黑升麻对去卵巢大鼠子宫内膜及血清雌激素水平的影响

            作者：胡光民 刘艳 王海颖 颜贵明 胡建鹏 申国明 许浩

【摘要】  为正常对照组、去势对照组、黑升麻组、美雌醇组。除正常对照组外，其余各组大鼠行双侧卵巢切除术，建立更年年期大鼠模型2周后，分别使用美雌醇和黑升麻灌胃干预处理4周，观察各组子宫重量和子宫指数的变化；采用HE染色法观察各组大鼠子宫内膜的变化；应用放射免疫分析法检测去卵巢大鼠血清雌二醇（E2）的水平。结果：黑升麻组与去势对照组相比，子宫重量无显著增加，子宫指数无明显变化，血清E2含量无明显差别（P＞0.05）；子宫内膜萎缩伴有不明显的单层柱状上皮增生。结论：黑升麻对去势大鼠子宫内膜的增生没有刺激作用，同时没有增加去势大鼠子宫重量和子宫指数，对内源性雌激素的水平无影响。

【关键词】  更年期综合征 黑升麻 雌激素 去卵巢 子宫内膜

    　　女性进入更年期后，由于卵巢功能逐渐衰退和消失，雌激素水平明显降低，机体部分组织和器官就会发生退行性或代谢上的变化，出现神经、内分泌失调的症状，这些症状医学上命名为更年期综合征。黑升麻早在40年代初就已被欧美国家用来高血压、经前期综合征以及更年期综合征等疾病，其提取物可有效缓解更年期潮热、烦躁等症状并可促进阴道上皮细胞的增殖和角化[1]。本实验通过雌性大鼠切除卵巢建立更年期模型，使用黑升麻提取物灌胃干预处理4周，观察黑升麻对去卵巢大鼠子宫内膜及血清雌激素水平的影响，探讨临床应用黑升麻治疗更年期综合征无雌激素样刺激作用的安全性。

    1  材料

    1.1  动物  SD成年雌性未孕大鼠40只，体重200～230g，购于安徽长临河医药科技有限公司。实验前置大鼠于室内适应环境1周，室温18～22℃。

    1.2  主要药品和试剂  黑升麻提取物（商品名：希明婷片）山东绿叶制药有限公司，国药准字Z20050748，批号：20060425；美雌醇Sigma-Aldrich；E2放射免疫分析试剂盒（北京北方生物研究所）批号：20050220。

    2  方法

    2.1  动物模型的建立[2]   SD成年雌性大鼠用10%的水合氯醛（0.35ml/100g）麻醉，腹正中线脐下约2cm处，剪除毛发，切开皮肤和腹肌，打开腹腔，分离组织，找到Y型的子宫，在子宫和输卵管的末端视野中可见一乳白色发亮的脂肪团，分离脂肪团，便可见到粉红色的卵巢。先将一侧卵巢和输卵管用丝线结扎，再摘除卵巢。同法摘除另一侧卵巢。术后缝合创口，生理盐水2ml/只腹腔注射，庆大霉素2万单位/只，皮下注射，连续3天。

    2.2  分组与给药  40只SD成年雌性大鼠，随机分为正常对照组（N）、去势对照组（OVX）、黑升麻组（CR）、美雌醇组（E），每各10只，去势后饲养2周予药物处理。黑升麻组：希明婷片研成粉末用蒸馏水配制成1.32mg/ml悬混溶液[3]；美雌醇组：美雌醇用Sesame oil配制成0.1mg/ml的溶液。各组使用相应的药物5ml/mg/d灌胃，正常对照组和去势对照组灌服等量的蒸馏水，连续4周。

    2.3  指标的观察及测定

    2.3.1  血清E2的测定  各组大鼠用10%的水合氯醛（0.35ml/100g）麻醉，腹主动脉取血2ml，离心机3000r 20min取上清，－20℃贮存，送安徽医科大学第一附属核医学实验室检测，严格按放免试剂盒说明书操作。

    2.3.2  子宫重量和子宫指数  各组大鼠断头处死后，解剖取出完整的子宫，精确称量湿重，并按下面的公

    式子宫指数。子宫指数（UMI）=子宫湿重（g）/体重（g）×100%

    2.3.3  组织形态学观察  ①石蜡切片的制作：新鲜的子宫中性甲醛固定5d后，截取Y型子宫交叉处上方段约1cm的子宫组织，常规脱水、浸蜡、包埋，切片厚度5μm。②HE染色：组织脱蜡，常规HE染色，充分水洗，酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，显微镜下观察各组大鼠子宫内膜形态学的变化。

    2.4  数据统计学处理  实验结果均采用均值±标准差（x±s）表示，各组间比较采用方差分析，统计结果用SPSS for windows 11.0软件分析。

    3  结果

    3.1  一般情况  去势对照组与正常对照组相比，大鼠的饮食量明显增加，体重增加较快（P＜0.05）；美雌醇组与去势对照组相比，大鼠的饮食量减少，体重显著降低（P＜0.01）；黑升麻组与去势对照组相比，大鼠的饮食量和体重无显著变化（P＞0.05），见表1。表1 各组大鼠体重的比较（注:与正常对照组相比，**P＜0.01，*P＜0.05；与去势对照组相比##P＜0.01，#P＜0.05。

    3.2  各组大鼠子宫重量、子宫指数和血清E2含量的比较  去势对照组与正常对照组相比，大鼠的子宫重量明显减小，子宫指数显著降低，大鼠血清中E2含量明显降低（P＜0.01）；经过4周的药物干预，美雌醇组与去势对照组相比，大鼠的子宫重量明显增加，子宫指数显著升高，血清E2含量明显升高（P＜0.01）；黑升麻组与去势对照组比较，大鼠的子宫重量无显著增加，子宫指数无明显变化，血清E2含量无明显变化（P＞0.05），见表2。表2  各组大鼠子宫重量、子宫指数和雌激素水平的比较注：与正常对照组相比，**P＜0.01，*P＜0.05；与去势对照组相比，##P＜0.01，#P＜0.05。

    3.3  各组大鼠子宫内膜的比较  正常对照组大鼠子宫切片HE染色显示：管径较粗，内膜较厚、腺体丰富、单层柱状上皮排列整齐。去势对照组大鼠子宫体积明显变小，子宫切片HE染色显示：管壁明显变薄，管腔狭窄，内膜变薄，粘膜层腺体减少，固有层细胞密集。黑升麻组大鼠子宫体积明显变小，子宫切片HE染色显示：内径扩大不明显，内膜萎缩伴有不明显的单层柱状上皮增生。美雌醇组大鼠子宫切片HE染色显示内径扩大，内膜增厚腺体增多、单层柱状上皮排列不规则。

    4  讨论

    　　更年期综合征基本的病理过程中卵巢功能减退，体内雌激素水平下降，引起的以自主神经功能紊乱、代谢障碍为主的一系列症候。西医以激素替代疗法（HRT）为主，补充雌激素虽然能改善及治疗绝经妇女多种病症，对治疗更年期综合征，预防心脑系统疾病、骨质疏松症及老年性痴呆均起了很好的效果，但是长期服用雌激素会促使子宫内膜异常增生，增加子宫内膜癌及乳腺癌的发病机率。

    　　中医学认为妇女在绝经前后，肾精渐亏，天癸将竭，冲任二脉虚损，精血不足，脏腑失于濡养，阴阳平衡失调。因此肾精亏虚为致病为本，伴有心、肝、脾等脏器的功能失调。以往的中药汤剂或中成药治疗更年期综合征，组方较繁杂，药味较多，质量控制困难，标准难以统一。虽然资料也有报道治疗本病的单味中药，如：大豆异黄酮、葛根等[4、5]均能不同程度的改善更年期症状，但后来发现这些药物均具有植物雌激素样作用，增加子宫内膜癌的风险性，增加了使用者的心理负担。

    　　黑升麻（CR）是一种生长在北美东部的毛莨科毛莨属植物，被美洲印地安土著居民用于治疗月经失调、绝经期综合征及其他妇科疾病，其药用部位为根和根茎，主要活性成分包括三萜类、升麻苷、桂皮酸衍生物等。黑升麻提取物用于治疗妇女更年期潮热等症状[6、7]，取得了较好的临床效果。在治疗自主神经紊乱方面，黑升麻提取物与雌激素效果相当[8]，而且黑升麻对于雌激素受体阳性的乳腺癌细胞无雌雄同株激素刺激作用[3]。

    　　内源性雌激素主要通过雌激素受体介导来发挥生理作用，子宫内含有大量的雌激素受体，雌激素或具有雌激素活性的化合物与该受体结合后，可诱发细胞内反应，表现为子宫组织增生。尽管子宫增重实验是评价化合物雌激素活性的常用方法，但由于动物个体差异和检测的人为误差较大，仅用此指标来判断雌激素活性可能会作出错误结论，所以在本次研究中除了用子宫重量还应用子宫指数来判断CR的雌激素活性。

    　　实验结果表明，美雌醇刺激子宫内膜的增生，增加去势大鼠子宫的重量，提高子宫指数；黑升麻对去势大鼠子宫内膜的增生没有刺激作用，同时没有增加去势大鼠子宫重量和子宫指数。而且黑升麻对内源性雌激素的水平无影响，这样在治疗更年期综合征方面有较好的优势，解决了那些恐惧雌激素致癌以及雌激素慎用或禁用的一些疾病如新近患心肌梗塞、脑血管病、子宫内膜癌、有乳腺癌病史、肝肾功能不良、子宫肌瘤、子宫内膜异位症等病人的治疗问题。

    　　黑升麻无明显刺激子宫内膜增生，对内源性雌激素水平无影响，成为治疗更年期综合征最广泛的天然安全药[9、10]。由此推断其作用机制可能为通过组织选择性雌激素受体，或通过其他途径直接影响下丘脑—垂体—性腺轴，尚需要进一步探讨。

【文献】
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