不同品种不同采收期太子参中太子参环肽Pseudostellarin B含量的比较
作者：韩超，陈军辉， 康海宁，王小如， 黎先春
【摘要】 目的分析比较不同品种不同采收期太子参环肽Pseudostellarin B的含量，为合理开发利用太子参的植物资源提供。方法不同品种不同采收期太子参经提取制备后，采用高效液相色谱测定太子参环肽Pseudostellarin B的含量。结果一号品种不同采收期太子参中Pseudostellarin B的平均含量为198.1μg/g，二号品种不同采收期太子参中Pseudostellarin B的平均含量为105.8μg/g。结论 不同品种不同采收期太子参中Pseudostellarin B的含量有差异。
【关键词】 太子参；环肽Pseudostellarin B
Abstract：ObjectiveTo compare the Pseudostellarin B content in different kinds and harvest time of pseudostellana heterophyua and provide reference for rational exploiting and utilizing the plant.MethodsAfter extraction, Pseudostellarin B (cyclic peptide) in different kinds/harvest time of Pseudostellaria heterophylla (Miq.) Pax were determined by Agilent 1100 HPLC.ResultsThe average contents of Pseudostellarin B in No.1 and No.2 Pseudostellaria heterophylla (Miq.) Pax were 198.1μg/g, 105.8 μg/g, respectively.ConclusionThere are differences among the contents of Pseudostellarin B in different kinds of Pseudostellaria heterophylla (Miq.) Pax.
Key words：Pseudostellaria heterophylla (Miq.) Pax； Pseudostellarin B
太子参系常用中药，它为石竹科(Caryophyllaceae) 植物孩儿参Pseudostellaria heterophylla (Miq.) Pax的干燥块根。太子参具有益气健脾、生津润肺之功效，临床用途广泛［1］。Pseudostellarin B具有抑制酪氨酸酶和黑色素产生的活性［2］。不同品种不同采收期的太子参所含化学成分差异较大，本研究选用不同品种不同采收期的太子参进行Pseudostellarin B含量的测定，为合理开发、利用太子参提供实验依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Agilent 1100高效液相色谱仪 (美国, Agilent)：四元泵，DAD 二极管阵列检测器，脱气机，自动进样器；SK3200LH型超声波清洗器 (上海超声波仪器有限公司)。
1.2 试药
Pseudostellarin B对照品(本实验室分离纯化所得)；乙腈(色谱纯，MERCK公司)，实验用水为Milli-Q 超纯水，其它试剂为分析纯。太子参样品均采自福建省柘荣县，由厦门倍尔思生化科技有限公司提供（粉碎，过60目筛，60℃烘干）。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的配制
精密称取10.0 mg Pseudostellarin B对照品，放入10 ml容量瓶中，用甲醇溶解定容制成1 mg/ml的储备液。
2.2 供试品溶液
供试样品(粉碎，过60目筛)在50°C烘箱中干燥12 h，称取1.0 g样品，用50 ml甲醇超声辅助提取45 min，过滤，滤液经旋转蒸发仪真空浓缩至干，用甲醇溶解定容到10 ml容量瓶中，过0.45 μm滤膜后作为供试品溶液。
2.3 色谱条件
色谱柱为大连依利特公司 SinoChromODS-BP (4.6mm×200mm, 5μm)；流动相A:水, 流动相B：乙腈；流速为1.0 ml/min；梯度洗脱条件为：0 min, 2% B; 10 min, 10% B; 30 min, 45% B; 35min, 45% B; 柱温：30℃。在此条件下，对照品和样品的色谱图见图1，峰1为环肽Pseudostellarin B。
2.4 标准曲线的绘制
取上述Pseudostellarin B对照品溶液，在上述色谱条件下进行HPLC分析，分别进样0.5, 1, 2, 5, 10, 20μl，按色谱条件确定峰面积积分值，以峰面积(Y)为纵坐标，浓度(X)为横坐标，绘制标准吸收曲线，进行回归处理，回归方程为Y=3 302.9X+93.02, r=0.999 5。表明Pseudostellarin B在进样量为0.50～20 μg范围内具有良好的线性关系。
2.5 最低检出限实验
在本色谱条件下，使Pseudostellarin B峰高为仪器响应噪声的3倍高，测得Pseudostellarin B的最低检出量约为3.2 ng。
2.6 精密度实验
精密吸取上述一定浓度Pseudostellarin B对照品溶液，在上述色谱条件下重复进样5次，测得峰面积，相对标准偏差，Pseudostellarin B峰面积积分值RSD =0.46%，说明仪器的精密度良好。
2.7 稳定性实验
取配制好的样品溶液，分别于2，8，12，16，24h在上述色谱条件下进行测定，结果RSD =1.64%，该样品溶液24h内稳定。
2.8 重现性实验
精密称取同一份样品5份，按上述方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进行HPLC分析，测的Pseudostellarin B的峰面积，相对标准偏差，结果RSD =1.75%，表明该方法的重现性良好。
2.9 回收率实验
采用加样回收法，精密称取已知含量的太子参样品6份，分别加入一定量的对照品溶液，按上述方法制备供试品溶液，在上述色谱条件进行HPLC分析，计算回收率，结果见表1。表1 回收率测定结果（略）Pseudostellarin B的平均回收率(n=6)为97.68%，RSD为2.37%。结果表明方法的回收率好，方法可行。
2.10 样品含量测定
取不同品种、不同采收日期的太子参，按上述制备供试品溶液，在上述色谱条件进行HPLC分析，将测得的峰面积代入所得出的回归方程，计算Pseudostellarin B的含量，结果见表2～3、图2～3。表2 一号品种不同采收期太子参中Pseudostellarin B的含量（略）表3 二号品种不同采收期太子参中Pseudostellarin B的含量（略）
3 讨论
3.1 提取溶剂的选择 选择甲醇、60%乙醇、80%乙醇和80%甲醇为溶剂，精密称取等量的同一样品，超声提取45 min，进行HPLC测定，结果表明：甲醇提取效果最好，Pseudostellarin B提出率高，且杂质峰干扰少，故选择甲醇为提取溶剂。
3.2 检测波长的确定
Pseudostellarin B对照品溶液在200～400 nm 范围扫描，结果在203 nm处有最大吸收峰，故本研究选择203 nm为检测波长。
3.3 不同品种、不同采收日期的太子参中Pseudostellarin B的含量差异明显，1号品种不同采收期太子参中太子参环肽Pseudostellarin B的含量在不同采收日期是不同的，含量在98.9～ 250.7 μg/g之间,平均含量是198.1μg/g，在采收初期和末期较高；2号品种不同采收期太子参中太子参环肽Pseudostellarin B的含量在不同采收日期也是不同的，含量在67.1 ～ 157.9μg/g之间,平均含量是105.8 μg/g，在采收初期和末期较高。尽管2号品种中Pseudostellarin B的含量要比相应的一号品种中的Pseudostellarin B含量要低，但是Pseudostellarin B的含量随着采收日期的变化趋势和在一号品种中变化趋势相似，其原因还有待进一步研究。
药材的合理采收对于确保药材质量、保护和扩大药物资源有着十分重要的作用。本文的研究结果表明，根据2005年样品的初步分析结果可以看出，1号、2号太子参中Pseudostellarin B含量分别在5月中下旬和6月底7月初比较高。采收太子参，既要考虑Pseudostellarin B含量，又要考虑太子参药材的生物产量，所以建议太子参采收期在6月底或7月初比较合理。本实验结果为民间在6月底或7月初采收太子参药材的经验提供了理论依据。本文对1个生产周期的样品进行了测定，实验结果有待于今后长期的进一步监测证实。
致谢：衷心感谢厦门倍尔思生化科技有限公司对本工作的大力支持。
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［1］李仕海，刘训红. 江苏地产太子参中氨基酸及微量元素的分析［J］.时珍国医国药，2001, 12 (3)：199.
［2］Hiroshi M, Takashi K, Hideyuki K, Hideji I. Pseudostellarins A-C, new tyrosinase inhibitory cyclic peptides from Pseudostellaria Heterophylla ［J］.Phytochemistry, 1994, 50: 6797.
