蝎毒抗癌多肽对卵巢癌细胞株生长抑制及凋亡的影响

                       作者：徐波 王洁 曾建华 魏莲 

【摘要】  目的：研究蝎毒抗癌多肽体外能否抑制卵巢癌细胞株 3AO 的生长及诱导其发生凋亡。 方法：采用噻唑蓝（MTT）法检测蝎毒抗癌多肽体外对卵巢癌细胞株 3AO 的生长与增殖的影响、流式细胞仪的方法进行凋亡峰的检测。 结果：蝎毒抗癌多肽体外作用于卵巢癌细胞株 3AO 后，能明显抑制其生长，并呈剂量效应关系。流式细胞仪检测到了细胞凋亡峰，且峰值也呈剂量效应关系。 结论：蝎毒抗癌多肽体外能抑制卵巢癌细胞株 3AO 的生长，并能诱导其发生 凋亡。

【关键词】  蝎毒抗癌多肽；卵巢癌；凋亡

Polypeptide  Extract  From  Scorpion  Venom  (PESV)  Inhibits  Proliferation   and  Induces  Apoptosis  on  Ovarian  Cancer  Cell Lines  3AO  in  Vitro

    〔Abstract〕 Objective To  study  whether  PESV  can  inhibit  proliferation  and  induce  apoptosis  on  ovarian  cancer  cell lines  3AO  in  vitro.    Methods   Cell  growth  inhibition  rate  of  ovarian  cancer  cell  lines  3AO   after  treated  with  PESV  was  determined  by  MTT.  Apoptotic  peak  was  determined  by  flow  cytometry.  Results     PESV  could  inhibit  proliferation  of  ovarian  cancer  cell  lines  3AO  in  vitro  and it  had  some  dose-effect  relation.  Apoptotic  peak  was  detected  by  flow  cytometry  and  it  also  had  some  dose-effect  relation.    Conclusion    PESV  can  inhibit  proliferation  and  induce  apoptosis  on  ovarian  cancer  cell  lines  3AO  in  vitro.

    〔Key  Words〕    PESV;  Ovarian  cancer;  Apoptosis

    迄今为止，卵巢癌仍是妇科肿瘤中难以早期发现，早期的恶性肿瘤。手术和化疗是治疗卵巢癌的主要手段。此外，寻找新的药物抑制卵巢癌细胞的生长、增殖及转移有重要意义。近年来的研究表明，蝎毒多肽提取物（polypeptide extract from scorpion venom,  PESV）具有抗癌作用[1]。本研究采用 MTT 法、流式细胞术、探讨 PESV 对卵巢癌细胞的生长及增殖的抑制作用和诱导凋亡的作用。

    1    材料与方法

    1.1    卵巢癌细胞株    3AO，重庆医科大学基础研究所提供，用 RPMI-1640 培养基培养，含 10% 小牛血清，2 mmol/L 谷氨酰胺，用 0.1% 胰酶消化传代。

    1.2    PESV    由广州医学院提供，经冷冻干燥后的 PESV 于 - 20℃ 保存，使用时配成所需浓度。

    1.3    细胞增殖分析    用 MTT 法分析 PESV 对 3AO 卵巢癌细胞株细胞增殖活性的影响。实验分调零孔（等体积培养液）、阴性对照组（培养液和单细胞悬液）、顺铂组（培养液、单细胞悬液和顺铂），PESV 组（培养液、单细胞悬液和 PESV），细胞接种于 96 孔板，细胞数为每孔 8×100 个/ 100   L，每个浓度设 3 个复孔，接种 24 h 后，分别加入不同浓度的顺铂和 PESV，继续培养 48 h 后加入 20   L 浓度为 5 mg/mL 的 MTT，继续培养 4 h，弃去培养基后每孔加入 200   L DMSO，充分溶解后，用酶标仪于 570 nm 波长下读取每孔的吸光度A（OD 值）。细胞增殖抑制率（IR）按以下公式：

    1.4    流式细胞仪检测    细胞经过不同药物处理 48 h 后， 将处理后的细胞用 0.1% 胰蛋白酶消化，PBS 吹打成单个细胞悬液。离心后用 70% 乙醇固定过夜。记数细胞，细胞数不少于 5×104/mL。加 PI 染色液，染色约 20 min，进行流式细胞仪检测， Cell Quest 和 Mod Fit L T 软件分析结果。

    2    结    果

    2.1    MTT 结果    MTT 结果显示随着 PESV 浓度的增加，对卵巢癌细胞株 3AO 的生长抑制作用越来越明显，呈剂量效应关系。（当剂量增加至 60   g/ mL，120   g/mL 时，IR 分别增加为 42.1% 和 61.2%，与阴性对照组相比，P < 0.05），顺铂在 2   g/mL 时也开始对卵巢癌细胞株 3AO 产生明显的抑制作用，也呈剂量效应关系，见表 1。

    2.2    流式细胞仪检测    用流式细胞仪检测经 PESV 处理后的卵巢癌细胞株 3AO 细胞，可见凋亡峰的出现，且峰值随处理浓度的加大而增大（见图 1、图 2）。未处理的卵巢癌细胞株 3AO 细胞不能检测到凋亡峰（见图 3）。

    3    讨    论

    卵巢癌是妇科常见恶性肿瘤之一，近年来，其发病率呈上升趋势。对卵巢癌的主要以手术和化疗为主，但因其难以早期发现及早期治疗，预后往往不佳。我国的传统医学博大精深，有丰富的中医药资源，科研工作者已经不断从我国传统中药中发现了许多具有抗癌疗效的药物，应用于临床，取得了较好的疗效[1]。大量的实验研究证明，蝎毒多肽提取物可抑制多种肿瘤细胞的增殖与生长，本研究也表明，当 PESV 浓度在 60   g/mL 时，能显著抑制卵巢癌细胞株 3AO 的增殖与生长，细胞增殖抑制率达到 42.1%，当 PESV 浓度加大到 120   g/mL 时，细胞增殖抑制率达到 61.2%，呈明显的剂量效应关系。许多的研究表明，PESV 具有抑制肿瘤细胞增殖的作用，其机理可能是通过影响细胞周期的进行，使 G1 期细胞增多，S 期细胞减少，从而达到细胞增殖的抑制作用[2]。我们将在今后的工作中做进一步的研究。

    凋亡是生物体内普遍存在的一种生理性现象，细胞的增殖与凋亡相互平衡才能维持组织器官正常的生理功能和细胞数的稳定。如果细胞增殖和凋亡的平衡被打破则可以导致肿瘤的发生。随着凋亡与肿瘤发生关系的深入研究，已经有证据表明细胞凋亡受阻是肿瘤发病的重要机制之一。因此，人们也已经意识到，治疗肿瘤重要的策略之一就是诱导、促进肿瘤细胞凋亡。近年来已有研究报道 PESV 能诱导前列腺癌细胞发生凋亡，为 PESV 用于恶性肿瘤的治疗提供了理论基础[3]。在我们的研究中，流式细胞仪分析显示，当 PESV 浓度在 60   g/mL 时，卵巢癌细胞株 3AO 有凋亡峰的形成，当浓度加大到 120   g/mL 时，形成的凋亡峰峰值更高，表明 PESV 体外能诱导卵巢癌细胞株 3AO 发生凋亡，且呈明显的剂量效应关系。

    因此，我们认为，PESV 不但体外可以抑制卵巢癌细胞株 3AO 的增殖，还可以诱导其发生凋亡。其是否具有体内抗肿瘤活性，我们将在今后的动物实验研究中做进一步的探讨。

【】
  〔1〕张文萍. 蝎毒抗癌多肽的研究进展〔J〕. 中草药, 2002, 33(12):1143-1145

〔2〕王兆朋, 张维东, 张捷, 等. 蝎毒多肽提取物对前列腺癌细胞增殖的影响〔J〕. 实用癌症杂志, 2006, 21(1):1-3

〔3〕张月英, 张维东, 贾青, 等. 蝎毒多肽提取物诱导前列腺癌DU-145细胞凋亡的实验研究〔J〕. 实用癌症杂志, 2006, 21(3):225-226