丹参酮ⅡA乳剂对小鼠脑缺血的保护作用
作者：何晓静，王守涛，周娟，肇丽梅
【摘要】 目的 观察丹参酮ⅡA对小鼠脑缺血、脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 采用小鼠断头模型、小鼠脑卒中模型、小鼠脑缺血再灌注模型，观察丹参酮ⅡA注射乳剂对小鼠断头后存活时间、喘气次数，小鼠脑卒中后的神经行为，小鼠脑缺血再灌注后脑内SOD活性、MDA含量的影响。结果 丹参酮ⅡA能延长小鼠断头后的存活时间、增加断头后的喘气次数，改善脑卒中小鼠的神经行为，提高脑缺血再灌注损伤后小鼠脑组织中SOD酶活性,降低MDA含量。结论 丹参酮ⅡA注射乳剂对小鼠脑缺血及脑缺血再灌注损伤具有保护作用。
【关键词】 丹参酮ⅡA注射乳剂；脑缺血；脑缺血再灌注；自由基
Abstract ：Objective To investigate the protective effect of Tanshinone ⅡA against brain injury in mice induced by cerebral ischemia or cerebral ischemia-reperfusion.Methods Mice were pretreated with Tanshinone ⅡA at the dose of 7.8, 3.9, 1.9 mg/kg i.v.respectively.The models of mice cerebral ischemia and cerebral ischemia-reperfusion were made.The survival time, gasping time by decapitation and behavior were evaluated.The SOD activity and MDA content were measured.Results Tanshinone ⅡA could significantly increase the survival time and gasping time, improve the behavior of mice.Tanshinone ⅡA could also enhance the superoxide dismutase (SOD) activity and reduce the malonyldialdehyde (MDA) content in mice brain tissue at the same time.Conclusion Tanshinone ⅡA has protective effect against brain damage induced by cerebral ischemia and cerebral ischemia-reperfusion in mice.
Key words: Tanshinone ⅡA emulsion; cerebral ischemia; cerebral ischemia-reperfusion; free radical
丹参酮（tanshinone）是丹参的有效活性成分，包括丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、丹参酮ⅡB等脂溶性成分和丹酚酸甲、丹酚酸乙、丹参素等水溶性成分，其中丹参酮ⅡA为丹参酮中含量最高的活性成分［1］。为了解决丹参酮ⅡA不溶于水，成盐后注射给药不易透过血脑屏障，将丹参酮ⅡA做成微乳制剂，在不改变其理化性质的基础上，保持其原有的脂溶性和穿过脂双层生物膜、透过血脑屏障的能力。本文利用小鼠脑缺血及脑缺血再灌注模型，观察丹参酮ⅡA对脑缺血的保护作用，探讨其作用机制。
1 材料
1.1 药品与试剂
受试品：丹参酮ⅡA注射乳剂（0.3 mg·mL-1，批号200606，北京中海康科技开发公司提供，临用前用5％葡萄糖注射液稀释至所需浓度），MDA、SOD试剂盒（南京建成生物工程研究所）。
1.2 仪器
CL?770全自动生化分析仪，日本岛津公司生产。
1.3 动物
昆明种小鼠，雌雄各半，体质量18～24 g，医科大学第二临床学院医学试验动物中心提供，实验动物生产许可证号SCXK［辽］2003-0013号。
1.4 统计方法
所有实验数据均以±s表示，采用SPSS 11.0统计软件进行方差分析（one?way ANOVA），组间比较采用LSD检验,以P<0.05为差异有显著性。
2 方法
2.1 小鼠断头喘气模型［2］ 取体质量18～22 g的昆明种小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。实验组分别尾静脉丹参酮ⅡA注射乳剂7.8、3.9、1.9 mg/kg；阳性对照组尾静脉注射丹参酮ⅡA磺酸钠注射液5.2 mg/kg；空白对照组尾静脉注射等容量的5％葡萄糖注射液20 mL/kg。给药10 min后，迅速从小鼠双耳后颈部断头，观察小鼠断头喘气的时间及喘气次数，实验结果进行LSD检验。
2.2 小鼠脑卒中模型［3］
取体质量22～24 g的雄性昆明种小鼠50只，分组、给药同实验“2.1”。给药后10 min小鼠用乙醚浅麻醉，分离两侧颈总动脉及迷走神经，左侧颈总动脉连同迷走神经下置一根直径为0.2 mm的细钢丝，结扎后将钢丝抽出，右侧颈总动脉及迷走神经完全结扎。术后按下述指标观察缺血1.5 h内卒中指数，每0.5 小时记录1次，并3次分数总和。评分标准：
（1）毛蓬乱竖起，动作缓慢或活动减少，触耳反应加强，眼睑下垂，脑卒中指数各1分，总计4分；
（2）头翘起，眼球固定，后肢向外向后伸展，转圈，抽搐或痉挛，脑卒中指数各3分，总计15分；
（3）昏迷，脑卒中指数为6分。
2.3 小鼠脑缺血再灌注模型［4］
取体质量22～24 g的雄性昆明种小鼠60只，随机分6组，每组10只，实验组与阳性对照组分组与给药剂量同实验“2.1”，假模型组及模型组尾静脉注射等容量的5％葡萄糖注射液20 mL/kg。给药后10 min，各组小鼠用乙醚麻醉，分离两侧颈总动脉并结扎，导致脑缺血，结扎20 min后松开，恢复颈总动脉血流，造成缺血再灌，小鼠手术后缝合并继续饲养。连续给药3 d，每天1次。假模型组只分离双侧颈总动脉而不结扎。末次给药后30 min将各组小鼠处死，取脑，试剂盒测定MDA的含量及SOD酶活性。
3 结果
3.1 丹参酮ⅡA注射乳剂对小鼠断头喘气时间及次数的影响
丹参酮ⅡA注射乳剂7.8、3.9 mg/kg可以显著延长小鼠断头后的存活时间，增加喘气次数，与空白对照组比较差异显著（P<0.05, P<0.01）, 见表1。
3.2 丹参酮ⅡA注射乳剂对缺血小鼠脑卒中指数的影响
由表2可见，小鼠脑卒中后脑卒中指数明显增加；丹参酮ⅡA预防给药后，小鼠脑卒中指数明显降低，丹参酮各剂量组脑卒中指数与模型组比较差异均有显著性（P<0.05, P<0.01）。
表1 丹参酮ⅡA注射乳剂对小鼠断头喘气时间及次数的影响（略）
Tab.1 The effect of Tanshinone ⅡA emulsion on survival time and gasping time by decapitation in mice
与5%葡萄糖组比较：*P<0.05;**P<0.01
表2 丹参酮ⅡA注射乳剂对脑缺血小鼠脑卒中指数的影响（略）
Tab.2 The effect of Tanshinone ⅡA emulsion on stroke index in mice subjected to cerebral ischemia
与模型组比较：*P<0.05;**P<0.01
3.3 丹参酮ⅡA注射乳剂对脑缺血再灌注损伤小鼠脑内SOD活性及MDA含量的影响
由表3可见，小鼠在脑缺血再灌注后，脑组织SOD活性明显下降，MDA含量显著升高，模型组与假手术组比较差异显著（P<0.01）。与模型组比较，丹参酮ⅡA注射乳剂7.8、3.9 mg/kg的脑组织SOD活性显著上升（P<0.05, P<0.01），MDA含量极显著下降（P<0.01）。提示丹参酮ⅡA注射乳剂能使脑缺血再灌注小鼠的脑组织过氧化程度受到明显抑制，提高机体清除自由基的能力。
表3 丹参酮ⅡA注射乳剂对缺血再灌注小鼠脑SOD和MDA的影响（略）
Tab.3 The effect of Tanshinone ⅡA emulsion on MDA content and SOD activity in mice subjected to cerebral ischemia/reperfusion
与模型组比较：*P<0.05;**P<0.01
4 讨论
当脑缺血发生时，脑微血管系统中存在的谷胱甘肽-谷胱甘肽还原酶自由基清除系统的含量下降［5］，再灌注时则导致微血管周围有大量自由基产生。氧自由基则会损伤血脑屏障，促进脑水肿的形成、血管内皮黏附分子的表达以及白细胞和血小板与内皮的黏附，加重再灌注后脑微循环障碍［6］，因此自由基损伤也是防治脑缺血再灌注损伤的机理之一。MDA是自由基与生物膜不饱和脂肪酸发生脂质过氧化的产物，它的含量反映氧自由基的水平及脂质过氧化的程度。此外，MDA可与核酸及蛋白质发生交联，使之受损。因此，MDA不仅是细胞损伤的代谢产物，而且也是导致细胞损伤的机制之一。SOD是一种金属酶，此酶可以催化超氧自由基发生岐化反应，能够清除氧自由基，保护生物膜免受自由基的攻击损害。
本次试验采用小鼠断头、小鼠脑卒中及小鼠脑缺血再灌注模型，研究丹参酮ⅡA注射乳剂对脑缺血及脑缺血再灌注损伤的保护作用。试验结果表明，丹参酮ⅡA注射乳剂可以升高脑组织内SOD酶的活力，降低MDA含量，延长小鼠断头后的存活时间、增加喘气次数，改善脑卒中小鼠的神经行为。由此可见，丹参酮ⅡA注射乳剂对脑缺血及脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用，该作用的产生可能与其抑制脂质过氧化反应有关。
【】
［1］ 华守明，管耘园，金恒，等.复方丹参对血浆内皮素和一氧化氮浓度的影响［J］.临床药与学，2000，5：363-364.
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