正交实验法优选妇科经痛片工艺研究
【关键词】 妇科经痛片
【摘要】目的：优选妇科经痛片的最佳醇提工艺条件。方法：以浸膏得率、延胡索乙素含量为考察指标，采用正交实验法优选提取工艺条件。结果：最佳提取工艺条件为：第一次加8倍量70％乙醇同流1.0小时，第二次加6倍量70％乙醇回流0.5小时。结论：优选出的醇提条件合理，适合化生产。
【关键词】妇科经痛片 正交实验法 延胡索乙素
妇科经痛片系根据湖南民间名老中医经验方研制成的中药复方制剂，具活血化瘀，消滞祛痛之功效，用于妇女原发性痛经。成分由延胡索、当归等九味中药组成。延胡索为方中君药，所含化学成分主要为生物碱，如延胡索甲素（延胡索碱，d-cordaline）、乙素（dl-四氢掌叶防己碱，dl-tetrahydropalmatine）、丙素（原阿片碱，protopine）、丁素（1-四氢黄连碱，1-tetrahydrocoptisine）、戊素（dl-四氢黄连碱）等，其中以延胡索乙素止痛作用最强[1]。其主要有效成分在乙醇中均有较好的溶解性，故将其醇提。为了制定科学的提取工艺，同时保证成药的质量，本试验以总固体物得率和延胡索乙素总提取量为考察指标，采用正交试验法对延胡索醇提工艺进行优选[2]。
1 材料与仪器
1.1 材料 本制剂所用延胡索（Corydalis yanhusuo W.T.Wang）经湖南省药品检验所鉴定，药材购自湖南省药材公司，产地为浙江；延胡索乙素对照品（药品生物制品检定所提供，批号0826-9907）；甲醇，乙醚等试剂均为分析纯；乙醇为药用乙醇。
1.2 仪器 高效液相色谱仪：Watersl525泵，Waters2487紫外检测器，Symmetry C18（5um，4.6×150mm）色谱柱；Waters Breeze（version3.30）高级色谱工作站；Shimadzu Libror AEL 40SM（十万分之一）天平（日本岛津）；H66025超声波清洗机（无锡超声设备厂）。
2 方法与结果
2.1 延胡索的前处理
入药前，除去杂质，洗净，加醋与适量水（以平药面为宜），用文火共煮至透心，水干时取出，切片，干燥，用万能粉碎机粗粉，出粉率不低于93％。
2.2 单因子试验确定提取次数
2.2.1 实验方法 取一定量延胡索粗粉，用70％乙醇加热回流提取三次，加醇量依次为8倍、6倍、6倍，提取时间分别为2h、1.5h、1.5h，过滤。分别收集各次提取液，准确量取体积，备用。从上述三份提取液中各取适量，分别按下述方法测定提取液中总固体物得率与延胡索乙素总量。
2.2.2 总固体物得率的测定 从上述三份提取液中各精密量取适量，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，移至干燥器中，冷却30分钟，迅速精密称定重量，，即得。
2.2.3 延胡索乙素的含量测定[3]
色谱条件：色谱柱：Symmetry C18，（5um，4.6×150mm）；流动相：乙腈-0.1％磷酸（用三乙胺调pH至6.00）（35：65）；检测波长：280m，流速：1ml／min，柱温：25℃。
供试品溶液的制备：精密称取延胡索乙素对照品2.57mg，置2ml容量瓶中，加甲醇超声溶解后以甲醇定容至刻度，摇匀，即得（每1μl含延胡索乙素1.29μg）。
供试品溶液的制备：精密量取提取液适量，水浴蒸干，加1％的盐酸15mi，超声30min使溶解，用浓氨水调pH值至10，加乙醚振摇提取3次，每次20mi，合并乙醚层，于40℃水浴回收乙醚，残渣加适量甲醇超声使溶解并定容至5ml作为供试品溶液。
测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液适量，注入高效液相色谱仪中，按上述色谱条件，以外标法分别测定供试品溶液中延胡索乙素含量，并按下式提取液中延胡索乙素总量：提取液中延胡索乙素总量（mg）=提取液中延胡索乙素含量（mg／ml）×提取液体积（ml）
2.2.4 单因子试验结果 通过实验可知，第三次提取液中，无论总固体物得率还是延胡索乙素总量均己降低（分别占三次总量的5.33％与5.45％）。因此，为方便操作，降低生产成本，确定延胡索以乙醇提取两次。
2.3 正交实验确定最佳提取条件
2.3.1 试验设计 在确定提取两次的基础上，采用正交试验法对延胡索药材醇提的其它工艺条件进行优选。选择乙醇浓度、加醇量、提取时间作为考察因素，以总固体物得率及提取液中延胡索乙素总量为评价指标，用L9（34）正交表安排进行实验。所选因素水平及正交试验方案见表1、2。
表1 因素水平表
2.3.2 正交实验方法与结果 取延胡索粗粉70g，按正交试验设计表（表2）的安排，分别加规定浓度的乙醇回流提取两次，滤过，收集提取液，合并，浓缩至约240ml，加水定容至250ml，备用。精密量取适量浓缩液，分别按上述方法测定总固体物得率与延胡索乙素总量。结果见表2。
表2 试验设计及结果 表3、4方差分析结果表明，以总固全得到率为评价指标，乙醇浓度对其有显著性影响，加醇量对其有极显著性的影响，最佳提取工艺为A1B3C1；以延胡索乙素总量为评价指标，乙醇浓度对其有极显著性的影响，加醇量对其有显著性的影响，最佳提取工艺为A2B3C1。二个提取方案的工艺条件较为相近，仅有因素A（乙醇浓度）不同。因素A对延胡索乙素浸出量的影响更为显著。而提取总工程师固体的多少与有效成分的浸出并不一定完全呈正比关系，相反，乙醇浓度愈小，水溶性杂质成分溶出会更多。70％乙醇提取时延胡索乙素总量明显大于60％乙醇提取的延胡索乙素总量，而且统计学上具有显著性差异（P＜0.01），这也说明7070％乙醇更利于延胡索中醇溶性成分的浸出，因此，A2B3C1醇提工艺条件应该更具有合理性，故选用A1B3C4方案对延胡索进行提取。
表3 总固体得率方差分析
表4 总固体得率方差分析
3 验证实验
取延胡索粗粉，按照正交试验确定的最佳工艺条件A2B3C1进行实验，结果总固体物得率12.65％，延胡索乙素浸出率达88.7％，与正交实验中结果一致。
4 讨论
由方差分析结果可知，乙醇浓度、加醇量对总固体物得率和延胡索乙素提得率均有显著影响，而提取时间仅有一定影响。
在最优工艺条件下延胡索乙素的转移率达88.7％，提取已经比较完全，且验证实验结果表明该工艺稳定可行，适合于大生产。
[1] 徐婷，金昔陆，曹惠明. 延胡索乙素药理作用的研究进展[J]. 临床药学杂志，2001，10（1）：58～60.
[2] 陈 平，邢振荣. 延胡索总生物碱提取与分析方法比较[J]. 中国应用药学，1993，10（6）：15～16.
[3] 龚 青，周 蒂. HPLC法测定延胡素中延胡索乙素的含量[J]. 中国现代应用药学，2001，17（4）：315～317.
