复方癌痛平胶囊的提取工艺研究

                        作者：张裕强，朱华旭，郭立玮 

【摘要】  　　目的　优选中药临床经验方癌痛平胶囊的最佳提取精制工艺。方法采用正交实验法L9（34）分别以胡椒碱和重楼总皂苷的转移率作为考察指标，优选癌痛平胶囊的制备过程中提取工艺。结果最佳醇提取工艺为70%的乙醇回流提取两次，2 h/次，第1次加7倍量，第2次加5倍量；最佳水提取工艺为煎煮2次，2 h/次，第1次加11倍量，第2次加10倍量。结论该制备工艺稳定、合理、可行。

【关键词】  复方癌痛平胶囊； 正交实验法； 胡椒碱； 重楼总皂苷

　　Abstract:ObjectiveTo investigate the process of the optimal extraction for Compound Aitongping Capsules. Methods Factors for the ethanol extraction and water extraction were studied by orthogonal experiment designs with transision efficiency of Piperine and Total polyphyllosides as index respectively. ResultsThe optimal ethanol extraction condition was adding 12 times amount of 70% alcohol and 2 hours for each time, then adding seven volume of 70% alcohol at first time and five volume of 70% alcohol at second time; the optimal water extraction condition was adding 21 times amount of water and 2 hours for each time, then adding eleven folds of water at first time and ten folds of water at second time. ConclusionThe method is stable, reasonable and feasible.

　　Key words:Aitongping capsules；  Orthogonal experiment;  Piperine；  Total polyphyllosides

    复方癌痛平胶囊为癌性疼痛的中药新制剂，由蚤休、荜茇和鼠妇等药物组成，具有解毒祛淤、化痰通络等功效。临床主要用于治疗各类癌性疼痛，总有效率为90%，疗效肯定，已为临床和药效学实验研究所证实。我们对原方采用醇提、水提等办法，力求保持了原剂型水煎的特色，并经精制除杂、在提取物中加适量辅料等工艺过程，精制成口服胶囊。具体实验内容分为两大部分：①乙醇提取工艺的研究；方中主药荜茇，具有温中散寒、下气止痛等功效。据相关报道，荜茇果实含胡椒碱，棕榈酸，四氢胡椒酸，挥发油等成分，其主要生理活性成分为胡椒碱［1］。另据文献报道，荜茇中胡椒碱为生物碱类化合物，几不溶于水或石油醚，易溶于氯仿、乙醇或乙醚，可溶于苯或醋酸［2］，因此我们选择乙醇对包括荜茇在内的几味药进行了提取预试，并应用高效液相色谱法对提取样品中的胡椒碱进行了测定［3］。在确定胡椒碱转移率合理的基础上，进一步采用正交实验，优选最佳醇提取工艺［4～6］。②水提取工艺的研究；方中君药蚤休（重楼），具有清热解毒，消肿止痛等功效。据相关文献报道，蚤休（重楼）主要药效成分为重楼总皂苷［7］。另据文献报道，蚤休中重楼皂苷一般可溶于水，易溶于热水、含水稀醇和热甲醇，几不溶或难溶于乙醚、苯等极性小的有机溶剂［8］，因此我们选择水对包括蚤休在内的几味药进行了提取预试，并应用紫外分光光度法对提取样品中的重楼总皂苷进行了测定［9］。在确定重楼总皂苷转移率合理的基础上，进一步采用正交实验，优选最佳水提取工艺。

　　1  仪器与材料

　　1.1  仪器

　　美国Waters 515双泵/2487检测器高效液相色谱仪，Rheodyne进样器。色谱柱：反相C18柱Hedera ODS-2，编号C1806091411 （院大连化学物理研究所制）。754型紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）。

　　1.2  药材

　　购于安徽省亳州市药材公司，经南京中医药大学中药鉴定教研室吴启南教授鉴定。荜茇为胡椒科植物Piper longum L.的干燥成熟果穗；蚤休（重楼）为百合科植物云南重楼Paris polyphylla Smith var. yunnanensis(Franch.) Hand.-Mazz.或七叶一枝花Paris polyphylla Smith var.chinensis(Franch.) Hara的干燥根茎。

　　1.3  对照品胡椒碱购自中国药品生物制品检定所，批号为0775-200203，供含量测定用。重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ购自中国药品生物制品检定所，批号分别为111590-200402、11591-200402，供含量测定用。

　　1.4  试剂甲醇为色谱纯，水为二次重蒸水(自制)，其他试剂均为分析纯，购自南京鹏程化学玻璃仪器有限公司。

　　2  方法

　　2.1  醇提取工艺 

　　为了优化制备工艺，根据醇提部分主要影响因素，确定实验因素和水平。

    根据表1，选择L9(34)表正交进行实验。表1  醇提工艺因素水平（略）

　　2.1.1  胡椒碱转移率的测定色谱条件 

　　流动相：甲醇-水（77:23），检测波长343 nm，流速1.0 ml·min-1，灵敏度1.0 AUFS，柱温30℃。

　　2.1.2  对照品溶液的制备 

　　精密称取胡椒碱对照品，加无水乙醇制成每毫升含100 μg的溶液，即得。

　　2.1.3  荜茇药材溶液的制备 

　　本品中粉0.25 g，精密称定，置于100 ml棕色容量瓶，加无水乙醇80 ml，超声30 min，放置至室温后，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过。

　　2.1.4  供试品溶液的制备 

　　依照癌痛平胶囊方中醇提药味处方量，称取荜茇等药材160 g，共9份，按照表2进行正交实验，得到9份乙醇提取液，静置，取上清液，离心15 min，转速12 000 r/min。吸取离心后的上清液1 ml，置于5 ml棕色容量瓶中，用流动相溶解稀释至刻度，作为供试品溶液。表2  醇提工艺正交设计表（略）

　　2.2  水提取工艺为了优化制备工艺，根据水提部分主要影响因素，确定实验因素和水平。

    根据表3，选择L9（34）表正交实验。表3  水提工艺因素水平（略）

　　2.2.1  重楼总皂苷转移率的测定对照品溶液的制备

　　精密称取重楼皂苷Ⅰ，Ⅱ对照品，分别加甲醇制成每毫升各含0.2 mg的溶液，即得。

　　2.2.2  蚤休药材溶液的制备 

　　称取单味蚤休药材50 g，加21倍量水，一次煎煮3 h，测体积，留样。量取离心过的药材水提液40 ml，用水饱和的正丁醇液萃取3次，30 ml/次，收集正丁醇液，蒸干，用95%乙醇定容于25 ml量瓶中。精密吸取0.2 ml，置具塞试管中，烘干，加入5%香草醛冰醋酸和高氯酸1 ml(1:4)，摇匀，密塞，85℃水浴20 min，冰浴5 min后，加入5 ml冰醋酸。放置110 min后，于465 nm下测定吸光度。

　　2.2.3  阴性溶液的制备 

　　称取除蚤休以外的其他各味药各50 g，加21倍量的水，一次煎煮3 h，测体积，留样。量取离心过的阴性水提液40 ml，按药材溶液制备方法同法制得，测定吸光度。

　　2.2.4  供试品溶液的制备 

　　依照癌痛平胶囊方中水提药味处方量，称取蚤休等药材200 g，共9份，按照表4进行正交实验，得到9份水提液，离心，静置，量取40 ml，按药材溶液制备方法同法制得，测定吸光度。表4  水提工艺正交设计（略）

　　3  结果

　　3.1  醇提工艺正交实验结果见表5，方差分析结果见表6。表5  醇提工艺正交实验数据及其分析结果（略）表6  醇提工艺方差分析结果（略）

    从表6的方差分析结果可知，A因素是显著性影响因素，B，C因素影响不是很明显，由表5的直观分析可以看出，K3a＞K2a＞K1a,故因素A选择水平3，即乙醇浓度为70%；K3b＞K2b＞K1b,故因素B选择水平3，即乙醇用量为12倍，第1次加7倍量，第2次加5倍量；K3c＞K2c＞K1c,因素C选择水平3，即提取4 h,第1次2.0 h,第2次2.0 h。
   
　　综上所述，荜茇等几味药材乙醇提取的最佳工艺为A3B3C3，即药材加70%的乙醇回流提取两次，2 h/次，第1次加7倍量，第2次加5倍量，滤过，滤液合并。

　　3.2  水提工艺正交实验结果见表7，方差分析结果见表8。表7  水提工艺正交实验数据及其计算分析结果（略）表8  水提工艺方差分析结果（略）

    从表8的方差分析结果可知，B因素是显著性影响因素，A、C因素影响不是很明显，由表7的直观分析可以看出，K3a＞K2a＞K1a,故因素A选择水平3，即加水量为21倍；K3b＞K2b＞K1b,故因素B选择水平3，即煎煮时间为4 h；K2c＞K3c＞K1c,因素C选择水平2，即煎煮2次。

    综上所述，蚤休等几味药材水提取的最佳工艺为A3B3C2，即药材煎煮2次，2 h/次，第1次加11倍量，第2次加10倍量，滤过，滤液合并。

　　3.3  验证实验按照上述最佳乙醇提取工艺，平行3份，胡椒碱转移率分别为90.87%，91.32%，91.44%，有效成分提取较完全；按照上述最佳水提取工艺，平行3份，重楼总皂苷转移率分别为90.54%，90.60%，90.85%，有效成分提取较完全，说明本研究所确定的醇提和水提工艺合理、可行。

　　4  讨论

    荜茇中胡椒碱为生物碱类化合物，几不溶于水或石油醚，易溶于氯仿、乙醇或乙醚，可溶于苯或醋酸。预实验中发现，以水作为溶剂，胡椒碱几乎不能提出。根据预试验和正交实验结果，确立了复方癌痛平胶囊中荜茇等主要药味的醇提工艺。

    蚤休中重楼皂苷一般可溶于水，易溶于热水、含水稀醇和热甲醇，几不溶或难溶于乙醚、苯等极性小的有机溶剂。预试验中发现，以水作为溶剂，重楼皂苷提取较完全。根据预试验和正交实验结果，确立了复方癌痛平胶囊中蚤休（重楼）等主要药味的水提工艺。

    复方中水提取部分有一步骤为醇沉去杂，该醇沉工艺为水提取液浓缩至每毫升含1.5 g生药，醇沉至乙醇浓度为60%，静止18 h。

【】
  　　［1］国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草［S］.上海:上海科技出版社，1999（3）：2035.

　　［2］北京医学院，北京中医学院.中草药成分化学［M］.北京:人民卫生出版社，1980：115.

　　［3］国家药典委员会.药典(Ⅰ部)［S］.北京：化学出版社，2005：163.

　　［4］张春华，周永治，刘延福.数理统计方法［S］.济南：山东大学出版社，1995：151.

　　［5］汤明辉，寇俊萍，朱丹妮，等.正交设计重复试验法优选当归芍药散的提取工艺［J］.中国中药杂志，2000，25(11)：668.

　　［6］吕圭源，王一涛.中药新产品开发学［M］.北京：人民卫生出版社，1997：64.

　　［7］年四辉，王 扣，罗 燕.树脂技术用于重楼总皂苷纯化工艺的研究［J］.云南中医中药杂志，2006，27（1）：44.

　　［8］北京医学院，北京中医学院.中草药成分化学［M］.北京：人民卫生出版社，1980：444.

　　［9］唐军.比色法测定黄芪中黄芪总皂苷含量［J］.安徽中医学院学报，2004，23（5）：37.