夏膝口服液对自发性高血压大鼠血压及血管紧张素Ⅱ?1型受体水平的影响
【摘要】 目的:观察夏膝口服液对自发性高血压大鼠(SHR)血压及血管紧张素Ⅱ?1型受体(AT1R)水平的影响。方法：将大鼠分为5组分别于实验前及实验2、4、6、8周测量血压值，于实验8周后用免疫组织化学法(ICH)测定各组大鼠腹主动脉AT1R蛋白的表达。结果：夏膝口服液具有降低SHR血压及血管AT1R蛋白表达的作用，P＜0.05或P＜0.01。结论：夏膝口服液具有类似ARB的作用机制。
【关键词】 夏膝口服液；自发性高血压大鼠；血管紧张素Ⅱ；血管紧张素Ⅱ?1型受体
夏膝口服液，是我院黄永生教授基于高血压病肝肾阴阳失调，毒伤血络的病理特点，经多年临床实践研制的有效验方，由夏枯草、牛膝、茺蔚子3味药组成。本实验旨在观察该药对SHR血压及血管紧张素Ⅱ1型受体水平的影响，以进一步探讨其降压机理。
1 实验材料
1.1 实验动物 12周龄雄性SHR 40只，相同周龄雄性Wistar?Kyoto大鼠(WKY)10只，体重(230±20)g，由北京维通利华公司提供。
1.2 药物与试剂 夏膝口服液(由吉林省中制剂室提供，60ml/瓶，批号：030108)；卡托普利片(上海华氏制药有限公司，批号：060601)；厄贝沙坦片(修正药业集团股份有限公司提供，批号:060501);即用型SABC免疫组化染色试剂盒、AT1R兔抗鼠单克隆抗体、POLY?L?LYSINE(多聚赖氨酸)、DAB显色试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)。
1.3 仪器 BP?6无创动物血压测量系统(成都泰盟科技有限公司)；FA1004分析天平(上海精密仪器有限公司);烤片机HI1220、摊片机HI1210、切片机RM2255、自动包埋机EG1150H(德国LEICA公司)；光学显微照相系统(日本Olympus公司)；BI?2000图像分析仪(成都泰盟科技有限公司提供)。
2 实验方法
2.1 分组 取12周龄雄性SHR 40只，分别称量体重、测量血压，查随机数字表法随机分为4组：夏膝口服液组、厄贝沙坦组(阳性对照组)、卡托普利组(阳性对照组)、SHR空白组，每组10只;另取12周龄的雄性WKY大鼠10只作为对照，称为WKY组。用苦味酸按头、四肢等部位做好标记。
2.2 给药剂量 夏膝口服液组20g/(kg·d)，厄贝沙坦组13mg/(kg·d)，卡托普利组8.3mg/(kg·d)，空白对照组及正常对照组给以等体积蒸馏水灌胃，每日上午灌胃给药，共进行8周。
2.3 观察指标 (1)血压值，(2)腹主动脉AT1R蛋白表达的测定。
2.4 检测方法 于实验前及实验后第2、4、6、8周测定大鼠血压值，连续测量3次，取平均值；灌胃8周后，大鼠称重，用20%乌拉坦，按0.4ml/100g的剂量腹腔注射麻醉，分离腹主动脉，取腹主动脉置入4%多聚甲醛固定液中固定，用ICH法测定，并应用LX70OLYMPUS显微镜Cooled CCD采集视野图片，用BI?2000图像分析仪进行分析，每张切片取5个视野，取平均值。
2.5 统计学处理 实验数据用均数加减标准差(±S)表示，组间比较用方差分析。
3 实验结果
3.1 实验前后各组大鼠血压变化比较 见表1。
表1 实验前后各组大鼠血压变化情况（略）
注:与WKY对照组比较，☆P＜0.05，★P＜0.01；与SHR空白组比较，△P＜0.05，▲P＜0.01；与实验前比较，◇P＜0.05，◆P＜0.01
3.2 实验后各组大鼠腹主动脉AT1R的染色程度及平均灰度值比较 见表2。
表2 实验后各组大鼠腹主动脉AT1R的染色程度及平均灰度值比较（略）
注：与WKY对照组比较，☆P＜0.05，★P＜0.01；与SHR空白组比较，△P＜0.05，▲P＜0.01
4 小结
表1结果显示:SHR空白组大鼠的血压明显比WKY组大鼠高(P＜0.01)，表明SHR原发性高血压模型成立。给药前各组与WKY组比较，差异均有极显著统计学意义(P＜0.01)；与SHR空白组比较，夏膝口服液组在给药4周后出现显著性差异(P＜0.05)、给药8周后出现极显著性差异(P＜0.01),厄贝沙坦组及卡托普利组从给药2周后即有极显著的降压作用(P＜0.01)。表明各组均有降低SHR血压的作用,夏膝口服液每天20g/kg连续灌服，可使血压平稳缓慢下降。表2显示:大鼠腹主动脉AT1R受体光镜下阳性染色呈棕黄色，主要分布于腹主动脉细胞膜及细胞浆中。WKY对照组细胞胞浆内可见少量散在的棕黄色物质，表达呈弱阳性反应；SHR空白组腹主动脉细胞胞浆内满布棕褐色颗粒状物质，表达呈强阳性反应；夏膝口服液组和卡托普利组腹主动脉细胞胞浆内可见中等量棕黄色物质，表达呈阳性反应；厄贝沙坦组细胞胞浆内可见少量棕黄色物质，表达呈弱阳性反应。经全自动图像分析仪测定腹主动脉AT1R蛋白表达的灰度值，发现SHR对照组平均灰度值与WKY组比较有极显著性差异(P＜0.01);夏膝口服液组平均灰度值明显高于SHR对照组(P＜0.05)，但其低于厄贝沙坦组；卡托普利组平均灰度值虽有所升高，但与SHR空白组比较无显著差异(P＞0.05);厄贝沙坦组平均灰度值显著高于SHR对照组(P＜0.01)。结果表明夏膝口服液能拮抗AT1R受体而降压，具有类似血管紧张素受体拮抗剂(angiotensinⅡ receptor blocker，ARB)的作用机制，降压作用确切，其降压是通过多途径、多靶点的整合调节，机理复杂，不能用单一理论来解释，有待进一步研究［1-3］。
【】
［1］靳宏光，黄永生.夏膝口服液对自发性高血压大鼠肾素、血管紧张素Ⅱ水平的影响［J］.中华中医药学刊，2007，25(5):1019-1021.
［2］Okada H，Watanabe Y，Inoue T，et al.Angiotensin Ⅱ type 1 receptor blockade attenuates renal fibrogenesis in an immune-mediated nephritic kidney through counter-activation of angiotensinⅡtype 2 receptor［J］.Biochemical and Biophysical Research Communications，2004，31(4):403-408.
［3］Christopher，Newton，Curran B，et al.Angiotensin Ⅱ Type 1 Receptor Activation Increases Microvascular Permeability Via a Calcium Dependent Process［J］.Journal of Surgical Research，2005，12(3):33-39.
