陈皮多糖提取工艺的研究
【摘要】 目的 研究陈皮多糖水提法的优化工艺。方法 采用水浴加热提取方法，用L9(34)正交试验设计方案，考察固液比、提取温度、提取时间3种因素对陈皮多糖提取率的影响。结果 水提陈皮多糖的最佳工艺参数是：固液比1∶10，提取温度100 ℃，提取时间6 h，其多糖最高提取率可达7.61%。结论 该优化工艺可用于陈皮多糖的提取。
【关键词】 陈皮 多糖 取 正交设计试验
Abstract:Objective To optimize the extraction procedure of polysaccharide in tangerine peel. Methods By L9(34) orthogonal design，the effects of the solid?liquid ratio, temperature, and extraction time on the extraction efficacy of polysaccharide in tangerine peel were investigated. Results The optimum conditions of the hot water extraction were as follows: solid?liquid ratio of 1∶10，100 ℃ and 6 hours of extraction. The extraction efficacy of polysaccharide in tangerine peel by ultrasonic method was 7.61%. Conclusion This extraction method of polysaccharide is feasible.
Key words: tangerine peel；polysaccharide；extraction procedure；orthogonal design
陈皮是芸香科植物橘（Citrus reticulata Blanco）及其同属多种植物的成熟果实的果皮，味苦、辛，性温，有理气健脾、燥湿化痰的作用。其药用价值在《神农本草经》、《本草纲目》等专著中均有详细记载。据报道，陈皮具有强心、抗休克、抗肿瘤、抗氧化、疏肝利胆等药理活性［１］。目前对陈皮的研究主要集中于黄酮类和挥发油［2］，对陈皮多糖的研究尚未见文献报道，而有关资料显示柑橘皮中果胶多糖含量可达10%～30% ［３］。本文采用正交试验确定了陈皮多糖提取的优化工艺，并初步测定了新会陈皮多糖的含量。
1 仪器与材料
TU?1810紫外可见分光光度计（普析通用仪器公司），HH?6恒温水浴锅(宏华仪器厂)，所用试剂均为国产分析纯。
陈皮由新会陈皮协会提供，并由广东药学院药用植物与中药鉴定学教研室李书渊教授鉴定为茶枝柑（Citri Reticulata Chachi）的干燥成熟果皮。取适量陈皮粉碎，过40目筛，40 ℃干燥3～4 h，乙醇脱脂（料液比1∶10，80 ℃，1.5 h），备用。
2 实验方法
2.1 理化性质鉴别
对提取产物进行棕色环试验、淀粉试验、本尼迪特反应、茚三酮反应以及甾体、生物碱鉴定等。
2.2 多糖的提取方法
称取适量陈皮粉末，按一定固液比、提取时间和提取温度水浴回流浸提，过滤，滤液浓缩至原体积20％，加入3倍量乙醇沉淀，4 ℃放置过夜，过滤，沉淀物依次用无水乙醇、乙醚、丙酮洗涤两次，干燥得多糖粗品。
2.3 标准曲线的绘制［4］
准确称取105 ℃烘干至恒重的标准葡萄糖50 mg，蒸馏水溶解并于50 mL容量瓶中定容，制得质量浓度为1 mg/mL的对照品溶液，分别精密移取2、4、6、8、10 mL于100 mL容量瓶中定容。精密量取稀释液各2 mL，加入质量分数为6％的苯酚1 mL、浓硫酸5 mL，静置10 min，摇匀，室温放置20 min，在波长489.0 nm处测定吸光度，以蒸馏水为空白对照。得到标准曲线方程: y=0.0137x＋0.0445，r=0.9982。
2.4 多糖含量测定
准确称取20 mg多糖粗品溶于水，定容至250 mL，按硫酸-苯酚法测定吸光度，用标准曲线多糖浓度。多糖提取率的计算依据以下公式：多糖提取率（%)=250Cfm2/20m1×100％，式中，C为多糖粗品溶液的浓度,f为多糖的校正系数，取0.9［4］,m2为多糖粗品质量,m1为陈皮质量。
2.5 正交实验［5］
选取对多糖提取率影响较大的3个因素，固液比(A)、提取时间(B)和提取温度(C)，采用L9(34)正交法设计水浴浸提实验，实验方案设计的因素与水平见表1。
表1 正交试验因素水平表（略）
Tab.1 Factors and levels of orthogonal design
3 结果与分析
3.1 理化性质鉴别
陈皮多糖浸提液呈棕色，清香，弱酸性，在高浓度乙醇、乙酸乙酯等溶剂中发生明显醇析现象。经特征反应鉴定，最终产物为糖类化合物，不含淀粉、还原性糖、甾体以及生物碱，但有少量蛋白质存在。
3.2 正交试验结果与方差分析
以多糖提取率为考察指标，水浴浸提试验的结果与分析见表2。结果表明，陈皮多糖提取的最佳组合为A1B3C3，由此确定其提取工艺的优化参数：液固比1∶15，提取温度100 ℃，提取时间6 h。由极差分析可知，3种因素对多糖提取率的影响程度依次为B>C>A，提取温度的影响最大，其次是提取时间和固液比。表3中方差分析也表明：B因素的影响具有显著性意义(P<0．05)，A因素和C因素无显著性意义(P>0.05)，与极差分析结果一致。
3.3 验证实验
在多糖水提工艺中，按A1B3C3进行验证实验，得率为7.61%，验证实验结果与正交实验结果基本吻合，说明工艺可行。
表2 正交试验结果与分析（略）
Tab.2 Results of orthogonal design
表3 方差分析表（略）
Tab.3 Analysis of variance
4 讨论
4.1 根据L9(34)正交试验筛选出水浴浸提陈皮多糖的最佳工艺参数是：固液比1∶10，提取温度100 ℃，提取时间6 h，多糖提取率可达7.61%。经验证实验证明该条件可行。
4.2 多糖粗品的茚三酮检验以及280 nm处紫外检测均显示产物不含蛋白质，但sevage法对粗品作脱蛋白处理［正丁醇?氯仿（体积比1∶4）］后,发现有机层与水层间有少量乳滴，说明产物仍有微量蛋白质存在。
4.3 本次研究只得到陈皮多糖的粗品，关于陈皮多糖的组成、结构以及生理活性还需要纯化处理后再作进一步研究。
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［1］ 赵小艳,吕武清.陈皮的研究概况［J］.药业,2006,15(15):68-70.
［2］ 张志海,王彩云,杨天鸣，等.陈皮的化学成分及药理作用研究进展［J］.西北药学杂志,2005,20:47-48.
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［4］ 张惟杰.糖复合物生化研究技术［M］.浙江:浙江大学出版社,1999:11.
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