中药复方咽扁糖浆质量标准的制定

             作者：肖引，马勇智，吕洁，李勃，熊小军 

【摘要】  目的: 制定咽扁糖浆质量标准. 方法: 用薄层色谱法对处方中麦冬、金银花进行定性鉴别，用高效液相色谱法测定样品中黄芩苷的含量，采用C18柱(4.6 mm×150 mm, 5 μm)，流动相：甲醇?2 g/L磷酸溶液（40∶60）；检测波长280 nm；流速1 mL/min. 结果: 薄层色谱法鉴别方法专属性强，阴性对照无干扰；含量测定结果表明，黄芩苷进样量在0.1405～1.2641 μg 范围内线性关系良好(r=0.9998)，平均回收率为98.71%, RSD为0.52%（n=5）. 结论: 薄层色谱法准确、简便，专属性、重现性好，可用于咽扁糖浆的质量控制.

【关键词】  咽扁糖浆；色谱法，薄层；色谱法，高压液相；黄芩苷；质量标准

　　　【Abstract】 AIM：  To establish the quality standard for Syropus Yan?Bian. METHODS:   Radix Ophiopogonis, Honeysuckle Flower  in Syropus Yan?Bian were identified by thin?layer chromatography (TLC). The baicalin cotent was determined by high?performance liquid chromatography (HPLC) on C18 column(5 μm, 4.6 mm×150 mm), with a mobile phase of methanol?2 g/L phosphoric acid(40∶60). The flow rate was 1.0 ml/min, and the detection wavelength was set at 280 nm. RESULTS:  Radix Ophiopogonis and Veitchii Lynch were  identified by TLC. The calibration curve was in good linearity over the range of 0.1405-1.2641μg(r=0.9998).The average recovery rate  was 98.71%, and RSD was 0.52%(n=5). CONCLUSION:  The method is simple, reliable and accurate, and it can be used for quality control of Syropus Yan?Bian.

　　【Keywors】  syropus yan?bian;  chromatography,thin layar; chromatogrephy, high pressure liquid  baicalin;  quality standard

　　0引言

　　咽扁糖浆是我院自制中药复方制剂，由麦冬、赤芍、金银花、黄芩等12味中药经提取加工制成的糖浆剂，具有清热解毒、利咽消肿作用，用于急性扁桃体炎、急性咽炎、急性上呼吸道感染等. 为了控制产品质量，我们建立了麦冬、金银花的薄层鉴别，并用高效液相色谱法对黄芩苷进行了含量测定.

　　1材料和方法

　　1.1材料

　　岛津高效液相色谱仪：ShimadzuLC?10Atvp输液泵；ShimadzuSPD?M10Avp二极管阵列检测器；Class?vp工作站；UV?1100紫外可见分光光度计（北京瑞利分析仪器公司），AS10200超声波清洗器（奥特赛恩斯仪器有限公司，天津）. 黄芩苷（批号715?9204）、麦冬、绿原酸（批号110753?200212）对照品均购于药品生物制品检定所. 硅胶G（青岛海洋工厂）；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯；咽扁糖浆（武警陕西总队自制）.

　　1.2方法

　　1.2.1薄层鉴别取麦冬10 mL，加水10 mL摇匀，加稀盐酸10 mL，置水浴上蒸干，残渣加氯仿2 mL使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液. 另取麦冬对照药材2 g加水100 mL煎煮20 min，滤过，滤液加稀盐酸10 mL，与供品溶液同法制成对照药材溶液. 照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅥB）［1］试验，吸取上述两种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯?醋酸乙酯?冰醋酸（12∶4∶0.5）为展开剂. 展开，取出，晾干，置365 nm紫外光灯下检视. 另取金银花10 mL，加水10 mL，摇匀，作为供试品溶液. 另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液. 照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅥB）［1］试验，吸取对照品溶液2 μL，供试品溶液5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸丁酯?甲酸?水（14∶5∶5）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365 nm紫外光灯下检视.

　　1.2.2含量测定色谱柱：Lichrospher  C18柱(4.6 mm×150 mm, 5 μm)，流动相：甲醇?2 g/L磷酸溶液（40∶60）；检测波长280 nm；检测灵敏度0.01 AUFS，流速1 mL/min, 进样量10 μL，柱温35℃［2］. 理论板数按黄芩苷峰应不低于2500. 精密称取在60℃减压干燥4 h的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成1 mL含70 μg的溶液. 精密吸取本品5 mL，置100 mL量瓶中，加入甲醇约80 mL，超声处理20 min，放冷至室温，再加甲醇至刻度，摇匀，取上清液，用0.45 μm的滤膜，过滤，滤液作为供试品溶液. 按处方配比投入缺黄芩的其他药材，制成空白制剂，按供试品溶液制备的方法制备阴性对照溶液. 精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成1 mL含黄芩苷70.23 μg的溶液，精密吸取该溶液2, 4, 6, 8, 10, 12, 15, 18 μL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定黄芩苷吸收峰面积，以黄芩苷吸收面积的积分值为y，进样量为x，线性回归. 再精密吸取对照品溶液10 μL, 注入高效液相色谱仪，供测定6次，以黄芩苷峰面积计算RSd=0.90%（n=6）, 仪器精密度良好. 取同一份供试品溶液，每间隔一定时间，精密吸取10 μL，注入高效液相色谱仪测定1次，共测定6次，以黄芩苷面积计算RSD为0.89%（n=6），表明供试品溶液在15 h内基本稳定. 重复性实验：取同一批样品（051102批）5份，照上述供试品溶液制备方法制备，并按以上色谱条件测定，计算每份样品中黄芩苷含量，并以黄芩苷含量计算RSd=1.26%（n=5），结果表明重现性良好. 回收率试验：取已知含量的样品（051102批），精密称取5份，每份 5 mL，分别置100 mL量瓶中，再精密称取黄芩苷对照品适量，分别加入样品中，按供试品溶液制备方法制备，并按质量标准草案中色谱条件测试，计算回收率. 取三批样品，分别按供试品溶液制备方法制备，用上述方法分别测定黄芩苷含量.

　　2结果

　　2.1薄层鉴别麦冬的鉴别咽扁糖浆供试品色谱中, 在与对照品色谱相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰(图1A)，金银花的鉴别咽扁糖浆供试品色谱中, 在与对照品色谱相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点，阴性干扰（图1B）.

　　2.2含量测定黄芩苷色普图表明，咽扁糖浆黄芩苷达峰时间与黄芩甙对照品基本重合(图2)，运用黄芩甙可作为咽扁糖浆质量控制的参照标准. 以黄芩苷吸收面积的积分值为y，进样量为x，得线性回归方程： y=3×106x-79135（r=0.9998）. 结果表明，黄芩苷进样量在0.1405~1.2641 μg范围内线性关系良好. 5次黄芩苷平均回收率为98.71%, RSD为0.52, 表明该方法回收差异较小, 回收率稳定可靠(表1). 咽扁糖浆3个批号（051102, 051106; 051110）含量测定结果分别为0.596, 0.544和0.573 g/L. 表1    回收率实验数据 （略）

　　3讨论

　　对方中麦冬进行了定性鉴别，展开剂曾分别采用氯仿?丙酮（4∶1）［1］ ，氯仿?甲醇?水（65∶35∶10）［3］，正丁醇?醋酸?水（4∶1∶1）［4］ ，苯?丙酮（10∶1）［5］.  经试验，采用本方法进行定性鉴别，专属性强，重现性好，色谱清晰，阴性对照无干扰. 金银花含有氯原酸，其主要药理作用是清热解毒和抗菌消炎. 黄芩为方中的君药，其有效成分为黄芩苷等，我们采用TCL法以氯原酸为对照鉴别本品中的金银花，专属性强，重现性好，色谱清晰，阴性对照无干扰. 药理研究表明，黄芩苷有抗菌、抗炎、抗病毒、抗过敏、解毒等作用［6］，是本品中的主要有效成分之一，故选用HPLC法测定黄芩苷的含量为本品的含量控制指标. 根据三批样品测定结果，规定本品每1 mL含黄芩按黄芩苷（C21H18O11）计算，不得低于0.45 mg. 该方法重现性好，精密度高，专属性强，适用于咽扁糖浆的质量控制. 

【】
  　　［1］国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部)［M］. 北京：化学出版社, 2005：附录31, 211.

　　［2］康晓春, 张纲, 董桂芳. 高效液相色谱法对甘露颗粒剂中黄芩甙含量的测定［J］. 湖南中医学院学报, 1998, 18(1)：11-12.

　　［3］姜慧祯, 刘清翠. 薄层色谱和紫外光谱法鉴别麦冬及其伪品淡竹叶块根［J］. 山东医药工业, 2001, 20(5)：17-18.

　　［4］吴清秀, 韩冰. 生脉颗粒质量标准研究［J］. 中药材, 1996, 19(12)：634-636.

　　［5］黄秉廉, 周明华. 开宝正胃冲剂质量标准的研究［J］. 中成药, 1993, 15(2)：16-18.

　　［6］张建春, 张华, 施瑛, 等. 黄芩苷研究近况［J］. 时珍国医国药, 2005, 16(3)：247-249.