处理所有数据均使用SPSS11.5统计软件进行方差分析，统计结果均用±s表示。
3 结果
3.1 各组大鼠空腹血糖的量效和时效变化4周和8周时模型组的空腹血糖显著高于正常组（均为P<0.001），2周时模型组虽高于正常组，但无显著性差异。与模型组比较，治疗2周时各用药组的空腹血糖均未见下降，治疗4周时，中剂量组血糖明显降低（P<0.05）；到治疗8周时，各治疗组空腹血糖均有非常显著的降低（均P<0.001）。结果见表2。表2 各组大鼠空腹血糖的量效和时效变化表（略）
3.2 各组大鼠2 h血糖的量效和时效变化治疗2周、4周、8周，模型组的2 h血糖均显著高于正常组（分别为P<0.01，P<0.001，P<0.001）。与模型组比较，在治疗2周，4周，8周时小、大剂量组的2 h血糖均无显著性变化，中剂量组在治疗4周和8周2 h血糖显著降低（均P<0.05）。结果见表3。表3 各组大鼠2 h血糖的量效和时效变化（略）
3.3 各组大鼠血脂四项的变化情况与正常组比较，模型组血清TC，LDL-C和TG含量有明显的升高（分别为P<0.001，P<0.001，P<0.01）；HDL-C有明显降低（P<0.001）。治疗后，与模型组比较，中剂量组对TC、LDL和TG都有明显的降低作用（分别为P<0.05，P<0.001，P<0.01），小剂量组只对TG有明显下降作用（P<0.05），大剂量组只对LDL和TG有显著下降作用（均为P<0.01）；西药除对TG未见显著影响外，对其他三项均有明显影响作用。结果见表4。表4 各组大鼠血脂四项变化(略)
4 讨论
复方黄连降糖片由黄连、大黄、肉桂组成，主要治疗糖尿病以热盛为主的初期，以清热泻火为主，兼有活血化淤之功效。方中黄连为君，大黄为臣，肉桂反佐。临床研究证明其降血糖作用显著，显效率53.5%，有效率88.4%，自身治疗前后比较，P<0.01［1］。
黄连入心胃二经，主泻降、清胃火，而且根据近年临床和实验报道［2～4］，黄连及其主要成分黄连素（小檗碱）具有确切的降血糖、调血脂作用。而方中的大黄是具有降血糖作用的65种中药之一［5］。临床实验证明服用大黄根纤维能有效降低高胆固醇患者的血清TC，尤其是LDL-C水平［6］。方中以少量肉桂为佐使药，一方面用其温热制大黄之苦寒，防止苦寒伤阴；另一方面，用肉桂入肝肾经，引火归元，使阴平阳秘，达到阴阳平衡，且中药研究证明，肉桂挥发油可显著降低糖尿病小鼠的血糖，为肉桂治疗糖尿病提供了药依据［7］。另有研究发现，每天服用不同剂量的肉桂能降低2型糖尿病患者血糖和TG、LDL-C及TC，提示2型糖尿病患者每天摄入含肉桂的饮食可以降低发生糖尿病和心血管疾病的几率［8］。
一种好的药物只有以合适剂量、合适周期作用于机体才能发挥它的最大作用。实验中发现，治疗2周时空腹血糖和2 h血糖在3个剂量组均未见明显下降，治疗4周时只有中剂量组上述两指标都有明显降低。到治疗8周时，虽然3个剂量组的空腹血糖均显著降低，但只有中剂量组的2 h血糖明显降低。另外检测8周时各组大鼠的血脂四项也发现，中剂量的复方对血脂的调节作用优于小、大剂量组。这些结果表明，中剂量的复方黄连降糖片治疗8周时，对空腹血糖、2 h血糖和血脂都已经表现出显著的调节作用，这为本药的进一步研究和开发，进行临床实验奠定了良好的基础。复方黄连降糖片于几年前已成为我校成果转化中心的项目之一，由于种种原因，进展缓慢，最主要原因在于糖尿病人需长期服药，此复方中的大黄含有致泻成分蒽醌类物质，不适宜长期服用。现设想通过大黄工艺改变等方法来提高此药的可行性和科技含量并加快其转化步伐，目前成果转化中心已经重新启动此项目，准备由学校组团，在原有组方中去掉大黄中的蒽醌类物质后进行新药研究，此次关于复方的量效和时效关系研究为新药开发时选择药物的剂量和用药时间奠定了基础。
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