姜黄素对Tca8113细胞周期各时相的影响

【摘要】  目的:探讨姜黄素对Tca8113（人舌癌细胞株）细胞株的诱导分化作用及对细胞周期各时相的影响。方法:应用MTT比色法和流式细胞仪检测姜黄素对Tca8113细胞的增殖抑制率及细胞周期的改变，并通过显微镜观察其亚细胞结构的改变。结果:姜黄素对Tca8113细胞增殖有明显抑制作用，且呈剂量依赖性。流式细胞仪分析，G 1 期细胞增高，S期细胞减少，G 2 .M期细胞相对增多。亚细胞结构:细胞空化，核仁不规则。结论:姜黄素能够抑制Tca8113细胞增殖，阻止G 1 期细胞向S期的进程。S期细胞减少，G 2 .M期细胞增多，促进Tca8113细胞凋亡。

【关键词】  姜黄素;细胞周期;Tca8113细胞株

　　姜黄素（Curcumin）是从中药姜黄中提取的酚性色素，具有多方面的药理作用［1］ ，如抗炎、抗氧化、抗凝、降血脂、抗动脉粥样硬化及抗肿瘤等。我们应用Tca8113细胞为靶点，探讨姜黄素对其增殖的细胞周期各时相的改变，旨在为舌癌提供理论依据，兹将结果报告如下:

　　1 材料和方法
    
　　1.1 材料 Tca8113细胞株，由北京医科大学口腔蕙赠;姜黄素购于上海化学试剂采购站（分析纯）;RPMI1640培养基、MTT（塞唑蓝）购于美国Sigma公司;胎牛血清购于长春生物制品研究所。
   
　　1.2 方法

　　1.2.1 MTT比色法 取对数生长期的Tca8113细胞。经0.25%胰蛋白酶消化，收集细胞，调细胞数为2×10 8 .L。接种于96孔塑料培养板内，每孔100μl.孔。分别加入10、20、40g.L姜黄素，每个浓度6复孔，同时设空白对照组，共4组。培养24h，于培养结束前6h加入MTT试剂20μl.孔，终浓度为0.5g.L。继续培养6h后加入酸化异丙醇50μl.孔。振荡5min，使MTT还原产物完全溶解，用酶标仪在550波长处测定各孔吸光度A值，肿瘤细胞抑制率。
   
　　肿瘤细胞抑制率=（1-加药孔细胞A值÷对照孔细胞A值）×100%
    
　　1.2.2 应用流式细胞仪检测 Tca8113细胞周期各时相变化及凋亡率，细胞培养及分组同1.2.1，培养结束后，胰蛋白酶消化。收集细胞，PBS洗2次，离心弃上清，用70%冷乙醇固定，上机前过4S目网，调细胞数为1×10 9 .L，测定细胞周期各时相变化。
   
　　1.2.3 透射电镜观察 Tca8113细胞亚结构改变，收集经姜黄素作用的Tca8113细胞。离心弃上清，用2.5%戊二醛固定，1%锇酸后固定。环氧树脂包埋。超薄切片，醋酸铅-铀双重染色，透射电镜观察并拍照。
   
　　1.2.4 统计学分析 组间比较用t检验，数据以均数标准差（ˉx±s）表示。

　　2 结果
    
　　2.1 不同浓度姜黄素对Tca8113细胞增殖抑制率的 影响 见表1。
    
　　表1 不同浓度姜黄素对Tca8113细胞增殖抑制率的影响（略）

　　表1结果表明，不同浓度姜黄素对Tca8113细胞增殖抑制率随着药物浓度的增加而升高，与对照组相比差异非常显著。
   
　　2.2 不同沈度姜黄素对Tca8113细胞周期及凋亡率的影响 见表2。
     
　　表2结果表明，随着姜黄素浓度增加，作用时间间延长，效果越明显，其凋亡率亦上升，20g.L组姜黄素对Tca8113细胞凋亡率可达11.5%。

　　表2 不同浓度姜黄素对Tca8113细胞周期及凋亡率的影响（略）
    
　　3 讨论
    
　　近年来，细胞周期的研究取得令人注目的成绩，特别是细胞周期中不同时相的改变为肿瘤预防和提供了重要的理论依据。
   
　　我们应用MTT比色法测定姜黄素对Tca8113细胞的增殖抑制率，结果表明。姜黄素可明显抑制Tca8113细胞增殖，与对照组相比差异非常显著，且具有时间剂量依赖性。MTT试剂可被哺乳动物活细胞中线粒体脱氢酶还原成蓝色甲   颗粒，且甲   生成的量与活细胞数量及细胞活化状态呈线性关系［2］ 。因此被广泛用于抗肿瘤药物的筛选。
   
　　流式细胞仪结果显示，不同浓度的姜黄素对Tca8113细胞增殖周期均有明显影响，组间比较差异均显著，结果显示G 1 期细胞增多，S期细胞减少，G 2 .M期细胞相对增多，G 1 期细胞又称细胞复制前期，是指细胞从有丝分裂到DNA复制之前，G 1 期是制造产生rRNA、mRNA、tRNA及核蛋白体，所以说G 1 期是细胞复制周期运行的关键，同时G 1 期也是药物等因素作用的敏感点［3］ 。因而抑制细胞周期的G 1 期的RNA及核蛋白体的合成，可间接的使肿 瘤细胞的RNA合成减少，延缓肿瘤细胞的增殖。G 2 .M期细胞增多是细胞损伤的普遍反应，多种细胞损伤剂不仅可引起G 1 期细胞停滞，亦可引起G  2 .M期细胞阻滞［4］ 。我们的结果显示，姜黄素对Tca8113细胞G 1 期阻滞，G 1 期细胞堆积，不能进入S期，阻滞G 1 期细胞向S期的进程，从而使G  2 .M期细胞相对增多，细胞凋亡率升高。
   
　　显微镜观察所见，细胞肿胀、细胞核变小，细胞质高度空化。总之，根据我们的实验结果，证明姜黄素对Tca8113细胞增殖有明显的抑制作用，为舌癌治疗提供了理论依据。

【】
  　　［1］孙春艳，刘新月，陈 燕.姜黄素抗肿瘤机制研究进展［J］.国外医学肿瘤学分册，2003，30（5）:354-357.

　　［2］肖冬梅，孙关林，苏 卉.三氧化二砷对K562 细胞周期的影响及其机制研究［J］.中华医学杂志，1999，29（5）:306～307.

　　［3］周秀敏，林菊生.DNA损伤修复与肿瘤的关系［J］.国外医学·肿瘤学分册，2003，30（4）:261-263.

　　［4］BerchemG，BosselerM，MineN，etal.Nanomolar rang Docetaxel treatment sensitizes MCF-7cell to chemotherapy induced apop-tosis，induces G2M arrest and phosphorylates Bcl-2［J］.Anti-cancer Res，1999，19（1A）:535-540.