正交试验法优化淫黄颗粒的提取工艺

【摘要】  　　［目的］优化淫黄颗粒的提取工艺。［方法］采用正交试验法，以提取液中淫羊藿苷的含量为考察指标，对影响水煎提取效果的加水量、浸泡时间、煎煮时间、次数等4个因素进行研究。［结果］淫黄颗粒的最佳提取工艺为A2B2C3，即加水量为8倍，提取3次，每次1.5h。［结论］该实验所优选的工艺稳定，可行。

【关键词】  淫黄颗粒 总黄酮 淫羊藿苷 提取工艺 正交试验

　　Abstract:［Objective］Optimise the extract technical of Yinhuang Granules. ［Method］ Take orthogonal test, take carriin content in extract as observation index, study the 4 factors of water amount, sipping time, decocting time and times influencing the decoction extract result. ［Result］ The best extract technical is A2B2C3, i.e. 8 times for water, 3 times of extract, 1.5h/time.［Conclusion］ The experiment shows the technical is stable and available.

　　Key words:Yinhuang Granules；total flavones；icariin；extract technical；orthogonal test

　　淫黄颗粒系以淫羊藿为君，配伍黄芪而制成的中药复方制剂，具有补气健肾之功效，主要用于肾病综合征的。为确保该制剂的临床疗效，本文采用正交设计方法，以干膏收率和总黄酮提取率为指标，对淫黄颗粒水提取工艺进行优化研究。

　　1  仪器与材料

　　TU?1800PC型紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）。淫羊藿苷对照品（供含量测定用）购自药品生物制品检定所，批号：110737?200312。药材购于杭州康佳医药有限公司，经鉴定符合《中国药典》2005版(二部)［1］规定。

　　2  方法与结果

　　2.1  正交试验设计 

　　选用L9(34)正交表，以干膏收率和总黄酮提取率为考核指标，考察水提取中的加水量（A）、煎煮时间（B）和煎煮次数（C）三个因素，每个因素设三水平。其因素水平见表1。表1  正交试验因素水平表（略）

　　2.2  样品提取液的制备 

　　按处方配比称取药材适量，按正交试验表进行水提取，药液经滤纸滤过，滤液浓缩至1∶2（药材∶药液），备用。

　　2.3  干膏收率的测定 

　　精密量取上述提取液50ml，浓缩至一定体积，移置于已干燥恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥至恒重，干浸膏收率。结果见表2。

　　2.4  总黄酮含量的测定

　　2.4.1  对照品溶液的制备 

　　精密称取淫羊藿苷对照品10.0mg，置25ml容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得（每ml含淫羊藿苷0.4mg）。

　　2.4.2  测定波长的选择 

　　精密量取上述对照品溶液0.6ml，置10ml容量瓶中，加0.1mol/L三氯化铝溶液1.0ml，混匀，加甲醇稀释至刻度，摇匀，于70℃恒温水浴中加热10min，取出后室温放冷。用TU?1800型紫外可见分光光度计，于400～700nm波长范围内扫描，于412.0nm波长处有最大吸收，故选择412.0nm为测定波长。

　　2.4.3  标准曲线的制备 

　　精密量取对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4ml，分别置10ml容量瓶中，各加0.1mol/L三氯化铝溶液1.0ml，混匀，加甲醇稀释至刻度，摇匀，于70℃恒温水浴中放置10min，取出后室温放冷，于412.0nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线（图1），（得标准曲线：y=0.0125c+0.0068(r=0.9999)。淫羊藿苷在7.84～54.88mg/ml浓度范围内呈良好的线性关系。

　　2.4.4  重现性试验 

　　精密量取同一批提取液6份，按含量测定方法制备，并按标准曲线法测定吸收度，RSD=0.94%，重现性良好。

　　2.4.5  加样回收率试验 

　　取已知含量的提取液6份，加入不同量的淫羊藿苷对照品，按含量测定方法制备，并按标准曲线法测定吸收度，加样回收率，结果见表3。平均回收率为101.12%，RSD=0.85%表3  回收率试验结果（略）

　　2.4.6  含量测定 

　　精密量取正交试验提取液1ml，置蒸发皿中，水浴上蒸干后，残渣加甲醇溶解，移入10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取样品溶液2ml，置10ml容量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加0.1mol/L三氯化铝溶液1.0ml”起依法测定吸收度，根据标准曲线计算黄酮含量和总黄酮提取总量，结果见表2。
表2  正交试验设计及干膏收率和总黄酮提取率（略）
   
　　2.5  结果分析 

　　正交试验结果进行方差分析，结果见表4和表5。以干浸膏得率为考察指标，表3～2中极差R值大小显示，各因素作用主次为C＞B＞A；方差分析结果表明：C因素的影响有极显著性差异（P＜0.05），A因素和B因素则均无显著性影响（P＞0.05），以A3B2C3组合为佳。以总黄酮提取率为考察指标，表3～2中极差R值大小显示，各因素作用主次为C＞A＞B；方差分析结果表明：A因素和B因素的影响无显著性差异（P＞0.05），而C因素的影响有显著性差异（P＜0.05），以A2B3C3组合为佳。表4  浸膏得率方差分析表（略）表5  总黄酮提取率方差分析表（略）
   
　　2.6  验证试验 

　　考虑到总黄酮提取率这一指标较重要，同时兼顾省时节能，故拟确定水提取工艺为：A2B2C3。但从表3、5可见，提取次数对总黄酮提取率影响较大，故进一步比较A2B2C3和A2B2C4。取同一批药材，根据处方比例称取药材，按A2B2C4和A2B2C3进行对比验证试验，按上述方法测定浸膏得率及总黄酮含量，结果见表6。表6  验证试验结果（略）
   
　　由表6可见，以浸膏得率及总黄酮提取率为指标，按A2B2C3和A2B2C4进行试验，结果显示两者几无差别，故确定水提取工艺为A2B2C3，即加水量为8倍，提取3次，每次1.5h。

　　3  讨论

　　方中君药淫羊藿具有补肾阳、 强筋骨、祛风湿功效，其主要有效成分是淫羊藿苷和淫羊藿次苷等黄酮类化合物。黄芪为方中辅药，具有补气升阳、益卫固表、利水消肿、托毒排脓、敛疮生肌之功效，含皂苷类、多糖类、黄酮类及氨基酸类等，其中皂苷和多糖类被认为系主要有效成份。根据方中各药的有效成分及其溶解性能，设计确定采用水提工艺。

　　淫黄颗粒系复方制剂，成分复杂。因此，除以干膏收率为考核指标外，同时选择以淫羊藿苷为对照品，测定总黄酮的含量，以综合评价工艺的合理性。结果显示，本方法简便、准确、灵敏，重现性及回收率均符合要求。

　　致谢：本文承蒙硕士生导师孙红祥副教授大力协助，在此深表感谢！

【】
  　　［1］国家药典委员会编.中华人民共和国药典(一部)［S］.2005版，北京：化学出版社，2005．

　　［2］黄秀兰，周亚伟，王伟．淫羊藿黄酮类化合物药理研究进展［J］．中成药，2005，27(6)：719．