巴罗沙星片与胶囊人体生物利用度研究

                    作者：霍强 张志涛  石庆平  熊辉 蒋志文

【摘要】  目的 比较巴罗沙星胶囊剂与片剂在健康人体内的生物等效性。方法 20名健康志愿者采用双周期交叉试验，单剂量空腹口服巴罗沙星胶囊和巴罗沙星片各200mg，HPLC法测定其血清中巴罗沙星浓度，血药浓度?时间数据经DAS2.0统计软件处理，主要药动学参数，并进行两种制剂的生物等效性评价。结果 巴罗沙星胶囊和巴罗沙星片的主要药动学参数分别为：t1/2 (5.666±1.085)和(7.020±2.658)h、cmax(2.912±0.848)和(2.637±0.780)μg/ml、tmax (1.238±0.631)和(1.400±0.615)h、AUC0～48 (18.987±4.284)和(20.737±9.681)(μg·h)/ml。巴罗沙星胶囊的相对生物利用度为(105.30±43.47)%。结论 巴罗沙星片剂与胶囊剂具有生物等效性。

【关键词】  巴罗沙星片剂； 胶囊剂； HPLC； 生物等效性

    ABSTRACT  Objective  To investigate the bioequivalence of balofloxacin capsules and tablets in Chinese healthy volunteers.  Methods  Twenty volunteers were randomly divided into two groups (test and contral), with double cross over design. The concentration of balofloxacin in serum was determined by HPLC and pharmacokinetic parameters were calculated with DAS2.0 practical pharmacokinetics program.  Results  The pharmaco kinetic parameters of balofloxacin capsules and tablets were as follows: t1/2 (5.666±1.085) and (7.020±2.658)h, cmax (2.912±0.848) and (2.637±0.780)μg/ml, tmax (1.238±0.63) and (1.400±0.615)h, AUC0～48h (18.987±4.284) and (20.737±9.681) (μg·h)/ml. The relative bioavalibility of balofloxacin capsules was (105.30±43.47)%.  Conclusion  The result showed that the two preporations of balofloxacin were bioequivalent.

    KEY WORDS  Balofloxacin capsules;  HPLC;  Bioequivalence

    收稿日期：2007?04?02    修回日期：2007?08?03

    作者简介：霍强，男，生于1974年，硕士，讲师。研究方向：药物合成和药物动力学。    巴罗沙星(balofloxacin由日本中外制药与韩国Choongwac制药联合研究开发的新型广谱高效抗生素［1］。巴洛沙星对革兰阳性菌和革兰阴性菌具有广谱抗菌活性，尤其对金葡菌、肺炎球菌、肠球菌等革兰阳性菌的活性优于诺氟沙星、氧氟沙星和环丙沙星。巴洛沙星有较强的杀菌作用，其MBC与MIC相近,在体外具有较长时间的抗菌后效应［2］。巴罗沙星对细菌具有选择性抑制作用，体外抗菌活性是环丙沙星、氧氟沙星和洛美沙星的4～16倍［3］。该药国外虽已使用多年，但国内有关该药的人体药动学资料未见报道。本研究以20名健康志愿者，随机交叉口服巴洛沙星胶囊和巴洛沙星片，剂间间隔1周，剂量均为200mg，高效液相色谱法测定人血清中巴洛沙星浓度，将实验测得的浓度经DAS 2.0程序拟合处理，进行片剂与胶囊剂生物等效性检验，为临床用药提供。巴罗沙星化学结构见图1。

    1  材料与方法

    1.1  药品与试剂图1    巴罗沙星化学结构

    试验制剂  巴洛沙星胶囊，营口奥达制药有限公司，批号20050203，规格为每粒100mg。

    参比制剂  巴洛沙星片，营口奥达制药有限公司，批号2005020，规格每片100mg。

    巴洛沙星标准品(厂家提供，纯度99.0%)；洛美沙星(内标)，药品生物制品检定所，批号0142?9503。乙腈(TEDIA公司，色谱纯)；柠檬酸(上海东懿化学试剂公司，分析纯)、乙酸胺(南京化学试剂厂，分析纯)、三氯乙酸(天津市大茂化学仪器供应站，分析纯)；多蒸水自制；空白血清(蚌埠市中心血站提供)。

    1.2  仪器和HPLC条件

    LC?10Advp高效液相色谱仪、SPD?10Avp紫外检测器和LC?10ADVP输液泵为日本岛津公司产品；N2000色谱数据工作台软件由浙江大学智达信息工程有限公司生产；AT?130柱温箱为AUTO SCIENCE公司产品；TDZ5多管架自动平衡离心机由长沙湘仪离心机仪器有限公司生产；BT25S天平为Sartorius公司产品。色谱柱：菲罗门C18(250mm×4.6mm，4μm)，柱温40℃；流动相为乙腈∶50mmol柠檬酸∶1mol/ml乙酸胺(22∶77∶1)，流速1.0ml/min；检测波长295nm，灵敏度0.01AUFS；进样量20μl。

    1.3  样本处理［4，5］

    精密吸取血清0.5ml，加入洛美沙星内标溶液(20μg/ml)20μl，涡旋1min；加入100mg/ml的三氯乙酸提取液0.2ml，涡旋2min，12000r/min高速离心10min，取上清液20μl进样。

    1.4  血清标准曲线的建立

    取空白试管分别加入对照品溶液，用氮气吹干，再加入0.2ml空白血清，使其浓度分别为0.1、0.2、0.6、1.0、3.0、4.5和6.0μg/ml，按样品处理方法项下操作，记录巴罗沙星和内标峰面积。以巴罗沙星峰面积(Ai)与内标物峰面积(As)的比值(Ai/As)对浓度(X，μg/ml)进行线性回归，得回归方程。

    1.5  精密度与回收率的测定

    以空白血清配制高、中、低(0.2、1.0和4.5μg/ml)3个不同浓度的巴罗沙星标准系列，每一浓度进行5样本分析，按样本处理项下操作，计算相对回收率，日内、日间变异系数，评价方法的精密度。

    1.6  受试者选择

    本研究方案经安徽省肿瘤国家药品临床研究基地医学伦理委员会批准。20名健康志愿者，体重(65.1±5.01)kg；年龄(22.1±1.8)岁。试验前被告知所有与药物可能有关的不良反应后，自愿签署知情同意书。受试者均无药物过敏史，无肝、肾疾病史，精神状态良好，全面体格检查均正常(包括心电图、心率、血压、肝肾功能、胸透、血尿常规等)。受试者在受试前两周内未服过任何药物，从开始进入试验后直至试验结束，禁烟酒及任何饮料。

    1.7  试验设计

    20名健康志愿者随机分成2组，每组10例，采用单剂量双周期随机交叉试验设计，间隔期为1周；每周期给药剂量为200mg；服药前受试者禁食过夜(10h以上)，于次日早晨8时空腹服用药物，200ml温开水送服，分别于服药前(0h)、服药后0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、3.0、5.0、8.0、12.0、24.0、36.0和48.0h各采血3ml，置试管中，于-20℃储存待测。服药后2h可饮水，4h统一进标准饮食。在临床医生的监护下，观察受试者不良事件。受试者在服药后避免剧烈活动。

    1.8  数据处理

    根据所测巴罗沙星血药浓度?时间数据，利用DAS 2.0药动学程序，计算巴罗沙星参比制剂和试验制剂的主要药动学参数(cmax、tmax用实测值，AUC采用梯形法进行计算)，并进行方差分析、双单侧ｔ检验和(1～2a)置区间分析，评价两种制剂的生物等效性。

    2  结果

    2.1  方法的专属性

    本方法具有较好的特异性，空白人血清、标准品、内标及用药后血清在检测范围内无干扰物质，巴罗沙星的保留时间大约在10.1min左右，内标洛美沙星的保留时间大约在5.4min左右。

    2.2  线性范围及最低检测线

    巴罗沙星在0.1～6.0μg/ml范围内有良好的线性关系，预计可包括巴罗沙星在人体内的血药浓度，其线性回归方程为：

    Y=0.6184X＋0.1709(n=7，r=0.9991)

    最低定量浓度为0.1μg/ml(n=5，RSD%=13.8)。

    2.3  回收率与精密度

    血清样品低，中，高(0.2、1.0和4.5μg/ml)三个浓度的日内及日间RSD均<11%，低、中、高三个浓度的回收率在61.57%～82.77%(表1)。        表1        巴罗沙星的精密度与回收率(n=5)

    加入浓度

    (mg/L)日内(Ai/As)±sRSD (%)日间(Ai/As)±sRSD (%)回收率(%)±sRSD (%)0.20.2524±0.025710.170.304±0.0335  11.03〖〗75.24±3.855.121.00.8797±0.03363.820.9463±0.07197.6061.57±2.353.824.52.9173±0.14935.122.9256±0.08162.7982.77±8.4210.17

    2.4  血药浓度与时间曲线

    20名志愿者如期完成两周期的试验，均未见不良事件的发生。巴罗沙星血药浓度?时间数据见图2。

    2.5  药动学参数

    根据所测巴罗沙星血清浓度?时间数据，利用DAS2.0药动学程序主要药动学参数ｔ1/2、AUC0～48和AUC0～∞等。巴罗沙星体内过程符合一室开放模型，片剂较普通胶囊达峰时间晚(表2)。

    3  讨论

    (1)方法学研究  虽有HPLC?荧光法测定血浆巴罗沙星浓度的报道［6，7］，但国内目前未见HPLC?紫外法测定血浆巴罗沙星浓度的报道。本文根据巴罗沙星的结构及左氧氟沙星的检测方法［4，5］建立了HPLC?紫

    图2    20名受试者口服巴罗沙星受试制剂和参比制剂

    平均血药浓度时间曲线

    表2    20名受试者口服巴罗沙星片及巴罗沙星胶囊的

    药动学参数(±s，n=20)

    药动学参数    巴罗沙星片巴罗沙星胶囊  tmax (h)1.400±0.6151.238±0.631  cmax (μg/ml)2.637±0.7082.912±0.848  t1/2 (min)7.020±2.6585.666±1.085  AUC0～48 ［(μg·h)/ml］20.737±9.68118.987±4.284  AUC0～∞ ［(μg·h)/ml］22.719±10.08920.291±4.478  F (%)(105.30±43.47)%

    外法，在295nm波长处检测。样品用等体积的100mgl/ml的三氯乙酸直接沉淀，具有专属性好，方便快捷等优点，。

    (2)药动学研究及生物等效性评价  巴罗沙星cmax、AUC0～48、AUC0～∞数值经对数转换，方差分析结果表明，ln(AUC0～48)在周期间，个体间无统计意义；cmax、ln(AUC0～∞)在周期间无统计意义，个体间有统计意义；双向单侧t检验，各参数与等效性检验的低限及高限比较均合格(P<0.05)；tmax经非参数检验差异无统计学意义。ln(AUC0～48)、ln(AUC0～∞)、ln(cmax)、tmax(实测值)的群体等效性分析结果进一步表明两种制剂具有生物等效性。

    巴罗沙星片的达峰时间较巴罗沙星胶囊的达峰时间晚，可能与药物需要从片剂中崩解、溶出有关，符合该剂型特征［8］。

【】
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［3］ Ito T, Otsuki M, Nishino T. In vitro antibacterial activity of Q?35, a new fluoroquinolone ［J］. Antimicrob Agents Chemother,1992,36(1):708～710.

［4］ 张莉，李家泰，赵彩云，等. 国产左氧氟沙星片剂健康人体生物等效性研究［J］. 临床药杂志，2001，17(3)：199～202.

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