白芍总苷微孔渗透泵片中芍药苷的含量测定
【摘要】 目的 建立用RP?HPLC法测定白芍总苷微孔渗透泵控释片中芍药苷含量的方法。方法 采用Diamonsil C18色谱柱(5 μm,250 mm×4.6 mm) ，以甲醇?水?磷酸（体积比33∶67∶0.2）为流动相，检测波长230 nm。结果 芍药苷质量浓度在20～100 μg/mL范围内线性关系良好（r＝0.9995），平均加样回收率100.6％（n＝6）。结论 本法准确、简便、专属性强，可用于白芍总苷微孔渗透泵控释片的质量控制。
【关键词】 高效液相色谱法 白芍总苷 芍药苷 微孔渗透泵控释片
Abstract:Objective To establish a RP?HPL method for determination of paeoniflorin in controlled porosity osmotic pump tablets of total glucosides of paeony. Methods A Diamonsil C18 colum (5 μm, 250 mm×4.6 mm) was used by using methanol?water?phosphate(33∶67∶0.2), as mobile phase. The detection wavelength was 230 nm. Results The linear range was 20～100 μg/mL (r=0.9995). Conclusion The method is convenient, accurate and specific, which could be used for the quality control of total glucosides of paeony controlled porosity osmotic pump tablets.
Key words: paeoniflorin; total glucosides of paeony; controlled porosity osmotic pump tablets; HPLC
白芍总苷（total glucosides of paeony ，TGP）为白芍干燥根中提取的有效成分［1-2］，芍药苷是其中的主要有效成分，占总苷的70％以上。白芍总苷具有多种生理及药理作用，能多途径抑制自身免疫反应，对炎症免疫性疾病疗效很好，还具有保肝、止痛功效［3-4］。市售白芍总苷胶囊主要用于风湿性关节炎，系统性红斑狼疮，效果好，副作用小，但每日需服2～3次，每次2粒，长期使用剂量大，还具有腹泻的副作用。将白芍总苷制成12 h控制释放的微孔渗透泵控释片，可以减少病人服用剂量，降低副作用发生率，提高药物的安全性和稳定性，获得良好的治疗效果［5］。TGP微孔渗透泵控释片国内尚无报道，为有效的控制产品质量，本文用RP?HPLC法测定该制剂中芍药苷的含量，本方法专属性强、准确、简便。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪：LC?10ATVP 泵，SPD?10AVP紫外检测器（日本SHIMADZU公司）；色谱工作站：HW?2000（南京千谱软件有限公司）。芍药苷对照品（药品生物制品检定所，批号110736-200527）；甲醇为色谱纯，水为超纯水；其他试剂均为分析纯；TGP微孔渗透泵控释片（广东药学院药剂教研室提供，批号070622，070626，070627，规格 150 mg/片）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Diamonsiol C18色谱柱（5 μm,250 mm×4.6 mm）；流动相：甲醇?水?磷酸（体积比33∶67∶0.2）；流速：1 mL·min-1；温度：室温；检测波长：230 nm；进样量：10 μL。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液
称取经五氧化二磷减压干燥24 h的芍药苷对照品5 mg，精密称定，置25 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2.2.2 供试品溶液
取本品10片，除去薄膜衣，精密称定，研细，取约0.1 g，精密称定，置100 mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理20 min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2 mL, 置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性样品溶液
按处方组成，取除白芍总苷外的其他成分，按工艺要求，制成不含白芍总苷得微孔渗透泵控释片，按“2.2.2”项下的要求操作，即得。
2.3 系统适用性及专属性试验
按“2.1”项下色谱条件，取对照品溶液，重复进样6次，RSD为0.9％，供试品溶液进样，芍药苷的保留时间约为13 min，理论塔板数不低于3 500，与最近峰的分离度为3.3，拖尾因子1.05，从图1可以看出，TGP微孔渗透泵控释片和其他组分分离良好，且无阴性干扰，专属性好。
图1 空白辅料（A）、芍药苷对照品(B)和白芍总苷(C)的色谱图（略）
Fig.1 HPLC chromatograms of negative control (A), paeoniflorin standard substance (B) and total glucosides(C)
2.4 线性关系考察
取经五氧化二磷减压干燥24 h的芍药苷对照品约10 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，分别吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL于10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，配制浓度分别为20，40，60，80，100 μg/mL，按“2.1”项下的色谱条件，依次进样10 μL，测定峰面积，以峰面积（A）为纵坐标，对照液质量浓度(ρ)为横坐标绘制标准曲线，回归方程为A＝1.25×10-4ρ-1.2567，r＝0.9995。结果表明在20～100 μg/mL范围内呈良好的线性关系。
2.5 重复性试验
取同一批号TGP微孔渗透泵控释片，按“2.2.2”项下操作，配制平行样6份，每次进样10 μL测定，其峰面积的RSD为1.8％。
2.6 稳定性试验
取供试品溶液，分别在1，2，4，6，8，10，12 h进样10 μL，得其峰面积的RSD为1.7％，表明供试品溶液在12 h内稳定。
2.7 加样回收率试验
取已知含量的TGP微孔渗透泵控释片细粉6份，分别加入对照品适量， 按“2.2.2”项下方法处理后，依法测定，结果见表1。
2.8 样品的测定
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL, 依法测定，外标法3批TGP微孔渗透泵控释片（批号070622，070626，070627）含芍药苷的平均含量分别为（n＝3）48.26，49.36，47.96 mg/片。
表1 芍药苷回收率的实验结果（略）
Tab.1 Recovery test of paeoniflorin
平均回收率＝100.8％, RSD＝1.6%
3 讨论
3.1 取对照品在200～400 nm波长范围内进行扫描，结果显示芍药苷在230 nm处有最大吸收。
3.2 在［6-7］ 基础上，考察了甲醇?水不同比例，甲醇?水?冰醋酸（体积比33∶67∶0.2），甲醇?水?磷酸（体积比33∶67∶0.2）等多个流动相，结果表明：甲醇?水系统拖尾严重，柱效较低；加冰醋酸后有所改善，但重现性低；加磷酸后柱效高，重现性好，符合芍药苷分离度要求。
3.3 试验结果表明，此方法精密度，重复性，稳定性及加样回收率结果均能满足分析要求,该方法简便、准确、专属性强，可用于白芍总苷微孔渗透泵控释片的质量控制。
【文献】
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［2］ 张晓燕，李铣. 白芍的化学研究进展［J］. 沈阳药科大学学报，2002，19(1):70.
［3］ 魏伟，刘家骏，刘家琴，等.白芍总昔对乙型肝炎的作用及其前景［J］.药通报，2000,16(5):597.
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