射用哌拉西林钠/舒巴坦钠（4∶1）药动学研究

          作者：魏敏吉　张慧琳　孙培红　赵彩芸　周颖　赵霞　刘玉旺　赵东方

【摘要】  　　目的 研究比较静脉滴注哌拉西林/舒巴坦（4∶1）复方制剂在健康志愿者中的药动学。 方法 10名健康志愿者分别随机交叉静脉滴注哌拉西林/舒巴坦（2000mg/500mg）复方制剂、哌拉西林（2000mg）、舒巴坦（500mg），用反相高效液相法分别测定血清和尿样中哌拉西林和舒巴坦的药物浓度。 结果 哌拉西林和舒巴坦在体内的血药浓度-时间曲线可以用二室模型进行最佳拟合。所得到的药动学参数为:对单独的哌拉西林和哌拉西林/舒巴坦中哌拉西林cmax 分别为（124.40±20.19）和（138.70±25.53）mg/L;消除半衰期t1/2 分别为（0.80±0.16）h和（0.88±0.39）h;药-时曲线下面积AUC 0-∞ 分别为（129.23±32.91）和（155.81±58.52）mg·h/L;12h尿药回收率分别为（55.4±22.0）%和（43.6±12.3）%。舒巴坦和哌拉西林/舒巴坦中舒巴坦的峰浓度c max 分别为（27.50±3.22）和（35.10±4.68）g/L，药-时曲线下面积AUC 0-∞ 分别为（29.25±4.99）和（44.37±6.48）mg·h/L;消除半衰期t 1/2 分别为（1.03±0.24）h和（1.02±0.15）h;12h尿药回收率分别为（51.8±25.6）%和（41.5±19.4）%。 结论 受试者对三种制剂在30min静脉滴入均耐受性良好，舒巴坦对哌拉西林的体内处置影响不明显，但哌拉西林对舒巴坦的体内处置有明显影响。复方制剂中哌拉西林和舒巴坦的尿排泄率均小于单独给药时的排泄率，提示哌拉西林和舒巴坦可能竞争结合同样的尿路消除位点。

【关键词】  哌拉西林钠/

　　哌拉西林为广谱、半合成酰脲类青霉素，具有抗菌谱广、抗菌作用较强、对铜绿假单胞菌有较好的抗菌作用的特点，但该药易被β-内酰胺酶水解，细菌对哌拉西林耐药率正在逐年增高。舒巴坦为不可逆的β-内酰胺酶抑制剂，2mg/L浓度对II、III、IV、V型β-内酰胺酶有极强的抑制作用，但对I型β-内酰胺酶（某些染色体介导的β-内酰胺酶）无明显作用。哌拉西林与舒巴坦合用可保护哌拉西林免遭β-内酰胺酶破坏，增强哌拉西林的抗酶作用和杀菌能力，具有较好的协同作用。

    体内外抗菌活性试验表明［1，2］ ，哌拉西林钠与舒巴坦钠配伍，不论配比多少（1∶1～8∶1），均可提高哌拉西林钠对产酶耐药菌株的体内外抗菌活性，使其MIC50 降至原值的1/2～1/32倍，同时提高了哌拉西林钠对β-内酰胺酶的稳定性。目前情况下，哌拉西林钠/舒巴坦钠4∶1配比的体外抗菌作用与2∶1配比接近，但由于舒巴坦的价格较哌拉西林高，因此降低舒巴坦的含量可以在保持疗效不变的情况下降低药物成本。

    哌拉西林和舒巴坦复方制剂在人体内的药动学情况目前还没有报道，本品在国内已经被批准上市，本试验旨在评价哌拉西林/舒巴坦（4∶1）在正常健康人体单次给药的药动学，以及药物在体内的分布、代谢和排泄的，为了解该药在人体内的药动学特点以及该药的注册、临床应用提供依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 药品与试剂

    注射用哌拉西林钠/舒巴坦钠为北京双鹤药业有限公司产品，每支1250mg，含哌拉西林1000mg，舒巴坦250mg，批号020320，有效期2年;注射用哌拉西林为湖南威尔曼制药有限公司产品，每支1000mg，批号001102，有效期2年;舒巴坦注射用由湖南威尔曼制药有限公司生产，每支500mg，批号001102，有效期2年。

    哌拉西林（批号0419-9502，含量91.3%）和舒巴坦（批号0302-9612，含量91.0%）标准品均购自 药品生物制品检定所。

    试验中使用的乙腈为色谱纯，JT Baker（美国）;其它试剂为分析纯。试验用水为双蒸水。空白血清为北大提供的健康人血清。

　　1.2 仪器

    Agilent1100Series高效液相色谱仪，美国Agilent公司生产，包括G1310A泵、G1313A自动进样器、G1314A紫外可调波长检测器、G1310A色谱工作站。

　　1.3 研究对象和给药方法

    入选10名健康男性，年龄20～24岁［（22.4±1.2）岁］，身高164～179cm［（172.8±4.8）cm］，体重60～84kg［（69.1±8.8）kg］，经过体检检查合格，无既往病史和药物过敏史，4周内未服用过任何药物。试验前签署知情同意书。10名受试者按标准体重顺序分层随机分为三组，按3交叉法静脉滴注（哌拉西林/舒巴坦）2000mg/500mg或哌拉西林2000mg或舒巴坦500mg。每次交叉试验间隔一周。受试者于服药前一天吃清淡晚餐后禁食12h，受试当天早晨给药后继续禁食4h，哌拉西林钠/舒巴坦、哌拉西林钠、舒巴坦用生理盐水溶解，加入100ml生理盐水中，恒速静脉滴注30min。试验期间采血安排在给药的15min、给药30min结束的即刻以及给药后的15、30、45、60、90、120、180、240、360、480和720min，取静脉血5ml，同时收集0～2、2～4h、4～8、8～12h时的尿样，计总体积后留取部分尿样于-20℃保存。

　　1.4 样品测定方法

    1.4.1 血样本中舒巴坦的HPLC法测定［3］  （1）色谱条件 固定相:Alltima C  18 柱（150mm×4.6mm，5μm）;流动相为乙腈∶0.067mol/L KH 2 PO 4 （2∶98，V/V）;检测波长225nm;柱温为室温;进样量40μL。（2）样本处理方法 取血清标本500μl，加入500μl0.5mol/L HCl酸化，然后用乙醚振摇提取2次，每次2ml，4000r/min离心10min后小心吸取乙醚，合并2次所得的乙醚，至另外一试管中，于40℃水浴中蒸干，残渣用0.2ml流动相溶解后，即可进样分析。  （3）标准曲线的制备和方法学考察

    标准曲线 将舒巴坦标准品用流动相配制成一定浓度的溶液。于健康人空白血清中加入不同量的舒巴坦标准溶液并按照2倍稀释成0.156～20.00μg/ml。按照舒巴坦血样品的处理方法和测定，采用1/y   2 权重加权回归，线性方程为:A=13.202C+0.278，r=0.9952。

    回收率和精密度 用空白血清配制相当于舒巴坦浓度10、1.25和0.3125mg/L的血样各6份，按上述方法处理样本，求得方法学的回收率和标准差，取上述样本连续测定6d，得日间变异系数。

    最低定量浓度 本试验的最低定量浓度可以达到0.156mg/L。

    1.4.2 尿样中舒巴坦的HPLC法测定 （1）色谱条件 同1.4.1（1）。

    （2）样本处理方法 取尿液标本，3000r/min离心分离10min。依据尿标本浓度高低，分别稀释3～100倍，取稀释尿液标本用自动进样进行HPLC分析（3）标准曲线的制备和方法学考察 标准曲线 于受试者空白尿液的稀释液（按照测定时的倍数）中加入不同量的舒巴坦标准溶液，使其浓度在20.00～0.3125μg/ml之间。高效液相法测定药物浓度，以峰面积对标准溶液浓度，采用加权回归，权重为1/Y 2 。线性方程为:A=12.8504C+1.0405，r=0.9962。

    回收率和精密度 用空白尿样配制相当于舒巴坦浓度20、5和1.25mg/L的尿样各6份，按上述方法处理样本，求得方法学的回收率和标准差，取上述样本连续测定6d，得日间变异系数。    最低定量浓度 本试验的最低定量浓度可以达到0.3125mg/L

    1.4.3 血样本中哌拉西林的HPLC法测定［4］ （1）色谱条件 固定相:Discovery C  18 （250mm×4.6mm，5μm），流动相为甲醇∶0.03mol/L磷酸二氢钾水溶液（45∶55，V/V），pH4.33;流速0.7ml/min，检测波长220nm;柱温40℃;进样量20μl。（2）样本处理方法 精密吸取50μl血清样品置5ml离心管中，加入200μl甲醇，涡旋振荡1min，于4000r/min离心5min，吸取上清液，取20μl进样测定。（3）标准曲线的制备和方法学考察  标准曲线 将哌拉西林标准品用流动相配制成一 定浓度的溶液，于健康人空白血清中加入不同量的哌拉西林溶液并稀释成1～200μg/ml。按照哌拉西林血样品的处理方法和测定，采用1/y 2 权重加权回归，线性方程为:A=7.9413C-2.143，r=0.9993。

    回收率和精密度 用空白血清配制相当于舒巴坦浓度200、50和5mg/L的血样各6份，按上述方法处理样本，求得方法学的回收率和标准差，取上述样本连续测定6d，得日间变异系数。

    最低定量浓度 本试验的最低定量浓度可以达到1mg/L。

    1.4.4 尿样中哌拉西林的HPLC法测定 （1）色谱条件 同1.4.3（1）。

    （2）样本处理方法 取尿液标本，3000r/min离心分离10min，取上清夜，依据尿标本浓度高低，分别稀释3～100倍，取稀释尿液标本进自动进样进行HPLC分析。

    （3）标准曲线的制备和方法学考察  标准曲线 于受试者空白尿液的稀释液（按照测定时的倍数）中加入不同量的哌拉西林标准溶液，使其浓度在为1～150μg/ml之间。高效液相法测定药物浓度，以峰面积对标准溶液浓度，采用加权回归，权重为1/Y 2 。线性方程为:A=20.987C-4.679，r=0.9999。回收率和精密度 用空白尿样配制相当于哌拉西林浓度150、50和5mg/L的尿样各6份，按上述方法处理样本，求得方法学的回收率和标准差，取上述样本连续测定6d，得日间变异系数。

    最低定量浓度 本试验的最低定量浓度可以达到1.0mg/L。

    1.5 数据处理

    药动学参数经药动学程序3P97进行拟合计算，计算过程按最佳拟合选择模型。用EXCEL对血药浓度数据进行统计。c  max 为实测值，AUC0-t 为梯形法计算值。

    血药浓度计算公式（二室模型）:C=Ae -αt +Be    -βt  AUC梯形法计算公式:

    AUC 0-t = ∑ （C i +C   i+1 ）（ti+1 -t   i ）/2  AUC  0-∞ = ∑ （C i +C    i+1 ）（t   i+1 -t  i ）/2+C  t /β消除半衰期计算公式:t1/2β =0.693/β 尿累积排泄百分率计算公式:R=（ ∑ CV  i ）/D

　2 结果

    2.1 药物浓度测定方法学

    2.1.1 特异性  在舒巴坦测定条件下对空白尿样、空白血样与加入舒巴坦后的尿样、血样，以及给药后的血样、尿样进行对比，结果显示样品中内源性物质对测定没有影响。在哌拉西林测定条件下对空白尿样、空白血样与加入哌拉西林后的尿样、血样，以及给药后的血样、尿样进行对比，结果显示样品中内源性物质对测定没有影响。

    2.1.2 回收率和精密度  四种方法的回收率和精密度结果见表1。

    2.2 药物浓度测定结果

    2.2.1 血药浓度测定  10名受试者静脉给予哌拉西林/舒巴坦、舒巴坦、哌拉西林后的平均血药浓度测定结果见表2，血药浓度-时间曲线见图1。

    2.2.2 尿药浓度测定结果  10名受试者静脉给予哌拉西林/舒巴坦、舒巴坦、哌拉西林后的平均尿排泄率结果见表3，尿样累积排泄率图2、3。

    2.3 药动学计算

    用3P97程序对试验药哌拉西林/舒巴坦及参比药哌拉西林、舒巴坦进行房室模型模拟，经比较以2室模型，权重W=1/C最佳。经3p97药动学程序处理计算药动学参数，10名受试者的主要药动学参数见表4。

　　3 讨论

    本文对哌拉西林、舒巴坦的血药浓度是分开测定的，对建立的测定方法分别进行评价。分开测定的原因是由于舒巴坦和哌拉西林的极性差别较大，无法在一种色谱条件下使这两个药物同时被测定。

    哌拉西林和舒巴坦在体内保持同步性，有利于两药发挥协同抗菌作用。在给药间隔内高于LOQ的浓度时，哌拉西林和舒巴坦的浓度比在2.5～6.0之间。体外试验已经证明，哌拉西林和舒巴坦4∶1和2∶1表1回收率和精密度  表2 10名受试者静脉给予哌拉西林/舒巴坦、舒巴坦、哌拉西林后的血药浓度（mg/L） 时间（h） 哌拉西林/舒巴坦（4∶1）［1］ ，且比单独的哌拉西林的抗菌活性提高2～32倍。在本试验的给药中和给药后的8h内，哌拉西林和舒巴坦的比例维持在4∶1以内的时间可达4h。本试验的结果显示舒巴坦对哌拉西林在体内的分布消除情况影响不大，而哌拉西林对舒巴坦的分布或消除有影响，推测其原因可能为含量较大的哌拉西林竞争结合舒巴坦的消除位点所致，在我们进行的另外  一个成年人和老年人药动学试验中，试验药物为头孢  哌酮和舒巴坦，其中舒巴坦也出现了相同情况，这一现象还需要经另外试验进一步证实。消除竞争的结果使舒巴坦的体内浓度上升，有利于药物发挥抗菌作用，国外发表的［5］ 也发现哌拉西林与舒巴坦联合使用可以使舒巴坦的浓度提高，AUC增大。

【文献】
  　　［1］王睿，柴栋，方翼，等.哌拉西林/舒巴坦体外抗菌活性研究［J］.临床药杂志，2001，17（4）:272

［2］王琪，刘健，许军，等.不同配比哌拉西林-舒巴坦对545株临床分离菌体外抗菌作用研究［J］.中国抗感染化疗杂志，2003，3（5）:280

［3］魏敏吉，张莉，李家泰，等.国产舒他西林片剂人体生物利 用度研究［J］.中国临床药理学杂志，1997，13（2）:88

［4］张奇志，王峰.国产头孢哌酮/舒巴坦复方制剂的人体药物动力学［J］.中国临床药学杂志，2000，9（2）:75

［5］Wildfeuer A，Schmalreck A，Rader K，et al.Studies on the synergism of sulbactam andβ-lactam antibiotics under in vitro conditions and in healthy volunteers after intra-venous administration ［J］.Arzeim-Forsch/Drug Res，1989，39（1）:94