灵芝提取工艺的研究

                       作者：马明辉，吕丽娟，贡济宇，赵伟

【摘要】  目的:以多糖提取量为考察指标，改进灵芝提取工艺。方法:选择煎煮液PH值、首次煎煮时间、煎煮时间比、加液量4个因素，每个因素取3水平。结果:方差分析结果表明A 3 B2 C 2 D 1 为最佳提取工艺，即煎煮液PH值为11，首次煎煮时间为120min，煎煮时间比为3.0∶2.0∶0.5，加液量为8倍。结论:首次煎煮时间影响最大，煎煮时间和加液量也具有显著性影响，煎煮液PH值影响最小。

【关键词】  灵芝;多糖;提取工艺;正交试验

　　药理实验表明，灵芝多糖成分具有免疫调节功能，可使乙型肝炎表面抗原阴转［1］ 。生产中多为水煎浓缩提取，收率较低，为提高收率，寻求最佳提取工艺，本实验对其提取工艺进行了研究［2-3］ 。

　　1 材料与方法
    
　　1.1 材料 灵芝，吉林省宏检药材公司，TG328B分析天平，UV-1810紫外-可见分光光度计，分析天平，R205型旋转蒸发仪，所用试剂均为国产分析纯。

　　1.2 方法
   
　　1.2.1 提取工艺优选正交表设计 根据传统的提取方法和多糖的理化性质，考虑煎煮液PH值（因素A），首次煎煮时间（因素B），煎煮时间比（因素C），加液量（因素D）4个因素，每个因子设3水平，以多糖提取量为考察指标，进行正交试验。见表1。
    
　　表1 试验因素水平表（略）

　　1.2.2 多糖的含量测定 对照品溶液配制:以无水葡萄糖作为对照品，精密称取105℃干燥恒重的葡萄糖100mg，于100ml容量瓶中，加水溶解，并定容至刻 度。取9支具塞试管，分别按不同标准加入试剂，混匀，置沸水浴加热5min，用冷水冷却至室温，再向各试管分别加入21.5ml蒸馏水，摇匀，于520nm处测吸收值。以葡萄糖量为横坐标，吸收值为纵坐标，得回归曲线方程为y=23.75269x-0.17153（r=0.9996）。
   
　　供试品溶液配制:称取药材50.0g，按正交表方案进行提取，趁热过滤，合并滤液，浓缩滤液至比重为1.03，放冷浓缩液边加95%乙醇边快速搅拌，加乙醇至乙醇含量为80%，静置24h，去除上清液离心，得沉淀，45℃真空干燥，得干膏，精称干膏约0.5g，置50ml容量瓶中热水溶解，加蒸馏水定容至刻度。50℃恒温水浴保温20min过滤，滤液放至室温，供配制总糖供试液和还原糖供试液。
   
　　总糖供试液配置:精密量取供试品溶液5ml，置25ml容量瓶中，加6N盐酸8ml，置沸水浴加热30min，冷却后加1滴酚酞指示剂，用20%氢氧化钠溶液中和至微红色，加水稀释至刻度，摇匀，过滤。此液为总糖供试液。

   
　　还原糖供试液:精密量取供试品溶液5ml，至10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。测定结果:见表2。
    
　　表2 还原糖和总糖含量测定（略）

　　正交试验多糖提取量直观分析:见表3、表4。
    
　　表3 正交试验多糖提取量直观分析（略）

　　表4 多糖方差分析（略）

　　2 结果与讨论
    
　　由实验结果可知，灵芝提取工艺，煎煮液PH值对多糖提取量几乎无影响，首次提取时间对多糖提取量影响最大，因多糖发生化学变化，提取时间越长，分解越多;煎煮时间比对多糖提取量有显著影响;加液量对多糖含量有较大影响，加液量太大会导致浓缩时间过长，造成糖的分解过多，同时应考虑大生产中的 效益。综合考察最佳提取工艺为A 3 B 2 C 2 D 1 。即:煎煮液PH11，首次提取时间为120min，煎煮时间比3.0∶2.0∶0.5，加液量为8倍。以优选工艺A 3 B 2 C 2 D 1 进行提取得多糖提取量为2.3756%。由此得出该工艺可行。

【】
  　　［1］陈雷华，朱正纲，马安伦.灵芝孢子粉对荷HAC小鼠抗肿瘤的实验性研究［J］.上海免疫学杂志，2000，20（2）:101.

　　［2］邢文善，纪耀华.半枝莲粗多糖的提取及总糖的含量测定［J］.吉林中医药，2005，7（25）:56.

　　［3］吕丽娟，马明辉，贡济宁.正交实验法优选麦冬多糖提取工艺的研究［J］.长春中医药大学学报，2007，23（2）:56.