中药退黄外洗液皮肤给药刺激性试验

              作者：黄仕孙，高桂娥，吴曙粤，曾宪彪，王艳宁，余莉玲

【摘要】  目的：观察婴幼儿使用的院内制剂中药退黄外洗液对豚鼠的皮肤刺激性。方法：中药退黄外洗液以29.6 g和7.4 g生药/kg（为临床剂量的40倍和10倍）给豚鼠分别作单次和多次完整皮肤和损伤皮肤刺激性试验，用药后测量豚鼠体重，观察外观体征、行为活动、进食、排泄等一般情况，并作受药部位皮肤组织病检查。结果：中药退黄外洗液高、低剂量组单次或多次接触豚鼠，其外观体征、行为活动、体重和皮肤组织病理学检查与空白对照组无显著差异。结论：本品短期内对豚鼠无刺激性，表明临床拟用剂量用于局部或全身皮肤是安全的。

【关键词】  中药退黄外洗液；皮肤给药;刺激性试验；豚鼠

    ［Abstract］Obtective:To observe the reaction to Chinese herbal jaundice-abating lotion applied on Guinea pigs’skin which was developed by the first people hospital for infant external use.Methods:The healthy skin and the wounded skin of the Guinea pigs were treated with Chinese herbal jaundice-abating lotion with the doses of 29.6 g and 7.4 g raw materials/kg (40 and 10 times that of the practical use),respectively. What were undertaken after the above treatments was the weighing of guinea pigs and a series of regular records of guinea pigs,such as physical signs, activities,eating and the egesta etc.Samples from the treated parts of the skin of guinea pigs were collected and the pathologic measurements were also undertaken.Results:No significant differences were found between the health and the wounded in their physical signs, activities, and the weights of Guinea pigs and among the results of the pathologic measurements after treatments designed either once or several times to guinea pigs with high and low doses of Chinese herbal jaundice-abating lotion.Conclusions:No negative reactions were found in the short time period after the medicine was applied on the skin of Guinea pigs,which implies that it is safe to apply the medicine locally or for the whole body.

    ［Key words］Jaundice-abating Chinese Herbal lotion;External Use;Reaction test;Guinea pigs

    中药退黄外洗液是南宁市第一人民研制的婴幼儿院内制剂，其处方组成为茵陈、栀子、大黄、丹参、柴胡、郁金、枳壳、金钱草、车前草、白术、党参、茯苓、麦芽、鸡内金、甘草。本验方经我院主任医师、硕士生导师吴曙粤同志十多年的临床验证：主要是以沐浴形式透皮给药，药物经新生儿皮肤可吸收直接进入血液而达到或预防新生儿黄疸的目的，临床显示达到甚至是优于常规的口服或注射中药退黄制剂，是一种理想的治疗或预防新生儿黄疸的方法［1，2］。为了评估其安全性，我们对其进行了系统动物试验研究（包括皮肤给药急性毒性试验、皮肤刺激性试验、皮肤过敏性试验等等），现将中药退黄外洗液对豚鼠的皮肤刺激性试验的结果报道如下：

    1  材料和方法

    1.1  药物及试剂

    中药退黄外洗液：南宁市第一人民医院提供，批号：20051024，规格：250 mL/瓶，浓度相当总药材含量：7.4 g/mL。试验用药液分高浓度药液与低浓度药液。低浓度药液、高浓度药液分别为原药液的1倍、4倍浓度（7.4 g/mL和29.6 g/mL），即是临床用药浓度的 10、40倍。生理盐水作为空白对照组。

    1.2  试验动物

    白豚鼠，体重（180±30）g，为清洁级（Ⅱ级），由广西医科大学医学实验动物中心提供，动物合格证：桂动许字（2000）第001号；动物房合格证：桂医动字第23003号。试验环境为广西中医药研究所实验动物室，温度（23±2）℃左右，湿度（60±10）%。试验期间动物单独分笼饲养，饲喂全价颗粒饲料和适量青饲料，自由饮用清洁自来水。

    1.3  试验方法

    1.3.1  试验动物准备  试验前24 h，取试验动物，用理发推子和刀片在其背部作约相当于动物体表面积10%的去毛区约40 cm2。去毛区皮肤无损伤者留作完整皮肤试验；去毛区皮肤用针头作多处“井”字形划破，且只限于划破皮肤，不伤及皮下组织，以皮肤上有出血点为度，此种皮肤有损伤的动物留作损伤皮肤试验。

    1.3.2   试验分组  参照2005年国家药监局编《中药、天然药药物研究技术指导原则》［3］53要求进行，分别作完整皮肤和损伤皮肤刺激性试验，设置生理盐水阴性组和中药退黄外洗液高、低剂量组。

    1.3.3  单次给药皮肤刺激性试验  取符合要求的白豚鼠40只，完整皮肤者20只，损伤皮肤者20只。用药组在左侧去毛区皮肤斑贴含1 mL中药退黄外洗液的湿巾（1×1 cm），生理盐水组同法在右侧斑贴生理盐水湿巾，并用不透气胶布完全包扎，保证药液留置于去毛皮区皮肤6 h以上。于用药后24 h用无刺激性的温生理盐水洗去残留药液。然后于洗除残药后1、24、72 h，观察受药部位皮肤有无红斑、水肿等情况，进行皮肤刺激反应的评分，并各观察时间点受药部位皮肤反应积分平均值，进行皮肤刺激强度的评价。

    1.3.4  多次给药皮肤刺激性试验  选用动物、操作方法、评价方法同“1.3.3”。但用药为每日在同一部位用药3次，连用7 d。停药后观察7 d。并观察受药部位有无色素沉着、出血点、皮肤粗糙、皮肤菲薄等情况。并作受药部位皮肤组织病检查。1.4  评价标准

    按刺激强度及刺激反应评分标准［3］ 66-67，评价单次和多次给药对完整与破损皮肤的刺激强度、刺激反应的恢复情况和时间，并与对照组比较。反应平均值的计算方法为红斑形成总分与水肿形成总分的和除以同组实验动物总数。

    2  结果

    2.1  一般情况

    试验期间各组白豚鼠外观体征、行为活动、进食、排泄均正常。无异常瘙痒行为，所有动物体重增长正常，受药部位皮肤无红斑、无水肿、无色素沉着、无出血点、无皮肤粗糙、无皮肤菲薄，从给药至观察期结束，全部动物一般情况良好，无一死亡。

    2.2  皮肤刺激性反应、皮肤刺激性强度

    皮肤刺激性反应、皮肤刺激性强度评价，结果见表1～4，各组试验均显示无刺激性，用药组和生理盐水组比较，差异无统计学意义。表1  完整皮肤单次给药试验皮肤反应积分值（略）表2  损伤皮肤单次给药试验皮肤反应积分值（略） 表3  完整皮肤多次给药试验皮肤刺激性反应积分值（略） 表4  损伤皮肤多次给药试验皮肤刺激性反应积分值（略）

    2.3  病理学检查

    取多次给药试验动物受药部位皮肤组织，作病理切片检查，各组切片见复层上皮细胞完整，毛囊组织结构正常。用药组与生理盐水组比较，差异无统计学意义。病理切片HE染色显微照片见图1～6。图1复层上皮细胞完整，毛囊组织结构正常。图2复层上皮细胞完整，毛囊组织结构正常，无色素沉着，无出血点，无糜烂点。图3复层上皮细胞完整，毛囊组织结构正常，无色素沉着，无出血点。图4表皮有机械损伤旧痕，并见有新生修复组织，复层上皮细胞完整，毛囊组织结构正常。图5表皮有机械损伤旧痕，并见有新生修复组织，复层上皮、毛囊组织结构正常，无出血点，无糜烂点。图6表皮有机械损伤旧痕，并见有新生修复组织，复层上皮、毛囊组织结构正常，无色素沉着。

    3  讨论

    本试验是根据2005年国家食品药品监督管理局编《中药、天然药药物研究技术指导原则》相关的中药天然药物刺激性研究的技术指导原则进行的试验：采用高于临床用药10～40倍的用量给豚鼠分别作单次和多次完整皮肤和损伤皮肤刺激性试验并作接触皮肤病理学检查，结果中药退黄外洗液高、低剂量组的单次和多次接触豚鼠皮肤，观察1、24、72 h其外观体征、行为活动、体重和皮肤组织病理学检查与空白对照组（生理盐水组）比较均无显著差异。实验表明中药退黄外洗液制剂短期内接触豚鼠皮肤无刺激性，临床拟用剂量用于局部或全身是安全的。

【】
  ［1］ 吴曙粤,高桂娥,王利民,等.新生儿退黄外洗液的临床效果观察［J］.广西医学,2005,27(12):2014-2015.

［2］ 王利民,吴曙粤,黄春兰,等.新生儿退黄洗液早期干预新生儿黄疸的疗效［J］.实用儿科临床杂志,2006,21(14):944-945.

［3］ 国家食品药品监督管理局编.中药、天然药药物研究技术指导原则［S］.2005.