痛必定注射液对CCI大鼠外周血清中NO含量的影响

【摘要】  目的:研究痛必定注射液对CCI(坐骨神经慢性结扎损伤)大鼠外周血清中NO含量的影响。方法：运用硝酸还原酶法，分别测量给药前后大鼠外周血清中NO的含量，通过对比，研究痛必定注射液对CCI大鼠外周血清中NO含量的影响。结果:痛必定注射液能显著降低CCI大鼠外周血清中NO的含量。结论：痛必定通过抑制CCI大鼠外周血清中NO的生成或释放，达到镇痛作用。

【关键词】  痛必定注射液；镇痛；NO

　　痛必定注射液是由4种中药(有效成分或部位)组成的具有良好镇痛作用的中成药。一氧化氮(NO)是一种自由基性质的气体，是一种新型的信使分子，在外周神经、脊髓水平和神经中枢脊髓上水平的3个不同水平参与痛觉调制，研究痛必定注射液对动物外周血清中NO含量的影响而发挥的镇痛作用，笔者作了以下研究，报道如下。

　　1  材料与方法

　　1.1  材料  动物：二级健康纯种Wister大鼠60只，动物合格证号：SCXK?(吉)2003?0001。6周龄，雄、雌各半，180-220g，由吉林大学实验动物中心提供，动物饲养环境安静，有良好的通风和空气过滤系统，室温维持在20℃，湿度40％，每日更换笼具、垫料。主要仪器和试剂：戊巴比妥钠，进口分装，上海爱紫特生物科技有限公司；4?0号医用铬制羊肠线，郑州腾飞航宇科技有限公司；痛必定注射液(40mg/支)，吉林省中制剂室;解剖显微镜XTL?2000，上海宙山精密光学仪器有限公司；SH?XYT型小型动物压痛仪，深圳凯强利股份有限公司；YLS?6A智能热板仪，山东省医学院设备站；NO试剂盒，南京建成生物工程研究所；GF?D800半自动生化分析系统，山东高密彩虹分析仪器有限公司；手术器械，眼科剪、眼科小弯镊、血管钳、丝线、有齿镊等。

　　1.2  方法  取Wistar大鼠60只，在无菌条件下1%异戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉，暴露左侧的坐骨神经干，在中部4-5mm范围内，用4-0号铬制羊肠线打3-4个结，以引起小腿微微抽动为宜，然后逐层缝合。另一侧行假手术。将大鼠随机取出10只作为正常对照组，其余50只造CCI模型。术后14d，从造模成功的大鼠中随机挑取20只，分成两组，分别为CCI模型组和痛必定给药组。即A组(正常组)，B组(CCI模型组)，C组(CCI+痛必定组)，每组10只。
    　　
　　痛必定注射液40mg/支，加入生理盐水2ml，即成为浓度20mg/ml溶液。C组按20mg/kg体重腹腔注射，A组、B组分别注射等量的生理盐水，连续注射7d。术后第21d取材。将大鼠用1％异戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔注射，深度麻醉后进行腹主动脉采血。动脉血静置1h，放入离心机3000转/min，离心20min，取上清即为动脉血清，待用。按照NO试剂盒说明书，采用硝酸还原酶法，经GF?D800半自动生化分析系统测量出外周血清中NO的含量。

　　1.3  统计学分析  采用SAS 6.12软件进行统计学处理，数据以均数±标准差(±S)表示；组内比较用t检验；组间比较用单因素方差分析，并以q检验比较两两差异，P＜0.05认为差异显著。

　　2  结果
       
　　实验显示，与正常组比较B组CCI大鼠血清中NO含量明显升高(P＜0.01)，C组注射痛必定之后NO含量显著降低(P＜0.01)，与正常组相似，二者没有显著差异(P＞0.05)，见表1。

　　表1  痛必定对各组血清NO含量的影响（略）

　　注：与正常组比较*P＜0.05，**P＜0.01，△P＞0.05；与B组比较#P＜0.05，##P＜0.01

　　3  讨论
       
　　NO是一种自由基性质的气体，具有一个额外的，化学性质活泼。在体内参与多种组织、器官的调节活动，是一种重要的信息物质。许多研究已经证实NO释放是热痛觉过敏形成中胞内机制的重要一环，一些实验发现：鞘内给予NO合成底物L?Arg可引起剂量依赖性甩尾潜伏期缩短、嘶叫等痛觉过敏反应，表明NO参与了痛觉过敏过程。目前已证实，哺乳类体内NO途径存在于多种组织和细胞，如血管内皮细胞、血小板、神经系统、内分泌腺、某些肿瘤细胞以及心、肝、脾、肺、肠等部位。鞘内注射NO供体可使外周结扎坐骨神经所造成的痛觉过敏的开始时间提前，并加速痛觉过敏的。　　生成的NO主要作用：(1)直接活化胞浆中的可溶性鸟苷酸环化酶(soluble guanyly cyclase，sGC)，GTP(三磷酸鸟苷)生成cGMP增多，cGMP可作用于PKG(cGMP依赖性蛋白激酶)，后者增强突触后膜的敏感化状态；(2)可以通过逆行扩散至突触前终末促使EAA、SP和CGRP等递质的释放，使NMDA受体呈持续激活状态；(3)可参与靶细胞的基因调节。NO不仅对基因转录有影响，而且能放大神经细胞中的钙信号，从而引起c?fos、c?jun即早基因的表达，这样就把外界信号通过第三信使与基因的转录耦联起来。NO的放大作用在细胞内钙离子水平较低的情况下尤其重要，可使本来微弱、易被忽略的信号得到放大，从而引起显著的生理变化，这在突触传递易化现象中可能起重要作用。有研究表明，NO在外周、脊髓和脊髓上的3个不同水平参与痛觉调制，它与SP、CGRP、NMDA、cGMP、PGE2、PKA等物质的关系密切，CCI模型大鼠的外周血内NO浓度升高，能促进EAA(兴奋性氨基酸)的生成，以及参与外周痛觉调制的功能，同时NO的增多又会放大钙离子信号，促使痛敏加剧［1-3］。
    　　
　　本次研究结果表明，痛必定注射液能显著降低CCI大鼠外周血清中NO的含量，抑制大鼠外周血清中NO的生成或释放，达到良好的镇痛作用。对于痛必定注射液的有效镇痛机理，仍需进一步深入研究。
　

【】
  　　［1］王冰梅，侯 宜，许 侃.痛必定注射液镇痛作用机理的初步研究［J］.吉林中医药，2002，22(4):51.

　　［2］曹 军.痛必定粉针对大鼠脊髓背角广动力范围神经元电活动的影响［J］.吉林中医药，2004，24(6):54.

　　［3］金有豫.药［M］.5版.北京:人民卫生出版社，2001:139.